小鼠2-细胞胚胎单个卵裂球体外培养及其发育形成囊胚的玻璃化冷冻保存技术的研究

单个卵裂球分离和培养是生产同卵双胎或一卵多胎动物的一种有效方法。在羊和牛已经获得了来源于2-细胞和4-细胞期胚胎的单个卵裂球的活体后代;在兔也获得来源于4-细胞胚胎的单个卵裂球后代;在猪已获得8-细胞单个卵裂球的后代。但多数的研究者发现,小鼠单个卵裂球培养后的体外发育率、移植妊娠率和产仔率都很低。上述均为新鲜胚移植结果,至于分离后卵裂球发育成的囊胚再进行玻璃化冷冻保存尚未见报道。本实     

不同原因桡神经损伤手术前后护理研究与康复治疗

目的:观察桡神经损伤显微外科手术前后护理与康复治疗的效果.方法:本组39例患者,均在伤后1小时-6个月后分别行神经吻合术和神经松解术,术前、术后予以特殊护理与康复治疗.结果:随访6个月-6年,在39例中,优24例;良11例;可3例;差1例.结论:桡神经损伤后应尽早行显微外科手术及术前、术后予以特殊护理与康复治疗,可获满意疗效.     

40例糖尿病足高位截肢患者护理方法及康复锻炼的研究

目的:探讨糖尿病足患者行高位截肢术后护理方案和康复锻炼效果.方法:本组40例老年糖尿病足坏疽均行高位截肢术,术前、术后予以特殊护理与康复治疗.结果:随访3个月-3年,40例患者中,痊愈出院36例(90%);糖尿病截肢断端感染2例(5%);因严重感染死亡2例(5%);术后患者经过康复锻炼,残肢浮肿者4例(10%);关节挛缩3例(7.5%);畸形无.结论:糖尿病足患者行高位截肢术后护理方案和康复锻炼效果,疗效满意.     

VSD联合带腓肠神经营养血管逆行岛状皮瓣治疗胫骨慢性骨髓炎的术后护理及功能锻炼

目的:观察封闭式负压引流(vacuum sealing drainage,VSD)联合带腓肠神经营养血管逆行岛状皮瓣治疗胫骨慢性骨髓炎的术后护理及功能锻炼的效果.方法:2009年1月-2009年11月,收治28例胫骨慢性骨髓炎患者,采用VSD待创面肉芽组织新鲜、感染控制后,用带腓肠神经营养血管逆行岛状皮辩治疗胫骨慢性骨髓炎,术后予以特殊护理与康复治疗.结果:28例患者术后予以特殊护理与康复治疗,皮瓣顺利成活.28例患者均获随访,随访时间1～10个月.皮辩与周围皮肤色泽相似,无臃肿,两点辨别觉6～8mm.术后能穿鞋正常行走,皮瓣受力处无破溃.结论:VSD联合带腓肠神经营养血管逆行岛状皮瓣治疗胫骨慢性骨髓炎,术后予以特殊护理与康复治疗,疗效满意     

绵羊羊膜上皮细胞治疗兔桡骨缺损模型的研究

为了确定绵羊羊膜上皮细胞在体内向骨组织的分化能力,实验在分离培养绵羊羊膜上皮细胞并对其进行干细胞特性的鉴定的基础上,制作新西兰大白兔桡骨13mm骨缺损模型,随机分组对其进行注射绵羊羊膜上皮细胞实验。高剂量组:移植细胞5×107个;低剂量组:移植细胞5×106个;对照组:生理盐水。细胞移植后2、4、8周拍摄X光片观察骨缺损部位的缺损修复情况;相应时段取骨缺损部位新生骨进行组织学观察:分析骨小梁生成数量和骨的改建时期。实验结果显示,高剂量实验组在移入细胞第8周,骨缺损完全修复,且同期高剂量组新骨生成的数量和质量明显高于低剂量组,低剂量组优于对照组。由此可见,绵羊羊膜上皮细胞不仅可以在不同种动物间进行移植,而且对骨缺损有良好的修复能力。     

小鼠2—细胞胚胎单个卵裂球体外培养及其发育形成囊胚的玻璃化冷冻保存技术的研究（简报）

The present experiments were designed to study the effects of glucose, EDTA, glutamine on the in vitro development of single blastomeres from 2-cell embryos in mouse, and the efficiency of cryopreservation of blastocysts from single blastomers with different vitrification. Single blastomeres derived from female ICR x male BDF1 2-cell embryos were cultured in mKRB with or without glucose, EDTA and glutamine, respectively. The expanded blastocyst rates were significantly different between in mKRB with glucose and without glucose (34% vs 65%); The blastomeres were cultured in mKRB with EDTA and glutamine but glucose, the expanded blastocyst rate (90%) was significantly higher than other groups. The blastocysts derived from single blastomeres were vitrified in liquid nitrogen after equilibration in GFS40 for 0.5-2 min, the survival rate 24%-51%. The blastocysts were pretreated in mPBS with 10% glycerol for 5 min, followed by exposure to GFS40 at 25 degrees C for 0.5 min, then vitrified in liquid nitrogen(two-step method), the survival rate was 61%. However, the survival rates increased to 64% and 70% when the blastocysts were vitrified(one-step method) ater equilibration in EFS40 at 25 degrees C for 0.5-1 min.     

不同温度条件下小鼠囊胚OPS法玻璃化冷冻保存技术的研究

本实验采用OPS法在不同温度条件下对小鼠囊胚实施冷冻保存,研究用EDFS和EFS溶液冷冻保存囊胚的效率和提供不同温度下筛选玻璃化溶液的依据,为家畜和人类胚胎的冷冻保存建立模型。25℃室温和37℃恒温台条件下OPS一步法冷冻保存小鼠囊胚,EFS40和EDFS40冷冻组扩张囊胚率(92.31%,92.30%)与对照(97.26%)均无显著差异(P>0.05),但EDFS40孵化囊胚率(59.62%)显著低于对照组(83.56%)(P<0.05);二步法冷冻结果显示,采用EDFS30和EFS40均能高效保存小鼠囊胚,解冻后扩张囊胚率(95.69%和95.05%)和孵化率(80.48%和78.95%)与对照无显著差异(P>0.05)。当改为25℃室温不使用恒温台条件下,一步法冷冻的胚胎解冻后,仅EDFS40冷冻组扩张囊胚率和孵化囊胚率(85.96%和75.44%)与对照(96.05%和82.89%)无显著性差异(P>0.05);实施二步法冷冻的胚胎,解冻后EDFS30,EDFS40和EFS40组均获得理想效果,扩张囊胚率(92.03%-95.31%)及孵化囊胚率(67.19%-76.76%)与对照均无显著差异(96.05%和82.89%)(P>0.05)。据体外发育结果,选择最佳冷冻组胚胎移植给假孕4d的受体母鼠,其妊娠率和产仔率(90.90%和37.33%)与新鲜胚对照组(91.67%和42.33%)无显著差异(P>0.05)。结果证实,EDFS30、EDFS40和EFS40三种冷冻液在不同的温度条件和采用不同冷冻程序,均能成功保存小鼠囊胚。     

小鼠2,4,8—细胞胚胎卵裂球体外培养的研究

以ＣＺＢ为基础培养液,培养小鼠２、４、８－细胞胚胎的卵裂球,研究葡萄糖、牛磺酸和胰岛素对１／２卵裂球体外发育的影响及１／４、１／８和２／８卵裂球的体外发育规律。２－细胞胚胎卵裂球在ＣＺＢ中和在添加牛磺酸的ＣＺＢ中培养,其囊胚发育率（分别为９２％、８９％）无显差异（Ｐ＞０．０５）。胰岛素在少量葡萄糖存在的情况下,不影响卵裂球的囊胚发育率;在无葡萄糖时,卵裂球的囊胚发育率（３８％）显降低。牛磺酸在     

冷冻前后的低渗应激对小鼠孵化囊胚存活率的影响

本试验用10％或20％GL预处理5min,再移入GFS40中平衡0．5min二步法冷冻保存的小鼠孵化囊胚,解冻后24h内恢复率高达93％－97％,与对照组(99％)相比无显著差异(P＞0．05)。新鲜孵化囊胚在低渗液中平衡30min,0．25×PBS组恢复率达92％,而0．20×PBS组恢复率仅为50％,与对照组相比差异极显著(P＜0．01)。冷冻解冻后孵化囊胚直接进行低渗处理,结果0．50×PBS组的恢复率(72％)与对照组(88％)差异显著(P＜0．05),而0．30×、0．25×和0．20×PBS组的恢复率分别为58％、11％和0％。解冻后经培养的孵化囊胚对低渗处理的耐受力增强,0．50×PBS处理组的恢复率达94％,与对照组(98％)相比无显著差异(P＞0．05),0．30×、0．25×和0．20×PBS组的恢复率与对照组相比虽有极显著差异(P＜0．01),但与解冻后直接进行低渗处理组相比恢复率有较大提高(82％－26％)。