雄激素应答元件假冒DNA对PSA基因启动子的抑制作用

研究雄激素应答元件假冒DNA(AREdecoy)对前列腺特异抗原 (PSA)基因启动子的抑制作用 .联合运用报告基因和假冒DNA策略 ,构建了含PSA基因 5′侧启动子区 6 40bpDNA的萤光素酶表达载体pGL3 PSA ,与人工合成的双链硫代ARE假冒DNA共转染前列腺癌细胞株PC3 M并作用不同的时间 (2 4h、4 8h、72h) .应用双萤光素酶测定系统 ,检测萤光素酶的表达活性 .结果显示 :AREdecoyDNA显著抑制报告基因萤光素酶的表达 ,抑制率可达 95 % ,而对照decoyDNA无此作用 .作用不同的时间对萤光素酶活性的抑制无显著性差异     

F344／N－Smu－D大鼠生长发育若干生物学特性的检测

Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４大鼠在国外广泛应用于肿瘤研究与慢性毒性试验,八十年代中期引入我国。我们对Ｆ３４４／Ｎ－Ｓｍｕ－Ｄ大鼠的生长发育的若干生物学特性进行了检测。结果表明,该品系大鼠体型较ＳＤ大鼠与Ｗｉｓｔａｒ大鼠小,除睾丸、垂体、肾上腺、乳腺外的大部分器官与组织的自发性肿瘤的发生率相对较低,将Ｆ３４４／Ｎ－Ｓｍｕ－Ｄ大鼠种群与Ｆ３４４／ＤｕＣｒｊ种群比较,在体重、耗食量,血液学与生化学等方面的若干特性差异较大,肿瘤发生率与死亡差别不大。     

关于一次性输液器具细菌内毒素检查法的质量控制

用细菌内毒素检查法代替家兔热源检查法是我国近年发展起来的新的检验方法,该法具有操作简便、省时、重现性好,灵敏度高等优点,很快被推广。它不仅适用于药厂、药检等大规模生产单位及质检部门,也适用于医院制剂室、供应室及消毒监测部门,既节省人力、物力,又有良好的科学性。但是,细菌内毒素检查法属于生化检验,影响因素较多。例如,所用试剂灵敏度的准确性、实验室条件的标准化、实验操作的规范化等,都将影响实验结果的准确性。     

The RFA regulatory sequence-binding protein in the promoter of

The prostate-specific antigen (PSA), which plays an important role during the liquefaction process of semen, is a differentiation marker for human prostate. It has become the most sensitive marker for monitoring and detecting prostate cancer. PSA as a serine protease can activate some growth factors that might be related to the advancement of prostate cancer by hydrolyzing growth factor-binding protein. The PSA gene is expressed specifically in prostate epithelial cells. The ex-pression of…     

PSA基因启动子中一个与雄激素调节相关的序列

人前列腺特异抗原（PSA）基因的表达受雄激素的调节,其雄激素应答元件（ARE）位于－170附近.为了确定雄激素对该基因的诱导作用是否受ARE上游序列的影响,把PSA启动子区的不同长度的天然的和变异的DNA片段分别与报告基因CAT相连,构建了不同的pBLCAT3-PSA质粒.用它们转染人前列腺肿瘤细胞PC-3.结果表明15 bp的RF15序列（－340～－326）的缺失和变异可显著降低雄激素的诱导作用.区带转移测定表明人前列腺肿瘤细胞LNcap和PC-3中的某些核内调节蛋白可与RF15结合,而且其结合能力受Zn²⁺的影响.这些结果表明RF15可能是PSA启动子中的一个新的附属调节元件.与之结合的调节蛋白可能是通过与雄激素受体的相互作用促进雄激素对PSA基因的诱导作用.     

PSA启动子中RFA调节序列结合蛋白的初步研究

为了确定前列腺特异抗原(PSA)启动子中与雄激素调节相关的序列, 发现PSA启动子ARE上游一段15 bp的区域(-396～-382 bp), 是雄激素受体(AR)对PSA启动子激活所必需的, 将其命名为RFA. 转染和CAT分析显示该序列中某些核苷酸置换可显著降低雄激素对PSA基因启动子的诱导活性, 体外竞争结合实验证实某些前列腺细胞核内的非受体蛋白因子可与其特异结合, 但其突变型则丧失了这种能力, 该序列可能是一个新的辅助性顺式元件. 以RFA为探针, 利用亲和层析分离纯化了RFA结合蛋白, SDS-PAGE和蛋白质初步鉴定结果表明, 该蛋白与已知的多功能蛋白hnRNPA1, A2高度同源. RFA结合蛋白可能作为辅激活因子协同AR对PSA启动子的反式激活作用. 研究结果有助于深入理解PSA启动子的作用机制和组织特异性.     

The RFA regulatory sequence-binding protein in the promoter of prostate-specific antigen gene

To assure what sequence associated with the androgen regulation, a 15 bp region at the upstream of the ARE of prostate-specific antigen (PSA) promoter, termed RFA, was found indispensable for androgen receptor (AR)-mediated transactivation of PSA promoter. In transfection and CAT assays, some nucleotides substitution in RFA could significantly decrease the androgen inducibility for PSA promoter. The in vitro DNA binding assay demonstrated that RFA bound specifically with some non-receptor protein factors in prostate cell nucleus, but the mutant type of RFA lost this ability, so RFA might be a novel accessory cis-element. The RFA-binding proteins were isolated and purified by affinity chromatography using RFA probes. SDS-PAGE and preliminary protein identification showed these proteins possessed sequence high homology with multifunctional protein heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1, A2 (hnRNP A1, A2). RFA-binding proteins possibly cooperate with AR-mediated transactivation for PSA promoter as coactivator. The study results will facilitate further understanding the mechanism and tissue specificity of PSA promoter.