a-麦角隐亭产生菌的原生质体诱变育种

为了提高在一般培养条件下不易产生分生孢子的黑麦麦角菌(Claviceps purpurea)的产碱率,对原牛质体诱变的可行性进行了探讨。实验表明,对a-麦角隐亭(a-Ergokryptine)产生菌的原生质体采用紫外线(UV)照射9分钟,r一射线(60C0)10万伦琴／20分钟辐射,亚硝基胍(NTG)6mg／ml 60分钟进行诱变处理,均可获得较稳定的高产突变株。经过上述三种方法的交替诱变处理,a一麦角隐亭的产率由原始菌株的40mg／L,提高到524mg／L,增加了12倍,说明用原生质体进行诱变处理,配合田问复壮,对提高C. purpurea a-麦角隐亭的产率是可行的。     

50mL-管摇床培养暨24孔板法筛选麦角菌突变株

麦角菌原生质体用０．３ｍｇ／ｍＬ亚硝基胍（ＮＴＧ）分别处理２０,４０,６０和８０ｍｉｎ。随机挑取ＮＴＧ处理后的原生质体再生单菌落共８０个,分别接种到５０ｍＬ离心管（内装１０ｍＬ液体培养基）中,在２４℃、２２０ｒ／ｍｉｎ摇床上培养１２ｄ。在紫外灯（２５４ｕｍ）下选出４６株荧光相对较强的培养物在２４孔板上作Ｖａｎ Ｕｒｋ蓝色反应分析。挑选９株呈深蓝色反应的菌株作ＨＰＬＣ分析,其结果与２４孔板法有明显的相关性。在麦角隐亭产率上,Ｎｏ．４５最佳（来自ＮＴＧ ８０ｍｉｎ剂量组）,Ｎｏ．１８、 Ｎｏ．２６次之（来自Ｎ     

α-麦角隐亭产生菌的原生质体诱变育种

为了提高在一般培养条件下不易产生分生孢子的黑麦麦角菌(Claviceps purpurea)的产碱率,对原生质体诱变的可行性进行了探讨。实验表明,对α-麦角隐亭(α-Ergokryptine)产生菌的原生质体采用紫外线(UV)照射9分钟,γ-射线(~(60)Co)10万伦琴/20分钟辐射,亚硝基胍(NTG)6mg/ml 60分钟进行诱变处理,均可获得较稳定的高产突变株。经过上述三种方法的交替诱变处理,α-麦角隐亭的产率由原始菌株的40mg/L,提高到524mg/L,增加了12倍,说明用原生质体进行诱变处理,配合田间复壮,对提高C.purpurea α-麦角隐亭的产率是可行的。     

麦角菌和雀稗麦角菌原生质体的形成与再生

本文报道了快速制备麦角菌(Claviceps purpurea)和雀稗麦角菌(Claviceps paspali)原生质体的方法及影响原生质体形成的若干因素。用适当方法培养菌丝体,利用商品溶壁酶制剂(10mg/ml),以0.7mol/l KCl为原生质体高渗液,28℃为酶解温度,处理时间仅需1—2h,菌丝体细胞壁即被彻底消化而释放出大量原生质体。在适当的固体再生培养基上,两种麦角菌原生质体的再生频率分别为7.7%和13.2%左右。培养基中添加25mg/l脱氧胆酸钠有利于形成易于计数和分离的小菌落。本文还就CaCl_2,MgCl_2及低温保藏(3—4℃,30天)对于原生质体稳定性与再生的影响作了初步探讨,并证实溶壁酶对原生质体有明显的破坏作用。