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转基因鱼工作的开展被用于水产科学基础与应用研究的各个领域。应用方面的一项重要研究就是利用转生长激素基因来提高鱼的增长速度。需要解决两个问题:一是转基因鱼所使用的基因元件;二是外源基因的高整和率与高表达。已有许多报道认为:不同种动物的生长激素不一定相互促进生长。我们通过显微注射,将鲤鱼金属硫蛋白启动子(cMT)与大马哈鱼生长激素基因(sGH)的融合基因(cMTsGH)导入鲤鱼单细胞后期的早期胚胎,构建了全鱼转基因鲤鱼。通过斑点杂交、Southernblot结合PCRSouthernblot,对外源sGH的整和进行了精确的检测和分析。实验选取性成熟鲤鱼,收集卵子和精子,湿法受精获得受精卵。经过基因注射,孵化后的鱼苗放入水族箱。待鱼苗平游,提取总DNA进行检测。以PstI酶切质粒pcMTcGH(Fig.4)分离3.4KbsGH片段,用随机引物标记,作为杂交探针。同时,设计并合成sGH基因的PCR特异引物。Fig.1的斑点杂交结果与Fig.2的PCRSouthern结果相比较(Table1),说明斑点杂交存在着高的假阳性。而PCRSouthern将PCR的快速、方便与Southern的准确性相结合,排除了P 相似文献
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全鱼基因的构建及其在鲫鱼体内的整合与转录 总被引:6,自引:0,他引:6
利用PCR技术删除大麻哈鱼生长激素基因的启动序列,通过基因重组构建出全鱼基因(鲤鱼MT启动子-大麻哈鱼生长激素基因);以融合全鱼基因为外源基因,通过显微注射方法将其线性片段导入鲫鱼受精卵内,研究其整合与转录效率。结果表明,全鱼基因在鲫鱼基因组中的整合率为36.4%(16/44),对转基因阳性鱼的RNA样本进行Northern印迹杂交检测,转录率为25%(1/4)。因此,该全鱼基因可以作为转基因鱼研究和应用的外源基因。 相似文献
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