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重组人胰高血糖素样肽-1的表达及生物学活性 总被引:1,自引:1,他引:0
将人工合成的人胰高血糖素样肽-1(human glucagon like peptide-1, hGLP-1)基因插入质粒载体pET-32a(+)中,构建成rhGLP-1与硫氧还蛋白(thioredox)及六聚组氨酸(hexahistidine)的融合表达载体pET32-GLP-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达菌株,经IPTG诱导发酵的菌体超声破碎后,裂解液用Ni离子亲和层析纯化得到融合蛋白,经肠激酶裂解,再次Ni离子亲和层析,得到rhGLP-1样品。经SDS PAGE 和等电聚焦检测,样品纯度大于90%, 等电点介于pH5.2~pH5.85之间。质谱测定rhGLP-1分子量为3 355.0kDa,肽图分析得到2 097.7kDa和1 005.5kDa两个胰蛋白酶酶解片断,均与理论分析结果一致。动物实验表明重组蛋白具有明显的降血糖活性和促胰岛素分泌作用。 相似文献
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人工合成含有SD序列、胸腺肽α1(Tα1)基因、纯化标签和酶切位点的DNA序列作为构建元件,利用同尾酶将其依次克隆到pET-32a(+)中,得到含有1-8个不同重复数目的含SD序列基因的串联表达载体,利用PCR初步鉴定和进一步的测序证实序列完全正确。进而利用lacZ基因作为指示基因,将带有SD序列的lacZ基因克隆到不同Tα1基因串数载体末尾,利用蓝白斑实验验证启动子后不同SD序列的效率,证实串联载体中的各个SD序列均能有效启动翻译。在此基础上对各串表达载体进行摇瓶发酵,SDS-PAGE电泳检测证实各串均可正确表达Tα1,且为可溶性表达。本文为小肽原核高效表达提出了新方法,有望成为小肽高效表达的新途径。 相似文献
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