石蜡组织荧光原位杂交关键实验步骤探讨

目的：探讨石蜡组织荧光原位杂交（FISH）技术中关键实验步骤的最佳条件,以期提高石蜡切片FISH阳性细胞检出率和实验成功率。方法：在前期标本处理方面,进行双蒸水、0．5×SSC溶液、0．1％硫代亚硫酸钠溶液煮沸对比;在蛋白酶消化方面,设置胃蛋白酶和蛋白酶K两种消化方法,并在37℃条件下设置时间的梯度变化,比较其消化效果;对石蜡切片的变性设置温度梯度,比较杂交检出率;比较DAPI复染时不同浓度对单色、双色FISH结果的影响;应用抗淬灭剂后不同保存时间的对比。结果：采用0．5×SSC溶液煮沸15min,用200μg／mL蛋白酶K在37℃、6～10min条件下消化,可以取得较好的FISH效果;变性温度为81℃时检出率更高,DAPI复染浓度为1000ng／mL时针对单色FISH较合适,而浓度为500、150ng／mL时针对双色／多色FISH有较好的效果。结论：FISH条件经过对比得到优化,对石蜡组织FISH实验具有一定的指导意义。