基于果蝇口腔感染的肠道训练免疫模型研究（英文）

目的 利用果蝇作为遗传工具从个体和分子层面研究果蝇的训练免疫效应,并为后续深入研究其分子机制提供依据。方法 首先构建无菌果蝇模型,在此基础上构建果蝇成虫及跨发育阶段训练免疫模型,用两种革兰氏阴性菌——胡萝卜软腐欧文氏菌（Erwinia carotovora carotovora 15）及铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）分别经口腔感染果蝇。在第一次感染完全消退后进行再次感染,然后通过比较果蝇在两个感染阶段的存活率和细菌量来衡量训练免疫的潜在效果。通过实时荧光定量PCR检测相应先天免疫相关基因的表达水平,研究革兰氏阴性菌对免疫缺陷（IMD）通路的诱导作用。结果 果蝇成虫及幼虫初次感染均可提高二次感染后的生存率、细菌清除效率及死亡时能承受的最高细菌负荷;二次感染的果蝇中,IMD通路中免疫反应基因的基础表达比未感染的高,这提供了获得感染抗性的分子基础;果蝇的免疫反应主要发生在中肠,二次免疫比初次免疫的效应更迅速且剧烈;二次免疫的果蝇中,肠道干细胞的数量显著多于初次感染。结论 果蝇肠道中强大的训练免疫可由同源或异源革兰氏阴性菌口腔感染引发,且免疫记忆可在整个发育阶段持...     

中国人胎盘组织ABCB1基因多态性与P-gp表达水平的相关性

为了探讨中国人群胎盘组织中ABCB1基因单核苷酸多态性与其mRNA及蛋白表达水平的相关性,为妊娠期安全用药提供理论依据,本研究选取2016年6月至2018年5月于昆明医科大学第一附属医院正常分娩的200例中国汉族妇女的胎盘组织为研究对象,剪取母体侧胎盘组织,用于DNA、RNA和蛋白质的提取.通过测序确定ABCB1基因rs1045642、rs1128503及rs2032582多态性位点的基因型;采用实时荧光定量PCR和Western blot法测定组织中P-gp的mRNA和蛋白表达水平;对ABCB1基因多态性与P-gp的mRNA及蛋白表达水平的相关性进行分析.研究发现,对于rs1045642、rs1128503及rs2032582多态性位点,各基因型之间P-gp的mRNA及蛋白表达水平差异均无统计学意义(F=0.813,0.219,P＞0.05;F=0.132,0.086,P＞0.05;F=1.617,0.794,P＞0.05).本研究表明ABCB1 rs1045642、rs1128503及rs2032582基因多态性与中国汉族人群胎盘组织P-gp mRNA及蛋白表达水平可能无关.     

7型腺病毒E1A基因克隆及真核表达

为了研究7型腺病毒(Ad7)E1A在感染中的致病机制,分离了Ad7d2病毒株,构建了Ad7 E1A基因的真核表达体系.用A549细胞分离培养痰液标本中的腺病毒,应用重叠延伸PCR扩增Ad7 E1A基因外显子,产物克隆至真核表达载体pIRES-Neo,构建重组子pIRES-Neo-Ad7E1A并转染A549细胞,利用Western印迹对其表达产物进行鉴定.克隆测序显示扩增的Ad7 E1A基因外显子包含了完整的编码区基因,pIRES-Neo-Ad7E1A转染A549细胞的表达产物经Western印迹鉴定与设计相符.成功建立了Ad7 E1A 基因的真核表达体系.     

大肠埃希菌氨基糖苷类耐药株 Aac(3) Ⅱ 基因保守区分析

常规方法分离鉴定47株大肠埃希菌,以标准纸片扩散法(K B法)对其进行常用氨基糖苷类药物敏感性测定,耐药株经PCR检测aac(3) Ⅱ基因保守区,扩增产物进行DNA测序分析。初步探讨大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株与aac(3) Ⅱ基因保守区之间的关系,结果显示本地区大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株的aac(3) Ⅱ基因保守区具65位G、84位T和65位A、84位C两种基因型,且高度耐药菌株皆为65位G、84位T基因型。Abstract:According to standard K B method,bacteriostatic tests were performed to screen out aminoglycoside resistance bacteria from 47 strains of isolated E.coli.To analyze correlations between the degree of E.coli aminoglycoside resistance and aac(3) Ⅱgene conserved region,PCR amplified aac(3) Ⅱgene conserved regions and were analyzed by DNA sequencing.The results showed that there were two species of aac(3) Ⅱgene type including 65G and 84T or 65A and 84C in the samples.Strains with high activity of modifying enzyme to gentamicin all were 65G and 84T aac(3) Ⅱgene type.     

ABPS诱导单核细胞HLA-DR表达

目的研究牛膝多糖(ABPS)在体外激活单核细胞的效应.方法采集健康成人抗凝血,用贴壁法分离单核细胞,调节细胞数接种到24孔板.在370 C,5%CO2条件下,以同一时间不同ABPS浓度或同一ABPS浓度不同时间培养,用流式细胞术和电镜检测单核细胞的激活.结果 ABPS诱导单核细胞超微结构和HLA-DR的改变.结论 ABPS上调HLA-DR表达并能激活单核细胞.     

牛膝多糖抑制大肠埃希菌细胞粘附的实验研究

目的 :研究牛膝多糖能否影响大肠埃希菌对细胞的粘附。方法 :使用 Hela细胞进行了粘附试验及粘附抑制试验。结果 :发现牛膝多糖浓度为 0 .8mg/ml时 ,对细菌的细胞粘附抑制最为明显 ,粘附率由(2 5 7.0± 5 .2 )个细菌 /细胞 降低到 (63 .6± 3 .6)个细菌 /细胞 。结论 :牛膝多糖对大肠埃希菌的细胞粘附具有抑制作用 ,提示该多糖具有调节肠道微生态的潜在应用价值     

快速提取肠道微生物基因组DNA的方法

目的:肠道微生物的研究日益成为热点,如何获取高质量、较完整的肠道菌群基因组DNA是肠道微生物研究中的关键。本文通过对酚/氯仿法提取总DNA过程进行考察和优化,建立一种简便酚/氯仿抽提法。方法:考察和优化酚/氯仿法提取总DNA的过程,并根据DNA产量、纯度以及ERIC-PCR及16S rNDA-RFLP所反映的微生物群落结构特性的指标,并与QIAamp?DNA Stool Mini Kit提取的进行比较,评价了所建立的快速提取方法。结果:用简便酚/氯仿法得到基本完整的基因组DNA,ERIC-PCR和16S rDNA-RFLP结果与QIAamp?DNA Stool Mini Kit法基本相同。结论:该方法快速并成本低,适合肠道微生物研究中总DNA提取,尤其适合处理大批量的样品。     

中药复方对醋酸胃溃疡脾虚大鼠的治疗作用比较

ERIC-PCR(enterobacterial repetitive intergenic consensus-PCR)指纹图谱方法研究四君子汤、理中汤、补中益气汤、益胃汤四种中药复方对醋酸胃溃疡脾虚大鼠的治疗作用.方法:利用食醋灌胃塑造大鼠醋酸胃溃疡脾虚模型,分别提取大鼠健康、模型和复方中药治疗后粪便中的肠道菌群总DNA,并进行ERIC-PCR,建立醋酸模型脾虚大鼠肠道菌群ERIC-PCR指纹图谱,确定其相关特征条带,以各阶段特征条带的净面积和相似性系数为指标,比较四种复方对醋酸胃溃疡脾虚大鼠的治疗作用.结果;益胃汤低中高剂量和四君子汤中剂量治疗后,特征条带500bp净面积显著性降低,相似性系数与模型组相比显著性增加,疗效较好.结论:醋酸模型脾虚主要造成胃溃疡,单纯补气健脾中药治疗效果不明显,益胃汤通过滋养脾胃,对胃溃疡型脾虚有较好治疗效果.     

体内连续进化——从噬菌体到真核基因组的进化故事（英文）

进化是生物多样性产生和保留的自然进程。通过对编码蛋白质的基因进行有目的地设计和改造,获得性能更优异的蛋白质用于生产生活,是蛋白质工程的目的所在。为了在实验室中通过定向进化的蛋白质工程模拟自然进化的实现过程,研究人员通过在快速增殖的原核生物和简单的真核生物中引入靶向诱变元件,建立了各种体内连续进化系统。本综述介绍了体内连续进化平台的现状,重点关注噬菌体和酵母中人工进化技术的研究进展,并对其在生物技术领域中的成功应用进行了总结,最后简要展望了体内连续进化这一新兴领域的发展方向。