Nipah病毒一步法Real-time RT-PCR检测方法的建立

目的建立针对Nipah病毒N基因的一步法Real-time RT-PCR检测方法,用于Nipah病毒感染样本的快速准确检测和定量。方法针对Nipah病毒的保守基因N设计引物和探针,建立一步法Real-time RT-PCR反应方法并分析敏感性和特异性。结果所设计的引物经Blast检索可以用于检测所有已知的Nipah病毒株。本研究建立的一步法Real-time RT-PCR方法可以特异性检测出Nipah病毒,不与Hendra病毒产生交叉反应。检测灵敏度为1.1×100～1.1×101copies/μl。标准曲线的线性范围为1.1×102～1.1×106copies/μl。结论本研究建立的一步法real-time RT-PCR方法敏感性和特异性较高,且不易出现污染引起的假阳性结果,适合用于Nipah病毒感染样本的检测。     

新疆部分地区动物Nipah病毒和Hendra病毒感染的调查

拟建立一步法实时RT-PCR检测Nipah病毒(Nipah virus,NiV)、Hendra病毒(Hendra virus,HeV)的方法,对采集自中国新疆部分地区动物外周血样本进行NiV和HeV检测,以获得我国新疆地区的NiV和HeV的病毒流行病学资料.采用NiV和HeV一步法实时RT-PCR检测方法,对2007年9-12月采集的新疆伊犁河谷地区以及巴音布鲁克草原放养的500匹马、100匹驴和160只犬外周血单个核细胞RNA进行NiV和HeV N基因片段检测.结果:对采集的动物血样本进行NiV和HeV核酸检测,成功进行了一步法实时RT-PCR反应,没有发现阳性样本.初步流行病学研究提示我国新疆部分地区天然牧场放养的动物中可能不存在NiV和HeV感染,该地区出现NiV和HeV爆发的可能性较小.     

Hendra病毒一步法Real-time RT-PCR检测方法的建立

目的 建立针对Hendra病毒N基因的一步法Real-time RT-PCR检测方法,用于Hendra病毒感染样本的快速检测和准确定量.方法 针对Hendra病毒的保守基因N设计引物和探针,构建体外转录的RNA片段作为标准品,建立一步法Real-time RT-PCR反应方法并分析敏感性和特异性.结果 所设计的引物经Blast检索可以用于检测所有已知的Hendra病毒株.本研究建立的一步法Real-time RT-PCR方法可以特异性检测出Hendra病毒,不与Nipah病毒产生交叉反应.检测灵敏度为2.6×100～2.6×101copies/μl.标准曲线的线性范围为2.6×101～2.6×107copies/μl.结论 本研究建立的一步法Real-time RT-PCR方法敏感性和特异性较高,且不易出现污染引起的假阳性结果,适合用于Hendra病毒感染样本的检测.     

新疆伊犁河谷博尔纳病病毒种系发生学分析

源相似度为98%,氨基酸序列为100%;德国马He/80汇聚混合支系,核苷酸与氨基酸序列与He/80同源相似度均为100%.结论 新疆伊犁河谷动物宿主中可能存在地源性BDV独立伊犁株,同一BDV感染不同种属动物可能源于外来疫病病原经草原丝绸之路的传播.     

博尔纳病病毒磷蛋白在PC-12细胞内的稳定表达及对其增殖的影响

【目的】建立博尔纳病病毒磷蛋白在神经源性PC-12细胞内的稳定表达体系,初步探讨博尔纳病病毒磷蛋白对PC-12细胞的生长是否有影响。【方法】培养PC-12细胞,用阳离子脂质体的方法将带有博尔纳病病毒磷蛋白基因的表达质粒转染到细胞内进行稳定表达,用荧光显微镜和RT-PCR的方法检测细胞内磷蛋白的表达,用MTT方法检测磷蛋白对细胞生长的影响。【结果】 转染细胞经培养10代后仍然表达目的蛋白,成功建立稳定表达体系。MTT检测显示博尔纳病病毒磷蛋白对PC-12细胞的生长具有明显的抑制作用,其生长明显滞后,但粘附能力增加。【结论】 通过本文建立的体系能在PC-12细胞内稳定表达博尔纳病病毒磷蛋白,该体系可用于进一步深入研究博尔纳病病毒磷蛋白的作用机制,进而为研究博尔纳病病毒持续感染中枢神经系统的机制提供基础。此外本文通过检测细胞的增殖活性发现博尔纳病病毒磷蛋白对PC-12细胞的生长具有明显的抑制作用,可能是博尔纳病病毒持续感染中枢神经系统的重要机制之一。