基于磁珠法的荧光定量PCR检测HBV-DNA临床应用评价

目的评价基于磁珠法的荧光定量PCR检测HBV-DNA的临床应用。方法选用磁珠法定量检测试剂和煮沸法定量检测试剂,对一系列临床患者血清标本进行检测,比较两种试剂检出率的差异;通过浓度为1×108的样本的梯度稀释结果考察两者的灵敏度和线性范围。结果 68例临床样本中,磁珠法试剂检测的阳性率为69.12%,煮沸法试剂检测的阳性率为32.35%(P0.05);两种试剂对103IU/m L阳性样本检测结果:y=0.913x-0.261,r=0.919;磁珠法线性范围3.9×(101~108),灵敏度39 IU/m L,煮沸法线性范围2.4×(102~107),灵敏度240 IU/m L。结论磁珠法核酸提取试剂线性范围宽,灵敏度高,临床检出率明显高于煮沸法,对于高浓度和低浓度样本都能准确的定值,适合于乙肝治疗后监测与体检筛查。     

临床分离纹带棒状杆菌喹诺酮类耐药株gyrA和parC基因突变的研究

目的 探讨gyrA 、parC基因的改变与纹带棒状杆菌耐喹诺酮类抗生素的关系.方法 采用微量稀释法测试纹带棒状杆菌对环丙沙星、左旋氧氟沙星、万古霉素的敏感性.PCR扩增检测gyrA和parC基因喹诺酮类耐药决定区相关片段并测序,在GenBank中进行Blast及BlastX分析并观察氨基酸突变位点,用NcoI酶进行PCR-RFLP.结果 37株纹带棒状杆菌对环丙沙星和左旋氧氟沙星的耐药率为94.6％,30株菌发生双突变(87位Ser突变为phe,91位Asp突变为Ala),5株菌单点突变(87位Ser突变为phe).PCR-RFLP经NcoI酶切后显示,敏感株和耐药株均产生3个条带.结论 纹带棒状杆菌对环丙沙星、左旋氧氟沙星的耐药率较高,对万古霉素全部敏感.纹带棒状杆菌对喹诺酮类抗生素的耐药机制主要是gyrA突变引起的,尤以双突变占优势.纹带棒状杆菌不携带parC基因,不编码拓扑异构酶Ⅳ.     

重症监护病房的病原调查及耐药性监测研究

目的调查浙江中医药大学附属第一医院重症监护病房（ICU）临床分离株的病原分布及细菌耐药状况,并与非ICU相比较,观察二者的区别,为临床用药提供有效的参考价值。方法收集该院2010年1月至2011年6月临床送检的各类标本,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定仪,用GPI、GNI、ANC、YST鉴定卡、AST—GN13、AST—GP67药敏卡进行菌株的鉴定和药敏,根据美国临床实验室标准化协会（CLSI2010）制定的指导原则,判断细菌的耐药率。结果共计分离到2341株细菌,其中ICU有505株占21．6％,非ICU有1836株占78．4％。在ICU分离到的细菌中,革兰阳性菌占23．2％（117／505）;非发酵菌占47．3％（239／505）。在非ICU中,革兰阳性菌占34．4％（632／1836）;非发酵菌20．2％（371／1836）。ICU前3位细菌分别为鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯杆菌、洋葱伯克霍尔德菌。非ICU前3位依次为大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌。非发酵菌中,铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对哌拉西林／他唑巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美洛培南的耐药率,ICU和非ICU差异有统计学意义（P〈0．05）。亚胺培南对ICU铜绿假单胞中的MIC50是非ICU的8倍,MIC。值相当。ICU与非ICU分离的葡萄球菌属细菌对头孢唑啉、环丙沙星、左旋氧氟沙星的耐药率差异有统计学意义（P〈0．05）。ICU和非ICU葡萄球菌对利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁全部敏感。结论ICU患者分离的细菌以革兰阴性菌为主,其中又以非发酵菌占大多数。非ICU患者分离的革兰阳性菌比例明显要比ICU高。在主要的致病菌中,ICU的耐药率明显高于非ICU。     

肠集聚性大肠埃希菌在健康老年人肠道中的分布及其耐药机制研究

目的分析健康老年人肠道中肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)的检出率,并探讨其毒力基因及超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的携带情况。方法取健康老年人的粪便标本分别接种于血平板、SS平板、麦康凯平板进行细菌培养,用全自动微生物鉴定仪和质谱仪鉴定细菌到种;对分离的大肠埃希菌采用双纸片协同法检测其ESBL的表型,用PCR法扩增其EAEC毒力基因astA和aggR;ESBL表型阳性的EAEC菌株用PCR法检测其ESBL基因型。结果在175例研究对象中,共检出160株大肠埃希菌,ESBL携带率为36.30%(58/160);EAEC检出16株(10.00%),其中astA阳性14株(8.75%),aggR阳性2株(1.25%);EAEC菌株的ESBL携带率为56.25%(9/16),其基因型均为CTX-M型,其中以CTX-M-14最多,占66.70%(6/9)。结论本研究获得了健康老年人肠道中EAEC的检出率及其毒力基因和ESBL的携带情况,提示我们EAEC不仅是腹泻患者的病原菌,还可以在健康老年人群中携带,且具有较高的携带率和耐药性,提醒我们加强防范。     

VITEK-2 Compact 仪器法鉴定棒状杆菌属细菌的方法学评价

【摘 要】 目的 评价全自动微生物鉴定系统鉴定棒状杆菌属细菌的准确率及可靠性。方法 分别选用VITEK-2 Compact系统、API CORY系统、Vitek-32系统鉴定37株纹带棒状杆菌，5株无枝菌酸棒状杆菌，两种方法间的比较采用卡方检验，同时以“API CORY系统”为金标准，计算VITEK-2 Compact仪器法的特异性、敏感性。结果 经卡方检验，VITEK-2 Compact系统在鉴定纹带棒状杆菌方面具有很好的一致性，特异性为100%，敏感性为100%，kappa值为1.0；VITEK-2 Compact系统在鉴定无枝菌酸棒状杆菌方面一致性较差，kappa值为0。API鉴定为纹带棒状杆菌的37株菌，VITEK-32均错误的鉴定为干燥棒状杆菌，5株无枝菌酸棒状杆菌在Vitek-32鉴定系统中，生长不良。结论 VITEK-2 compact在鉴定纹带棒状杆菌方面较准确可靠，但在鉴定其他棒状杆菌方面还需进一步研究。Vitek-32系统不能准确的鉴定棒状杆菌属细菌。     

医院血流感染病原菌分布及耐药性分析

目的了解医院血流感染病原菌的分布及其耐药性,为临床治疗提供参考。方法收集2013年1月至12月浙江中医药大学附属第一医院患者血培养标本,采用WHONET 5.6软件对所分离的病原菌及药敏结果进行统计分析。结果 2 017份血培养标本共检出病原菌370株,阳性率为18.34%,其中革兰阳性菌142株占38.38%,革兰阴性菌213株占57.57%,真菌15株,占4.05%。排名前5位病原菌依次是凝固酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、肠球菌属和金黄色葡萄球菌,分别占19.73%、17.03%、13.51%、6.22%和4.59%。除哌拉西林/他唑巴坦对大肠埃希菌和铜绿假单胞菌仍保持较高的抗菌活性外,革兰阴性菌尤其是肺炎克雷伯菌对多种药物均产生了严重耐药性,其中产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别占46.80%和20.00%。革兰阳性菌对利奈唑胺100%敏感,检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)4株,占25.00%,耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNs)占92.00%,耐万古霉素的表皮葡萄球菌1株和耐万古霉素的粪肠球菌3株。结论血流感染病原菌分布复杂,以革兰阴性菌为主,耐药率高,且已出现耐万古霉素的表皮葡萄球菌和粪肠球菌,因此,进行早期监测和耐药性分析非常必要,对控制感染、指导合理使用抗菌药物,减缓耐药菌株的出现具有重要的临床意义。     

细胞因子在小鼠白色念珠菌性阴道炎发病机制中的作用研究

目的观察小鼠白色念珠菌性阴道炎IFN-γ、IL—10、IL-2表达特点,探讨IFN-γ、IL—10、IL-2在小鼠白色念珠菌性阴道炎发病中起的作用及意义。方法选用ICR品系雌性小鼠（8-10周龄）,随机分为对照组、模型组,各组30只。每组又随机分为2、4、8d三个时间点,每个时间点含动物10只。实验组眼球取血分离血清,用固相夹心法酶联免疫吸附法测定IFN-γ、IL—10、IL-2水平。结果实验组IFN-γ、IL-2表达水平较对照组高,差异有统计学意义。IL-10变化不明显。IFN-γ、IL-2组内比较显示,4d〉8d〉2d。结论IFN-γ、IL-2在小鼠白色念珠菌性阴道炎的发病机制中可能起着重要作用。