鲤鱼汤对阿霉素肾病大鼠肾组织TGF-β1及下游因子表达的影响

本研究探讨鲤鱼汤利尿消肿拮抗肾纤维化保护肾脏的分子机制。阿霉素6.2 mg/kg尾静脉单次注射制备ADRN模型,2 W后干预连续7 W。检测尿、血生化指标,光镜电镜观察肾组织形态变化,免疫组化检测转化生长因子β1(TGF-β1)及下游因子表达。结果发现模型组较对照组12 h尿量(12 h-Uv)减少,血白蛋白(Alb)降低,肾小球硬化指数(GSI)及间质损伤指数(TII)升高,肾组织Smad7表达下调,转化生TGF-β1、成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)、I型胶原(Col-I)表达上调;鲤鱼汤组较模型组12 h-Uv增加,血Alb升高,GSI及TII下降,肾组织Smad7表达上调,TGF-β1、FSP-1、Col-Ⅰ表达下调。表明鲤鱼汤的肾保护作用至少部分与其利尿消肿、调节TGF-β1/Smad7信号通路、抑制上皮细胞转分化(EMT)及细胞外基质沉积(ECM)有关。     

CD59、CD55在T细胞活化信号转导中的协同作用

目的：研究糖基磷脂酰肌醇（GeD）锚固蛋白CD59、CD55在脂筏介导T细胞信号转导通路中的协同效应。方法：应用siRNA技术,构建特异性针对CD55与CD59基因的重组载体pSUPER—siCD55,pSUPER—siCD59。实验分为未转染的Jurkat细胞组（I组）、转染pSUPER空质粒的Jurkat细胞组（Ⅱ组）、转染pSUPER—siCD59重组质粒的Jurkat细胞组（Ⅲ组）及转染pSUPER—siCD55重组质粒的Jurkat细胞组（Ⅳ组）。RT—PCR检测转染细胞中CD55和CD59基因的表达。噻唑蓝（MTT）比色法和激光共聚焦扫描显微镜分别检测CD55与CD59联合作用对4组Jurkat细胞的增殖效应以及细胞内钙离子的变化。结果：稳定转染后,Ⅲ组细胞CD59分子的表达和Ⅳ组细胞CD55分子的表达被成功抑制。Ⅰ组和Ⅱ组细胞CD55与CD59联合作用后增殖能力和钙离子浓度均明显高于Ⅲ组、Ⅳ组（P〈0．05）,Ⅰ组和Ⅱ组之间无差异。结论：CD59和CD55在T细胞活化信号转导通路中存在协同效应。     

缺血性肠炎中肠神经肽的实验研究

目的：探讨肠神经系统中肠神经肽在应激状态下缺血性肠炎性反应中的变化。方法：取成年新西兰大白兔40只,随机分为对照组和实验组,各20只。采用夹闭肠系膜上动脉1小时后松夹恢复肠系膜上动脉血流制成肠缺血后再灌流模型,应用免疫组织化学的方法检测结肠壁肠神经组织中ENK（脑啡肽）、NT（神经降压素）、VIP（血管活性肠肽）、NPY（神经肽Y）的表达情况。结果：实验组ENK、NT的表达明显高于对照组（t=-5．542、3．404P〈0．01）,而实验组VIP、NPY的表达与对照组无明显差异（P〉0．05）。结论：在应激状态下缺血性肠炎中,肠神经组织ENK、NT的表达明显升高,而VIP、NPY的表达无明显变化。而ENK、NT为兴奋性神经递质,V1P、NPY为抑制性神经递质,所以在缺血性肠炎性反应中,肠神经系统以兴奋性作用为主。     

活化／抑制CD59对T淋巴细胞增殖的影响

目的：研究活化／抑制cD59分子对T细胞增殖的影响。方法：Jurkat细胞分别电转入pSUPER-siCD59质粒及用CD59活化抗体刺激。激光共聚焦显微镜下观察细胞的电转情况及cD59分子在细胞膜上的分布及表达;MTT比色法检测细胞的增殖。Westernblot检测CD59分子表达及T细胞活化相关蛋白ZAP70磷酸化水平。结果：激光共聚焦显微镜下可见电转染细胞表达绿色荧光,转染效率约为40％。转染pSUPER-siCD59质粒后CD59荧光强度强度降低,CD59分子均匀分布于细胞膜与正常Jurkat细胞分布一致。抗体活化后CD59在细胞膜成簇状分布。抗体活后细胞增殖速率和磷酸化ZAP70的蛋白表达水平均高于正常组（P〈0．05）,而细胞电转质粒后则恰恰相反。结论：CD59通过与信号转导分子的相互作用促进T细胞活化增殖。     

人CD46 RNAi 逆转录病毒载体系统的构建与鉴定

目的:构建并筛选携带针对CD46基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体,从而特异、有效地抑制人CD46mRNA水平。方法:利用DNA重组技术,将2条60nt能转录产生靶向CD46小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro,并转化大肠杆菌JM109。结果:重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序,结果表明序列正确。结论:特异性沉默CD46基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体构建成功,为后续转染Jurkat细胞,研究CD46在T细胞的信号转导中的作用奠定了基础,对进一步研究T细胞相关疾病及开展细胞免疫缺陷的治疗方面提供了新的思路与方向。     

鲫鱼汤对阿霉素肾病大鼠Th17细胞相关炎性因子表达的影响

目的研究鲫鱼汤对阿霉素肾病大鼠IL-17、IL-23、IL-1β和CXCR2等表达的影响,探讨其治疗作用和机制。方法成年Wistar雄性大鼠40只,随机分为鲫鱼汤组、厄贝沙坦组、肾病组、空白对照组,除空白对照组,其他三组给予尾静脉注射6.2 mg/kg体重阿霉素建立肾病模型,空白组注射等容量生理盐水。模型成功后,给予鲫鱼汤灌胃干预9周,每周检测12 h尿蛋白定量,检测终末血生化指标变化,光镜下观察大鼠肾脏病理改变,免疫组化检测IL-17、IL-23、IL-1β和CXCR2在肾脏的表达,ELISA法检测IL-17、IL-23和IL-1β在血液中的含量。结果鲫鱼汤组大鼠血白蛋白水平高于肾病组(P=0.03)低于空白组(P=0.01);鲫鱼汤组大鼠肾组织IL-17、IL-23、CX-CR2较肾病组表达减少(P=0.01,P=0.01,P=0.02),较空白组表达增多(P=0.04,P=0.007,P=0.05)。结论 Th17细胞相关炎性因子增多是阿霉素肾病大鼠的发病机制之一,鲫鱼汤可通过升高血白蛋白,降低IL-17、IL-23、CXCR2表达而发挥肾脏保护作用。     

CD59、CD55在T细胞活化信号转导中的协同作用

目的:研究糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚固蛋白CD59、CD55在脂筏介导T细胞信号转导通路中的协同效应。方法:应用siRNA技术,构建特异性针对CD55与CD59基因的重组载体pSUPER-siCD55,pSUPER-siCD59。实验分为未转染的Jurkat细胞组(Ⅰ组)、转染pSUPER空质粒的Jurkat细胞组(Ⅱ组)、转染pSUPER-siCD59重组质粒的Jurkat细胞组(Ⅲ组)及转染pSUPER-siCD55重组质粒的Jurkat细胞组(Ⅳ组)。RT-PCR检测转染细胞中CD55和CD59基因的表达噻唑蓝(MTT)比色法和激光共聚焦扫描显微镜分别检测CD55与CD59联合作用对4组Jurkat细胞的增殖效应以及细胞内钙离子的变化、结果:稳定转染后,Ⅲ组细胞CD59分子的表达和Ⅳ组细胞CD55分子的表达被成功抑制。Ⅰ组和Ⅱ组细胞CD55与CD59联合作用后增殖能力和钙离子浓度均明显高于Ⅲ组、Ⅳ组(P<0.05),Ⅰ组和Ⅱ组之间无差异结论:CD59和CD55在T细胞活化信号转导通路中存在协同效应。     

真核细胞人突变CD59的纯化及初步鉴定

目的:获得人突变CD59(hmCD59)蛋白,为后续研究提供必要的材料。方法:运用脂质体介导法,将含有hmCD59全长cDNA序列的重组pALTER质粒与pcDNA3质粒共转染CHO细胞,以G418筛选阳性克隆,以免疫荧光技术和SDS-PAGE检测hmCD59的表达,表达产物经Anti-FLAGM2亲和凝胶纯化后,以SDS-PAGE、Western印迹和ELISA对纯化产物进行鉴定。结果:hmCD59蛋白在转染后的CHO细胞表面稳定表达。SDS-PAGE结果表明,纯化的hmCD59的相对分子质量同预期结果一致。Western印迹和ELISA证实,纯化的hmCD59蛋白具有与抗CD59抗体结合的活性。结论:获得了电泳纯的hmCD59蛋白,为进一步对其进行抗体制备、功能研究及临床应用奠定了基础。     

EV71相关手足口病患儿T细胞及细胞因子检测及意义

目的:探讨EV71相关手足口病患儿外周血T细胞及细胞因子的水平及其意义.方法:将90例EV71感染手足口病患儿分为脑炎并发肺水肿组8例,单纯脑炎组30例,无并发症组52例.采用间接免疫荧光法检测外周血CD4+T及CD8+T细胞百分比,用双抗体夹心ABC-ELISA法检测血清IL-6、IL-10、TNF-α及IFN-γ含量.结果:并发症组CD4+及CD8+T淋巴细胞亚群的百分比相对无并发症组的降低,差异有统计学意义(F=9.304,P＜0.05;X2=26.075,P＜0.05),并发症组血清1L-10、IFN-γ和IL-6含量较无并发症组增高,差异有统计学意义(F=4.232,P＜0.05;X2=16.975,P＜0.05;X2=15.562,P＜0.05),并发症组TNF-α含量和无并发症组差异无统计学意义.结论:外周血T细胞及细胞因子均参与了EV71相关手足口病重症并发症的发生过程,在手足口病的临床诊疗中可予以参考,早期鉴别出现重症并发症的病例,及时给与相应的治疗措施,降低手足口病的病死率和致残率.     

靶向CD59的siRNA抑制人卵巢癌细胞A2780裸鼠移植瘤的实验研究

目的:通过体内动物实验研究CD59-siRNA对卵巢癌移植瘤CD59的沉默效应及其抑瘤作用,探讨CD59在肿瘤免疫逃逸中的作用.方法:采用脂质体转染法将CD59干扰质粒(T组)和空质粒(V组)转染A2780细胞,获得稳定表达细胞株,将前两组A2780细胞和未转染(C组)的A2780细胞分别接种于裸鼠皮下建立肿瘤模型,通过绘制肿瘤生长曲线、RT-PCR和Western Blot 研究其抑瘤效应及对CD59的沉默效应.结果:肿瘤生长曲线显示,与对照组相比,CD59干扰质粒转染组肿瘤生长明显受抑制(P<0.05). RT-PCR和Western Blot结果表明,干扰组的CD59mRNA及CD59蛋白与对照组相比显著降低(P<0.05).结论:动物实验表明,特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体可以明显抑制CD59的表达及卵巢癌在体内的生长,进一步说明了CD59在肿瘤免疫逃逸中的作用.