AngⅡ通过激活Notch1/Sox2通路对肝星状细胞LX2的活化和增殖的作用

目的探讨AngⅡ通过靶向调控Notch1/Sox2肝星状细胞LX2细胞的增殖。 方法通过CCK8检测AngⅡ对肝星状细胞增殖能力的影响,通过羟脯氨酸酸法检测AngⅡ对肝星状细胞胶原合成能力的影响,并通过脂质体转染siRNA-Notch1构建Notch1低表达细胞模型,通过CCK8检测敲低Notch1对AngⅡ诱导的肝星状细胞LX2增殖的影响,通过Western Blot检测敲低Notch1对AngⅡ诱导的肝星状细胞LX2蛋白表达的影响。所有的检测结果都进行生物学重复。采用方差分析和t检验进行统计学分析。 结果CCK8结果显示,AngⅡ（5、10、20、40、80 nmol/L）预处理A450值分别为0.67±0.06、0.88±0.07、0.98±0.07、1.08±0.07、1.23±0.07,较对照组0.57±0.05上升,差异具有统计学意义（F = 45.76,P < 0.01）,羟脯氨酸检查结果显示,AngⅡ（10、20、40 nmol/L）预处理组羟脯氨酸浓度分别为（2.60±0.20）、（3.47±0.25）、（4.17±0.21）mg/L,羟脯氨酸浓度较对照组（1.90±0.10）mg/L上升,差异具有统计学意义（F = 75.18,P < 0.01）。Western Blot结果显示,AngⅡ10、20、40 nmol/L组Notch1蛋白表达水平分别为0.20±0.02、0.54±0.04、0.82±0.03,与正常对照组0.11±0.02发生升高,差异具有统计学意义（F = 400.50,P < 0.01）。Notch1干扰后,CCK8结果显示,siRNA-Notch1+AngⅡ组（10、20、40 nmol/L）A450值分别为0.53±0.06、0.83±0.03、1.03±0.03,与siRNA-NC+ AngⅡ对照组0.97±0.06,1.43±0.06,1.73±0.06比较发生降低（P < 0.01）。进一步Western Blot结果显示,Notch1敲低组（AngⅡ+ siRNA-Notch1）Notch1、HES1和Sox2蛋白表达水平分别为1.47±0.12、0.77±0.06和0.50±0.10,分别与AngⅡ对照组2.83±0.15、2.20±0.10和1.17±0.06比较,差异具有统计学意义（P < 0.01）。 结论AngⅡ通过激活Notch1/Sox2信号促进肝星状细胞LX2增殖。     

MFN1在肝癌转移中的调控作用研究

目的:探讨线粒体融合蛋白MFN1(mito-fusion 1)在肝癌转移中的作用及其机制。方法:1).采用免疫组化实验检测15对肝癌转移灶组织与原发灶组织中MFN1的表达,以明确肝癌转移时是否伴有MFN1表达的改变。2).采用si RNA (small interference RNA)下调肝癌细胞中MFN1的表达后,提高Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验分别检测其迁移和侵袭能力,通过实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和Western blot实验分别检测基质金属蛋白酶1 (matrix metalloproteinase 1,MMP1)、MMP2、MMP7及MMP9的m RNA和蛋白表达。结果:1)肝癌转移灶组织中MFN1表达显著低于原发灶组织(P0.05)。2).下调MFN1表达后,肝癌细胞的迁移和侵袭能力显著升高,MMP7的表达显著增加,而MMP1、MMP2与MMP9的表达无明显变化。结论:线粒体融合蛋白MFN1在肝癌转移组织中表达显著降低,可能通过激活MMP7表达,促进肝癌细胞侵袭和转移。     

线粒体分裂蛋白FIS1通过诱导上皮间质转化促进肝癌侵袭与迁移

目的:研究线粒体分裂蛋白1(Mitochondrial fission protein 1,FIS1)介导的线粒体分裂对肝癌细胞侵袭与迁移的调控作用与机制。方法:采用免疫组化实验比较10对肝癌原发灶与转移灶组织中FIS1表达,以明确FIS1与肝癌转移的关系。通过si RNA干扰FIS1的表达后,用Transwell实验检测肝癌细胞迁移与侵袭能力的变化,q PCR与Western Blot检测上皮间质转化标志分子上皮型钙黏蛋白(epithelia cadherin,E-cadherin)、紧密连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)、神经型钙黏蛋白(neural cadherin,N-cadherin)、波形蛋白Vimentin的表达。结果:肝癌转移灶组织中FIS1的表达显著高于原发灶组织。干扰FIS1表达后,肝癌细胞迁移和侵袭能力均明显下降,细胞上皮间质转化标志蛋白E-cadherin和ZO-1的表达上调,而N-cadherin和Vimentin的表达下调。结论:线粒体分裂蛋白FIS1在肝癌转移灶组织中高表达,并可能通过调节细胞上皮间质转化促进肝癌细胞转移。     

肉毒碱棕榈酰基转移酶CPT2促进肝癌细胞迁移侵袭的作用研究

目的:探讨肉毒碱棕榈酰基转移酶2(CarnitinePalmitoyltransferase2, CPT2)在肝癌细胞迁移侵袭中的调控作用。方法:1).用免疫组化实验,检测62对肝癌癌组织与癌周组织中CPT2表达,以明确肝癌组织细胞中CPT2表达是否发生异常改变。2).细胞划痕实验,在人肝癌细胞HLE中分析干涉CPT2表达对肝癌细胞迁移能力的影响。3).Transwell侵袭实验,在人肝癌细胞HLE中分析干涉CPT2表达对肝癌细胞侵袭能力的影响。结果:1). CPT2主要为胞浆染色且染色呈线粒体蛋白染色典型的颗粒状分布;与癌周组织相比,肝癌组织中CPT2表达显著升高。2).细胞划痕实验证实,干涉人肝癌细胞HLE中CPT2表达后,细胞的相对迁移距离显著变短(si Ctrl VS si CPT2#1 VS si CPT2#2=1.00±0.8 VS 0.67±0.42 VS 0.64±0.31)。3).Transwell侵袭实验证实,干涉人肝癌细胞HLE中CPT2表达后,侵袭至小室底部的细胞数目显著变少(si Ctrl VS si CPT2#1 VS si CPT2#2=23.34±3.51 VS 8.00±2.00 VS8.67±1.53)。结论:CPT2在肝癌细胞中表达显著上调,CPT2表达上调促进了肝癌细胞的迁移与侵袭。