弹状病毒的分子生物学研究进展

弹状病毒包含一大批寄主范围不同的病毒成员,它们可分别侵染哺乳动物、鱼类、昆虫和植物(表1)。除了共同的形态之外,这些病毒还有很多更重要的共性。弹状病毒     

甜菜坏死黄脉病毒的分离提纯及其生物化学特性的研究

本研究工作中,建立了一个有效的甜菜坏死黄脉病毒的分离提纯程序,解决了该病毒粒体易于聚集难以提纯的问题,其操作要点是,(1)通过Sepharose 2B柱层析代替超离心,有效地除去一些小分子量核酸杂质;(2)经PEG再次沉淀浓缩后,调整pH至酸牲(pH3.0),使病毒充分悬浮以减少凝聚;(3)在病毒等电点(pH4.8～4.9)条件下,进一步沉淀以纯化病毒。根据病毒提取物的OD260/OD280比值,算出核酸含量约4.5％。核酸电泳出现4条带,分子量分别为:2.25×10~(?),1.8×10~(?),1.05×10~(?),0.75×10~(?)道尔顿。病毒提取物经超速离心出现4个界面,沉淀系数分别为,200.8S,165S,125.8S,100S。说明甜菜坏死黄脉病毒可能是4组分病毒粒体。病毒粒体含一蛋白亚基,分子量约为2.05±0.05×10~4道尔顿,由16种共199个氨基酸组成。     

水稻齿叶矮缩病毒双链RNA的体外翻译

水稻齿叶矮缩病毒(Rice Ragged Stunt Virus,以下简称RRSV)的基因组双链RNA经羟甲基汞变性处理后,能在兔网状红细胞体外翻译体系中有效地指导蛋白质生物合成。利用该病毒的抗血清免疫沉淀体外翻译产物,结合SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,证明RRSV基因组RNA体外翻译的主要产物有十种左右,其中八种能被该病毒抗血清专一沉淀。用纯化的水稻齿叶矮缩病毒直接作蛋白质电泳分析,证明上述八种体外翻译产物与该病毒结构蛋白的分子量相当。Schiff试剂染色实验未能检测出糖蛋白。     

黄芪对培养的大鼠搏动心肌细胞感染柯萨奇B_2病毒后保护作用的超微观察

前文已经报道应用电子显微镜观察到培养的新生大鼠搏动心肌细胞感染柯萨奇B_2病毒后,细胞超微结构有明显病变,而中药黄芪对柯萨奇B_2病毒感染培养的大鼠心肌细胞所致心肌酶-乳酸脱氢酶及谷草转氨酶的释放,细胞搏动的停止等均有保护作用(待发表资料)。本     

侵染新疆甜菜的两种病毒分离物的研究

在新疆甜菜的根部和叶片分离到两个球状病毒分离物。从病毒形态、生物学及物化性质等研究结果证明这两个分离物实是一种病毒。病毒粒体力２０面体,直径约２８ｎｍ,回接到甜菜上产生环斑和沿脉线纹最后形成坏死斑。此外还侵染苋色藜,昆诺阿黎,番杏,菠菜等,引起局部坏死斑。在普通烟,心叶烟,菜豆,黄瓜,蕃茄上无症状侵染,病毒致死温度为７０℃,１０分钟。体外存括期１３天以上,冻干病叶７年后仍有侵染力。通过ＰＥＧ沉淀、差速离心、琼脂糖柱层析及蔗糖梯度离心,可得到较高浓度的纯化病毒,病毒的紫外吸收最低值在２４５ｎｍ,最高值在２６０ｎｍ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,病毒外壳蛋白的分子量为２．７×１０￣４道尔顿,病毒基因组核酸为三个组份,分子量分别为３．０８ｋｂ,１．２８ｋｂ和０．８５ｋｂ。在琼脂双扩散实验中,能与番茄黑环病毒（ＴＢＲＶ）抗血清产生较弱的沉淀线,与黄瓜花叶病毒（ＣＷＶ）、烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）、烟草坏死病毒（ＴＮＶ）、香石竹环斑病毒（ＣａＲＳＶ）的抗血清不发生反应。     

侵染新疆甜菜的两种病毒分离的研究

在新疆甜菜的根部和叶片分离到两个球状病毒分离物。从病毒形态、生物学及物化物质等研究结果证明这两个分离实是一种病毒。病毒粒体为２０面体,直径２８ｎｍ,回接到甜菜上产生环斑和沿脉线纹最后形成坏死斑。此外还侵染苋色藜,昆诺阿黎,番灰,菠菜等,引起局部坏死斑。在普通烟,心叶烟,菜豆,黄瓜,蕃茄上无症状侵染,病毒致死温度为７０℃,１０分钟。体外存活期１３天以上,冻干病叶７年后仍不侵染力。通过ＰＥＧ沉淀、差速     

我国禾谷类病毒病的病原问题——Ⅷ.玉米粗缩病病原的研究

通过灰飞虱接种传毒,证明玉米粗缩病毒在玉米中引起粗缩病症,在小麦中引起“绿矮”病症,在水稻中引起黑条矮缩病症。这一方面揭示了小麦“绿矮”病的病原本质,也说明玉米粗缩病毒和水稻黑条矮缩病毒可能不止相近而是同一病毒。在玉米或小麦病株的粗抽提净化液中,可见到三种完整程度不同的病毒质粒:(1)完整的病毒,直径70～75毫微米,A突起高11毫微米;(2)去除一层蛋白外壳的直径65毫微米的亚病毒质粒,具有B突起;(3)经胃蛋白酶处理,去除两层外壳蛋白的核心,直径约45毫微米。这种质粒与简单球状病毒类似,很可能是有第三层对胃酶稳定的蛋白外壳。在抽提液中,特别是根部的抽提液中还有管状碎片,其中完整的病毒质粒排列成行。在小麦或玉米病株超薄切片中,可见到直径66毫微米的病毒质粒分散于原生质中,或与亚病毒质粒共存于病毒质体中,或藏于管状结构中。在灰飞虱唾液腺的超薄切片中,也可见到成堆的或在管状物中排列成行的完整病毒。     

柑桔黄龙病病原体的研究——Ⅲ.广东柑桔黄龙病病树中的类菌质体病原

1978年3月、7月、8月,在广东省普宁县的柑桔黄龙病病树上取样进行包埋切片,电镜观察。结果在病树叶脉筛管细胞中见到了类菌质体病原,形态不一,大小为60～700毫微米,双层膜的厚度为20毫微米左右。对病树加压注射盐酸四环素后,病状得以减轻,以至消失,长出新梢表现正常,提高了座果率,果实大小和品质正常。