对《医用生物学》(第4版)“遗传与变异”一章若干问题的商榷

本文指出了“遗传与变异”一章的具体内容、语言结构、英文名词、插图表格等方面存在的问题,并提出了相应的修改建议。作者认为：内容具有科学性、语言通顺流畅、英文名词翻译准确、图表应用规范是对教材的基本要求。 Abstract:Some problems of “heredity and variation”in the book Medical Biology are presented in this article.These problems involve in contents,languages,English vocabularies,illustrations and tables,therefore some revisions are suggested.The author feel that it is a general demand that contents are scientific;languages are fluent;English vocabularies are correct; illustrations and tables are standardized.     

大肠埃希菌TA系统mazEF的研究进展

大部分细菌的遗传物质中含有毒素-抗毒素系统(TA)的遗传基因.mazEF是大肠埃希菌染色体上的一对毒素抗毒素基因,由毒素基因mazF和抗毒素基因mazE组成.其在细菌的生长调控和细胞程序性死亡中发挥了重要的作用.环境压力激活mazEF后,MazF可以通过对mRNA的剪切作用造成翻译停止.mazEF的存在可以增加细菌对环境压力的耐受性、保持细菌遗传物质的稳定、参与抗生素引起的细胞死亡、也在细菌的耐药性中发挥重要作用.     

大鼠C6胶质瘤细胞中gdnf基因启动子Ⅰ区组蛋白高乙酰化可能参与了其高转录调控过程

目的:探讨大鼠C6胶质瘤细胞中gdnf基因高转录与其启动子Ⅰ区组蛋白乙酰化的关系。方法:应用Real-time PCR和ChIP-PCR技术分别检测了大鼠正常星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞中gdnf基因mRNA的表达水平以及其启动子Ⅰ区组蛋白H3K9的乙酰化程度;利用Real-time PCR技术,检测了不同浓度的组蛋白乙酰基转移酶抑制剂姜黄素(Curcumin)或去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)处理对C6胶质瘤细胞中gdnf基因mRNA表达的影响。结果:较之正常星形胶质细胞,C6胶质瘤细胞中gdnf基因mRNA的表达量极显著增高(P0.01),并且其启动子Ⅰ区H3K9的乙酰化水平也显著升高(P0.05)。C6胶质瘤细胞经Curcumin处理24 h后,gdnf基因mRNA的表达量随药物浓度的升高而降低,且100μmol/L作用浓度时其表达量下降了74.17%(P0.001);相反,TSA处理后gdnf基因mRNA的表达量呈上升趋势,且200nmol/L组其表达量约上升145.35%(P0.05)。结论:在大鼠C6胶质瘤细胞中gdnf基因启动子Ⅰ区H3K9发生了高乙酰化修饰,这种修饰可能是其高转录的原因。     

徐州医学院病原生物学与免疫学教研室

目的:建立高活性的PSA启动子荧光素酶报告载体。方法:提取前列腺癌细胞PC-3总DNA,PCR扩增出PSA启动子片段,建立PSA启动子荧光素酶重组载体PGL3-psap,通过脂质体介导将重组载体转染到前列腺癌细胞PC-3中,使用荧光素酶检测系统检测其活性。结果:DNA测序结果表明成功构建荧光素酶重组载体PGL3-psap,荧光素酶检测显示重组载体在前列腺癌细胞PC-3中有较强活性。结论:本研究成功构建了具有高度活性的PSA启动子荧光素酶报告载体,为进一步研究前列腺癌的诊断和治疗提供了实验基础。     

人肝癌细胞LASP1 启动子的克隆及其核心调控区域的初步鉴定

目的:克隆人肝癌细胞的LASP1基因的启动子区域并找出该基因启动子的核心调控区域。方法:提取肝癌Hep G2细胞总DNA,PCR扩增不同长度的LASP1启动子片段,克隆至PGL3-Basic载体中构建重组表达载体PGL3-P1(2059 bp)、PGL3-P2(1123bp)、PGL3-P3(909 bp)、PGL3-P4(574 bp)和PGL3-P5(159 bp),转化入大肠埃希菌(E.coli)DH5α中,提取质粒经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆并测序。将构建的重组表达载体、PGL3-Basic载体分别与内参质粒PRL-Tk共转染Hep G2细胞,48 h后经双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测其活性。结果:PCR结果、双酶切结果以及DNA测序结果表明成功构建了LASP1启动子荧光素酶报告基因载体;双荧光素酶报告基因检测结果显示,与PGL3-Basic组相比,重组载体PGL3-P1、PGL3-P2、PGL3-P3、PGL3-P4均具有较强的启动子活性(P0.01),其中,PGL3-P4的活性最强。结论:成功构建了人肝癌细胞不同截断长度的LASP1基因启动子荧光素酶报告基因载体,确定了LASP-1基因启动子的核心区域(-581 bp~-8 bp),为进一步研究LASP1基因在肝癌细胞中表达的关键调节因素及分子机制奠定了基础。     

梅毒螺旋体TpN17与TpN47表位肽融合抗原的重组表达及其酶联免疫吸附试验的建立和应用

以重组TpNs为抗原的ELISAs已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法,若ELISAs使用多种TpNs抗原,可进一步提高检测敏感性和特异性.根据抗原表位分析结果,本研究首先采用连接引物PCR获得了TpN17和TpN47抗原表位序列融合成的人工基因片段tpE17-47,然后构建了全长tpN17,tpN47基因以及tpE17-47融合基因的原核表达系统.SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查结果显示,所构建的原核表达系统能稳定表达目的重组蛋白rTpN17,rTpN47和rTpE17-47,其产量分别约占细菌总蛋白的36%、20%和28%.采用Ni-NTA亲和层析法提纯的rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白经SDS-PAGE分析,均显示为单一的蛋白条带.Western blotting结果表明,rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白均可被梅毒抗体阳性的病人血清所识别.以rTpE17-47为包被抗原的rTpE17-47-ELISA检测630例临床确诊梅毒患者血清标本的阳性率为98.6%,仅略高于TPPA(97.9%)(P>0.05),但明显高于rTpN17-ELISA(83.8%)、rTpN47-ELISA(83.3%)和RPR(72.1%)(P<0.01).上述ELISAs和TPPA对25例SLE、36例RA患者和250例健康体检者的血清标本检测结果均为阴性,但RPR分别有1、2和2例标本检测结果为阳性.本试验成功地构建了rTpE17-47抗原表位融合基因及其高效原核表达系统,所建立的rTpE17-47-ELISA可作为一种快速、简便、安全、敏感和特异的梅毒血清学筛查或诊断新方法.     

梅毒螺旋体TpN17与TpN47表位肽融合抗原的重组表达及其酶联免疫吸附试验建立和应用

以重组TpNs为抗原的ELISAs已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法,若ELISAs使用多种TpNs抗原,可进一步提高检测敏感性和特异性。根据抗原表位分析结果,本研究首先采用连接引物PCR获得了TpN17和TpN47抗原表位序列融合成的人工基因片段tpE17-47,然后构建了全长tpN17、tpN47基因以及tpE17-47融合基因的原核表达系统。SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查结果显示,所构建的原核表达系统能稳定表达目的重组蛋白rTpN17、rTpN47和rTpE17-47,其产量分别约占细菌总蛋白的36%、20%和28%。采用Ni-NTA亲和层析法提纯的rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白经SDS-PAGE分析,均显示为单一的蛋白条带。Western blotting结果表明,rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白均可被梅毒抗体阳性的病人血清所识别。以rTpE17-47为包被抗原的rTpE17-47-ELISA检测630例临床确诊梅毒患者血清标本的阳性率为98.6%,仅略高于TPPA(97.9%)(P>0.05),但明显高于rTpN17-ELI...     

流体动力学法表达乙肝病毒X蛋白小鼠模型的建立

目的建立表达乙肝病毒X蛋白的小鼠模型。方法实验动物分成模型组和对照组,模型组利用已构建的含有HBX基因的真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-HBX,对照组以等量生理盐水代替,采用流体动力学法将质粒经尾静脉高压注入小鼠体内,24h后取小鼠肝组织,行免疫荧光、RT-PCR和Western blot法从不同水平检测HBX在小鼠肝组织内的表达情况。结果模型组小鼠RT-PCR显示肝组织内有HBX mRNA的存在,免疫荧光和Western blot检测均有HBX蛋白的表达;对照组小鼠则无HBX表达。结论成功建立了表达乙肝病毒X蛋白小鼠模型,为进一步探讨HBX蛋白在动物体内的生物学作用提供实验基础。