小梁切除术中应用丝裂霉素C 对角膜内皮细胞的影响

目的:观察小梁切除术中应用丝裂霉素C(MMC)对角膜内皮细胞的影响。方法:收集2010年9月2011年5月在我院行小梁切除术的青光眼患者60例(78眼),随机分为术中应用丝裂霉素C的36例(46眼)患者为A组,术中不用丝裂霉素C的24例(32眼)为B组,分别观察术前、术后1个月和术后3个月两组眼压(IOP)、角膜内皮细胞的密度(CD)、平均细胞面积(AVG)及细胞面积变异系数(CV),分析其数量的改变及两组间的差异。结果:A组术前眼压为(35.4±13.7)mmHg,B组术前眼压为(32.5±13.5)mmHg差异无统计学意义(P>0.05),A组术后1个月及术后3个月眼压分别为(15.7±3.7)mmHg、(17.0±3.2)mmHg,均低于B组的(19.4±3.7)mmHg、(20.2±2.1)mmHg,差异有统计学意义(P<0.05)。A组术前、术后1个月及术后3个月角膜内皮细胞密度分别为(2475±484)个/mm2、(2199±373)个/mm2、(2164±332)个/mm2;平均细胞面积分别为(431.4±67.6)μm2、(480.6±66.8)μm2、(463.8±46.2)μm2;细胞面积变异系数分别为(31.1±7.4)%、(34.4±6.3)%、(31.2±7.5)%;术后1个月及术后3个月各参数与术前比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。B组术前、术后1个月及术后3个月角膜内皮细胞密度分别为(2342±94)个/mm2、(2185±215)个/mm2、(2074±218)个/mm2;平均细胞面积分别为(453.9±94.8)μm2、(516.3±100.8)μm2、(499.81±106.4)μm2;细胞面积变异系数分别为(30.2±3.0)%、(32.7±2.9)%、(31.4±4.3)%;除术后3个月角膜内皮细胞与术前比较有意义(P<0.05)外,余参数术后1个月及术后3个月与术前比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术后1个月A组的角膜内皮细胞丢失率为10.4%高于B组的6.1%,差异有统计学意义(P<0.05);术后3个月A组的角膜内皮细胞丢失率为11.1%高于B组的10.0%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:小梁切除术中用丝裂霉素C的降压效果比不用丝裂霉素C的效果好,但短期内前者角膜内皮细胞的丢失率高于后者。     

制备精原干细胞滋养层细胞条件的优化

目的:优化精原干细胞培养滋养层细胞的制备条件。方法:首先根据文献资料报道和实践经验确定丝裂霉素C作用STO细胞的浓度范围和时间范围,利用双因素优选法缩短丝裂霉素C处理STO细胞的试验范围。然后采用MTT检测法确定丝裂霉素C处理STO细胞的最佳浓度和时间。结果:滋养层细胞处理后不经过冷冻保存的情况下,17.64μg/ml 2 h处理条件的STO细胞在培养14天内细胞数量基本保持稳定,其它处理条件的细胞数量均有所增加;经冷冻保存的情况下,14.72μg/ml 2 h处理条件的STO细胞在培养14天内细胞数量基本保持稳定,其它处理条件的细胞数目均有所降低。结论:滋养层细胞处理后不经过冷冻保存的情况下,17.64μg/ml 2 h的处理条件是丝裂霉素C处理STO细胞的最佳条件;经冷冻保存的情况下,14.72μg/ml 2 h的处理条件是丝裂霉素C处理STO细胞的最佳条件。     

丝裂霉素C对Erwinia herbicola表达及运转冰核活性蛋白方式的影响

利用添加丝裂霉素C(MMC)于不同培养基中,并在不同培养条件下对草生欧文氏菌10025A(E．herbicola 10025A)诱导培养,首次证实该菌表达冰核活性蛋白的活性及运转分泌冰核活性蛋白方式是不同。研究结果显示,MMC的加入可以提高细菌培养物的冰核活性,该现象可以解释为MMC对E．herbicola的作用能够激活细胞SOS应急系统的反应,诱导细胞合成部分参与修复DNA损伤的酶和蛋白因子,达到对E．herbicola诱导表达冰核蛋白通过高尔基体形成小液泡,向膜外分泌的方式,同时对E．herbicola细胞分裂后的形态也发生明显的影响。这对研究细胞在恶劣环境的生存机制以及获取该条件下的蛋白具有重要的意义,对低温生物的研究也将产生积极地影响。     

一种利用STO饲养层细胞制备拟胚体的新方法

建立了一种利用STO饲养层细胞制备拟胚体的新方法。该方法选用生长至80%饱和密度的STO细胞,经丝裂霉素C(10 mg/ml)处理4 h后以8×104 cm-2的密度接种培养12 h,制备饲养层,再将ES-D3细胞以1×104 cm-2的密度接种其上,首先用含mLIF的DMEM培养液培养24 h,再更换拟胚体诱导培养液,5～9天后获得了各成熟阶段的拟胚体。形态结构和分化潜能等研究表明,该方法制备的拟胚体结构典型,具有产生3个胚层谱系来源的功能细胞的潜能。与传统拟胚体制作方法如悬滴培养法相比,具有操作简便,拟胚体形成率高,重复性好等优点,是开展哺乳动物早期胚胎发育和干细胞分化研究的理想工具。     

从感染黄瓜花叶病毒的烟草叶筛选抗病毒细胞突变体

用绿岛法从感染CMV的普通烟草(G140)叶筛选到抗病毒细胞突变体R~CMV2、6,其当代无性系群体病情指数较对照降低41.5-45.2%。 Abstract:The 2 CMV-resistant-cell mutants,RCMV-2、6,were selected by using the method of culturing dark green island from CMV infected tobacco(N.tabacum cv G140)leaves.The disease in dex of RCMV-2、6′s was decreased by 41.5~45.2% in comparison with that of the control(G140).     

羊膜移植联合低浓度丝裂霉素治疗原发性青光眼的临床疗效

目的:探究羊膜移植联合低浓度丝裂霉素在治疗原发性青光眼的临床疗效。方法:选取2013年6月~2014年1月我院收治的原发性青光眼患者58例(80眼),按照随机数字表法分为观察组(30例,40眼)和对照组(28例,40眼),观察组行小梁切除、羊膜移植联合低浓度丝裂霉素治疗,对照组行小梁切除治疗,比较两组的手术效果及术后并发症情况。结果:观察组术后优良率为97%(38/40),显著优于对照组的75%(28/40),差异有统计学意义(x2=9.764,P=0.008);两组术后1、6个月眼压较术前均明显降低(P0.05),且观察组较对照组更低(P0.05);观察组功能性滤泡明显多于对照组(x2=4.943,P=0.026),术后并发症明显低于对照组(x2=4.501,P=0.034),复发情况明显低于对照组(x2=3.914,P=0.047)。结论:羊膜移植联合低浓度丝裂霉素治疗原发性青光眼能够有效控制眼压,减缓患者视力的丧失,术后并发症及复发率均较低,值得临床推广。     

丝裂霉素致小鼠骨髓淋巴细胞遗传损伤及西洋参的干预作用研究

目的:研究西洋参(Panax quinguefolium L)抗突变作用和对细胞增殖的影响.方法:采用小鼠骨髓淋巴细胞有丝分裂指数试验、染色体畸变试验和微核试验,观察西洋参对小鼠骨髓淋巴细胞遗传损伤效应的影响.结果:丝裂霉素(Mitomycin-c MMC)单独作用时,能抑制小鼠骨髓淋巴细胞的增殖(P<0.01),提高小鼠骨髓淋巴细胞的染色体突变(P<0.01)和微核率(P<0.01).西洋参高、中、低剂量组与MMC联合作用时,有丝分裂指数明显比模型组提高(P<0.01),并且均能显著地抑制由于MMC引起的染色体突变,其抑制率分别为68.25%、34.97%和14.29%,同时对MMC诱发的微核率也有明显的抑制效应.结论:西洋参能抑制MMC诱发的染色体畸变率和微核率,促进细胞的增殖能力.     

羟基喜树碱抑制人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的实验研究

目的:研究羟基喜树碱(HCPT)对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(Human Tenon’s capsule fibroblasts,HTFs)增殖、移行的影响。方法:取正常供体新鲜的Tenon囊组织,采用组织块培养法,进行成纤维细胞的体外培养,并用光镜、免疫荧光法观察鉴定;MTT法、划痕法检测不同浓度的HCPT(0、0.031、0.062、0.125、0.25、0.5、1、2、4mg/l)对HTFs增殖、移行的影响,并与MMC对比。结果:HTFs体外生长良好,经光镜和免疫荧光法观察鉴定为成纤维细胞;与空白对照组比较,HCPT(0.031-4mg/l)、MMC(0.0031-0.4mg/l)均能有效抑制HTFs的增殖,且呈一定的剂量、时间依赖性,HCPT作用24h、48h、72h的IC50分别为2.24mg/l、0.76mg/l、0.39mg/l,MMC作用24h、48h、72h的IC50分别为0.34mg/l、0.24mg/l、0.07mg/l;与空白对照组比较,HCPT(0.031-4mg/1)、MMC(0.0031-0.4mg/l)均能抑制HTFs迁移,呈剂量依赖性,而与时间无显著相关。结论:HCPT、MMC均能有效抑制HTFs的增殖和移行,其效应MMC约为HCPT的10倍。     

艾拉莫德增强丝裂霉素C诱导的人食管癌Eca109细胞凋亡

目的探讨艾拉莫德增强丝裂霉素C（MMC）诱导的人食管癌Eca109细胞凋亡的作用及其机制。 方法将人食管癌Eca109细胞分为五组：对照组、MMC组、25,50,100 μg/ml浓度艾拉莫德+MMC组;通过CCK-8和DCFH-DA染色法分别检测25,50,100 μg/ml浓度艾拉莫德联合MMC对人食管癌Eca109细胞活力和细胞活性氧（ROS）生成的影响,流式细胞术检测艾拉莫德联合MMC对人食管癌Eca109细胞凋亡的影响,并通过Western Blot检测艾拉莫德联合MMC对TNF-α和cleaved caspase3蛋白表达的影响。采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析。 结果CCK-8结果显示,与0 μg/ml T-614+MMC组A450值（0.85±0.03）比较,25、50、100 μg/ml T-614+MMC组A450值（0.73±0.02,0.52±0.02,0.33±0.02）均降低,差异具有统计学意义（F = 127.60, P < 0.01）;DCFH-DA染色检测结果显示,与0 μg/ml T-614+MMC组DCFH荧光值（130.00±10.00）比较,25、50、100 μg/ml T-614+MMC组DCFH值（219.67±9.50,280.33±10.50,338.33±16.07）均升高,差异具有统计学意义（F = 170.20,P < 0.01）;流式细胞术检测结果显示,与对照组的细胞凋亡率（5.33±0.35）﹪比较,T-614和MMC组的凋亡率（20.30±2.00）﹪,（25.60±3.00）﹪均升高。与MMC组细胞凋亡率（25.60±3.00）﹪比较,艾拉莫德与MMC联用组（T-614+MMC）食管癌Eca109细胞的细胞凋亡率（56.20±3.00）﹪升高,差异均具有统计学意义（F = 247.50,P < 0.01）;Western Blot结果显示,与MMC组细胞TNF-α和cleaved caspase3蛋白表达（0.87±0.06,0.25±0.03）比较,艾拉莫德与MMC联用组（T-614+MMC）食管癌Eca109细胞的TNF-α和cleaved caspase3蛋白表达（1.28±0.08,0.59±0.03）升高,差异均具有统计学意义（F = 96.90,P < 0.01）。 结论艾拉莫德能够增强MMC对食管癌Eca109细胞活力的抑制作用,其机制可能通过促进ROS的生成,激活线粒体凋亡通路,最终导致食管癌Eca109细胞凋亡。