可复制性单纯疱疹病毒在抗肿瘤方面的应用

单纯疱疹病毒是肿瘤生物治疗中常用的病毒载体之一,可复制性单纯疱疹病毒以其溶瘤效率高、特异性好、可行性强成为近年来研究的热点。其中对溶瘤性单纯疱疹病毒突变株G207的研究开展得早,其溶瘤效果、靶向性及安全性都得到了确认,这也带动了可复制性单疱病毒应用的发展,目前已研究出多种溶瘤单纯疱疹病毒突变株。本文就近几年可复制性单纯疱疹病毒在抗肿瘤方面的研究现状加以综述,以探讨其临床治疗肿瘤的潜在价值及可行性。     

一种改进的重组腺病毒载体的包装和克隆纯化方法

目的:重组腺病毒载体是目前使用最多的病毒载体之一。常用的AdEasyTM包装系统在制备条件复制型腺病毒时易混有野生型腺病毒或可复制型腺病毒(RCA),在HEK293细胞中包装出的重组腺病毒必须经过2～3轮噬斑的筛选,费时费力。本实验拟对常规包装方法进行改进。方法:将腺病毒载体质粒转染至HEK293细胞过程中的液体培养基更换为琼脂糖凝胶的混合培养液,因为凝胶形成的阻碍,包装出的病毒不能通过细胞-培养液-细胞的方式进行扩散,只能依靠细胞-细胞的方式来扩展而形成病灶(噬斑);然后随机挑选单个噬斑进行PCR鉴定,筛选出特异的目标病毒。结果:采用常规方法在HEK293细胞中初包装出的腺病毒,同源重组产生的RCA已被检测到。采用改进方法制备的重组腺病毒,能排除背景病毒的干扰,使重组腺病毒载体的包装和克隆纯化一步完成;利用此病毒初步在体外实现了对人肝癌细胞的特异性杀伤。结论:改进的方法是一种高效、简便、快捷地包装并纯化重组溶瘤腺病毒的方法,采用该方法包装的重组溶瘤腺病毒能满足实验的需要。