志贺氏菌属virG基因半抗原——Digoxigenin标记探针的制备及其同源性分析

用半抗原——Digoxigenin标记的福氏2a YSH6000的1．4kb virG DNA探针,检测73株痢疾杆菌(宋氏64株、福氏5株、志贺氏4株)、32株EIEC、17株耶氏菌属菌、5株伤寒杆菌和5株大肠杆菌的DNA同源性。前3种菌同时作Sereny试验,以进行比较。结果表明,痢疾杆菌及EIEC中均含virG同源区,其它被测菌则无此同源区。virG DNA仅与痢疾杆菌及EIEC的Sereny试验相关．而与耶氏菌属的Sereny试验无关。用virG DNA探针检测宋氏痢疾杆菌及EIEC的毒力,与Sereny试验结果比较。符合率分别为87．5％和90．9％。     

球形与螺旋形幽门螺杆菌基因表达差异的研究

目的：从基因转录水平了解球形幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)基因表达的变化。方法：幽门螺杆菌标准株NCTC ll637和2株临床分离株,经抗生素—灭滴灵诱导球变。提取等菌量螺旋形和球形Hp的RNA,RT—PCR扩增Hp25种基因,这些基因包括毒力基因(kat、aphA、rdxA、frxA、cysS、ureB glmM、cagA、vacA、fldA、iceAl、hpaA、fliD、napA、oipA、alpAB、babB、hopZ);看家基因(scoB、atpD、g1nA、recA)和功能不明的外膜蛋白基因(hopW、hopX)。扩增产物经分子定量成像系统进行扫描定量。结果和结论：等菌量的球形HpRNA量比螺旋形Hp减少。NCTC ll637、F44和F49菌株的螺旋菌分别有25、20、19个基因RT—PCR阳性,对应的球形菌相应的基因RT—PCR也为阳性。定量分析结果表明：被检测的基因在球形菌中的表达均比螺旋菌降低。提示球形菌致病性的降低与基因的低表达有关。3株球形菌不同基因表达的变化并不完全一致,表达量变化较小且各菌间较一致的是g1mM、oipA、g1nA;表达量变化较大且菌问较一致的基因是：napA、sodB、recA、fliD。     

球形幽门螺杆菌分子生物学研究

为研究幽门螺杆菌（ＨＰ）球形变异本质,作者通过延期培养和采用亚抑菌浓度抗生素,使３株ＨＰ发生球形变异,对弯曲形和球形ＨＰ作了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹及４个毒力基因片段ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱显示球形ＨＰ分子量在７４×１０４以上的蛋白含量减少,免疫印迹显示球形ＨＰ１２５×１０４蛋白条带反应减弱,而抗生素诱变的球形ＨＰ分子量为１１×１０４和６３×１０４的蛋白条带反应增强。ＰＣＲ及ＰＣＲ－ＳＳＣＰ结果表明球形ＨＰ的ｈｐａＡ,ＶａｃＡ,ＣａｇＡ和ＵｒｅＡ４个毒力基因片段未发生缺失,但在ｈｐａＡ或ＶａｃＡ基因中存在点突变     

球形幽门螺杆菌对SGC-7901细胞增殖的影响

目的:了解球形幽门螺杆菌对体外培养细胞增殖的影响.方法:采用抗生素诱导幽门螺杆菌标准菌株NCTC11637球变,将弯曲形和球形菌的菌悬液(1×108个/ml)作5倍梯度稀释,而后分别加入胃癌上皮细胞SGC-7901,共孵育3 d后,用MTT法检测SGC-7901细胞增殖的情况.结果:高浓度的弯曲形和球形幽门螺杆菌(＞8×107个/ml)可明显抑制细胞的增殖(P＜0.05);低浓度的球形幽门螺杆菌(＜1.28×105个/ml)可明显促进细胞的增殖(P＜0.05).结论:球形幽门螺杆菌在体外可影响SGC-7901细胞的增殖.     

幽门螺杆菌ureB基因转染胃上皮细胞及其对细胞的作用

研究幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)ureB基因重组子转染胃上皮细胞后对胃上皮细胞的作用。用PCR方法从Hp标准株NCTC116 37中获取ureB全长基因 ,将其开放读码框架定向克隆入真核表达载体pcDNA3 1;获得的重组子转染SGC 790 1细胞 ,筛选耐潮霉素的细胞克隆 ,用RT PCR方法检测细胞内ureB基因在转录水平的表达 ;分别用荧光染色技术、MTT、流式细胞术检测UreB对细胞表型、增殖、凋亡及细胞周期的影响。UreB阳性表达的细胞 (SureB)胞膜出芽、细胞皱缩 ;用MTT法检测细胞增殖 ,结果表明 ,SureB细胞与SpcDNA3 1细胞比较 (pcDNA3 1转染的细胞 ) ,生长增殖无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,流式细胞术检测细胞凋亡结果显示 ,SureB的凋亡率显著高于SpcDNA3 1(P值为 0 0 0 7) ;细胞周期分析显示 ,SureB细胞有S期比率增高、G2 M、G0 G1 期比率下降的趋势。ureB在培养细胞内的表达可促进细胞凋亡     

幽门螺杆菌jhp947基因对C57BL/6小鼠致病性研究

摘要：【目的】 检测jhp947对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp )所致动物胃上皮细胞病变和基因表达的影响。【方法】 将27只无特定病原体的（specified-pathogens free,SPF）6 w 龄 C57BL/6小鼠随机分成3组,分别以J99 、△J99-947（缺失jhp947基因）和PBS灌胃,菌量为109CFU/mL,0、2、4 d各一次,4w后宰杀所有小鼠,无菌操作取胃组织,分别作快速尿素酶试验,Hp培养,组织病理学检查;免疫组化检测ESE-3A、NDRG1、MATP基因表达;半定量RT-PCR检测jhp947基因对小鼠ESE-3A、NADG1、MATP等基因转录的影响。【结果】 J99组和△J99-947组快速尿素酶试验和Hp培养的阳性率均为100%,PBS对照组快速尿素酶试验和Hp培养阴性。 组织病理学检查,PBS对照组小鼠胃黏膜100%正常, J99组小鼠胃黏膜33.3%（3/9）轻度糜烂,66.7%（6/9）重度糜烂。△J99-947组小鼠胃黏膜22.2%（2/9）正常,77.8%（7/9）轻度糜烂,没有重度糜烂。J99组小鼠胃黏膜的损伤比△J99-947组重。 免疫组化检测结果, J99组比△J99-947组ESE-3A、NDRG1、MATP表达显著降低（p<0.05）。 半定量RT-PCR检测结果, J99组比△J99-947组ESE-3A、NDRG1、MATP表达显著降低（p<0.05）。【结论】 JHP947基因存在可使Hp感染所致的胃黏膜损伤程度加重。在体内jhp947基因可能通过下调NDRG1、MATP等肿瘤抑制基因的表达,这可能与胃癌的发生有关。