不同方法分离的成人睾丸支持细胞与胰岛共移植的效果对比

目的比较成人睾丸支持（Sertoli）细胞不同分离方法的效果,建立成人Sertoli细胞简便高效的分离方法。方法将质量相等的睾丸组织按照不同分离方法随机分为3组：A组采用胰蛋白酶、DNA酶、胶原酶和透明质酸酶一步消化法;B组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,胶原酶和透明质酸酶第二步消化;C组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,透明质酸酶第二步消化,胶原酶第三步消化;D组为对照组。采用形态学观察和免疫组化鉴定Sertoli细胞;MTT法和流式细胞仪法测定3组Sertoli细胞的活性和纯度;应用生存分析方法比较3组Sertoli细胞与胰岛共移植至糖尿病鼠的效果。结果分离获得的细胞经形态学和免疫组化鉴定,具有Sertoli细胞的特征,A、B、C三组Sertoli细胞的纯度分别为（85．17±1．8）％、（92．33±2．5）％和（93．12±2．6）％,B组和C组的Sertoli细胞纯度显著高于A组（t=7．35,t=7．95,P=0．00,P=0．00）。B组Sertoli细胞活性于培养14d时达到峰值,此后缓慢下降。B组Sertoli细胞活性显著高于A组和C组（t=4．02,t=2．77,P=0．00,P=0．01）,且B组Sertoli细胞与胰岛共移植术后胰岛移植物存活时间显著高于A、c、D组（F=165．548,P=0．000）。结论采用两步消化的方法能够获得纯度和活性较高的Sertoli细胞,其与胰岛共移植能够显著延长移植物存活。     

TLR2促进大鼠肾缺血再灌注损伤中的炎症反应和氧化应激

目的:探究肾缺血再灌注损伤对Toll样受体2(Toll-like receptors 2, TLR2)信号路径的影响,以及TLR2在肾缺血灌注中的作用。方法:将21只Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham)、肾缺血再灌注模型组(I/R)和T2.5处理组(T2.5)。缺血再灌注24小时后,采集心脏血和左肾组织。对肾组织进行病理学分析,采用试剂盒检测血清肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN)水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹分析(Western blot)检测肾组织炎症和氧化应激变化。结果:与假手术组相比,模型组大鼠肾组织出现明显损伤,T2.5处理能有效改善肾组织损伤,差异具有统计学意义(P0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠血清Cr、BUN水平显著上升,而T2.5能显著抑制血清Cr、BUN升高、减轻肾损伤(P0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠肾组织TLR2、TLR4相对表达量显著上升,T2.5能显著抑制肾组织TLR2、TLR4的升高,调节TLR信号通路(P0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠的NF-k B表达及磷酸化水平显著上升(P0.05),T2.5能够显著下调I/R大鼠的NF-kB磷酸化水平(P0.05),对NF-kB的表达则无明显影响(P0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠肾组织中促炎因子IL-6、IL-1β和TNF-α的浓度均显著上升(P0.05),T2.5能通过显著下调IL-6和IL-1β水平来改善I/R大鼠的炎症水平(P0.05),但对TNF-α的水平无明显影响(P0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠的SOD活力显著下降,T2.5能显著逆转该下降趋势(P0.05);而模型组大鼠的MDA活力显著上升(P0.05),T2.5处理对I/R大鼠的MDA活力无明显影响(P0.05)。结论:TLR2在缺血再灌注损伤中促进了炎症反应和氧化应激,其机制与激活TLR信号路径,促进NF-kB磷酸化,进一步调节促炎因子的释放和抗氧化酶的活性有关。