电泳核型分析在丝状真菌研究中的应用

电泳核型分析在丝状真菌研究中的应用邢来君,李明春（天津南开大学微生物学系,天津３０００７１）ＤＮＡ分子的分离技术是分子生物学研究中的关键技术之一。目前最通用的分离技术是琼脂糖凝胶电泳［１］,但分离的ＤＮＡ分子大于５０ｋｂ时,该方法已不能获得令人满意的...     

鼻咽癌ALDH1~+细胞具有上皮细胞-间质转化的性质

目的:探讨鼻咽癌ALDH1+细胞是否具有上皮细胞-间质转化的性质。方法:利用ALDEFLUOR试剂分选鼻咽癌ALDH1+细胞和ALDH1-细胞,Transwell及Boyden小室实验分析ALDH1+细胞和ALDH1-细胞的侵袭、迁移能力;实时定量PCR及Western blot检测E-cadherin、Vimentin、Snail及Twist基因在ALDH1+细胞和ALDH1-细胞mRNA和蛋白表达水平。结果:与ALDH1-细胞相比,ALDH1+细胞侵袭及迁移能力明显高于ALDH1-细胞;而且ALDH1+细胞中E-cadherin的mRNA和蛋白水平明显低于ALDH1-细胞,相反,ALDH1+细胞中Vimentin、Snail及Twist的mRNA和蛋白水平明显高于ALDH1-细胞。结论:鼻咽癌ALDH1+细胞可能具有上皮-间质转化的性质,这将为阐明肿瘤细胞在侵袭、转移中的机制提供理论基础。     

利用长引物嵌套式反向PCR方法克隆雅致枝霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列

用限制酶EcoRⅠ、KpnⅠ分别对雅致枝霉As32806基因组DNA进行消化,而后在低浓度条件下利用T4DNA连接酶使DNA自身环化。根据已知基因序列,设计一对长度为35nt的长反向引物和两对较短的引物,以基因组连接产物为模板,通过三轮嵌套式PCR反应,获得一长度约为4kb的扩增片段。经序列测定表明得到了Δ⁶-脂肪酸脱氢酶基因上游序列约为1.3kb,初步序列分析显示该序列为一潜在的启动子序列。     

米曲氨基酰化酶菌株的选育*

利用原生质体融合技术对米曲霉3042和米曲霉10B,进行了营养互补融合。以30%PEG(MW=6000)、0.01mol/L CaCl₂、0.05mol/L Gly做为融合剂,融合频率达到0.47%。共获得26株绿色融合株,并对其杂合二倍体的孢子进行了PFA和UV的诱发分离,获得一株生长速度快、氨基酰化酶活性高的单倍体菌株。     

深黄被孢霉Δ6—脂肪酸脱氢酶基因导入大豆

采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功地将深黄被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因导入大豆。从发芽5—7d的大豆菌苗切取子叶节外植体,经农杆菌浸染和共培养后,在含50mg/L卡那霉素的选择培养基上培养2-4w后,从子叶节处诱导出抗性不定芽,将不定芽转移到伸长培养基上,4-6w后长至2-3cm高的再生苗,再将再生苗切下转入生根培养基,2-6w生根,生根后的再生植株经逐渐锻炼移入花盆中,部分移栽成活的T0植株能正常开花结荚。从T0植株上收获T1种子,按株系种植。T0和T1代经PCR检测和DNA分子杂交分析,证明外源基因已导入并整合到大豆的基因组内并能遗传给后代。     

深黄被孢霉M_(6-22) Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中的表达

应用PCR技术 ,从含有深黄被孢霉Δ6 脂肪酸脱氢酶基因的重组质粒pTMICL6中 ,扩增出 1 38kb的目的片段 ,亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2 .0 ,在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒pYMID6,用醋酸锂方法转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVSc1中 ,在SC Ura合成培养基中 ,选择到酵母工程株YMID6。在合适的培养基及培养条件下 ,加入外源底物亚油酸 ,经半乳糖诱导后 ,收集菌体。通过GC MS对酵母工程株所含的全部脂肪酸进行色谱分析 ,结果表明 ,γ 亚麻酸的含量占酵母总脂肪酸的 8 69%。     

Δ6-脂肪酸脱氢酶的分子生物学研究进展

包括γ-亚麻酸在内的多不饱和脂肪酸由于在人类健康中的重要作用而成为有价值的产品,目前市场上对γ-亚麻酸的需求持续增长,然而当前来源难以满足市场的需求,寻找合适的替代来源将有助于解决这一问题。Δ⁶-脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪酸合成途径中的限速酶,这里从Δ⁶-脂肪酸脱氢酶的基因克隆、结构和功能的研究、系统进化和基因工程应用等方面探讨了Δ⁶-脂肪酸脱氢酶的研究进展。     

接骨木化学成分及杀鼠活性初步研究

采用试管预试法初步确定了接骨木茎叶中所含化学成分,研究结果表明,其中含有生物碱、甾体成分、蒽醌及其苷类、三萜皂苷、香豆素及其苷类、酚性成分、鞣质、油脂、黄酮类化合物等化学成分。对接骨木茎叶杀鼠活性的测定表明,饵料中接骨木含量为20％时,对小白鼠的毒杀率为80％;在含量为15％时,毒杀率为30％,在含量为10％时,毒杀率为10％;以家鸡进行二次中毒试验,试验过程中无死亡现象发生．     

高山被孢霉ATCC16266Δ6-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中的表达

Δ⁶-脂肪酸脱氢酶是形成γ-亚麻酸的关键酶。从含有高山被孢霉Δ⁶-脂肪酸脱氢酶基因的重组质粒pTMACL6中,酶切出14kb的目的片段,亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2.0,在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒pYMAD6,用醋酸锂方法转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INCSc1中,在SC-Ura合成培养基中,选择得到酿酒酵母工程株YMAD6。在合适的培养基及培养条件下,加入外源底物亚油酸,经半乳糖诱导后,收集菌体。通过GC-MS对酵母工程株进行脂肪酸色谱分析,结果表明,产生了31.6%的γ-亚麻酸。这是迄今为止,国内外Δ⁶-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中表达量最高的报道。