显色培养基在几种食源性致病菌快速检测中的应用*

用显色培养基鉴定微生物是一种新的微生物快速检测技术,该技术以生化反应为基础,通过在培养基中加入细菌特异性酶的显色底物直接根据菌落颜色对菌种作出鉴定。常见食源性致病菌检测中,李斯特菌显色培养基(BCM^TMListeriamonocytogenes,Rapid’LMONOagar,CHROMagar^TMListeria)、大肠杆菌显色培养基(CHROMagarTMEcoli)、沙门氏菌显色培养基(Rambachagar)、金黄色葡萄球菌显     

阪崎肠杆菌的生物学特性及其检测技术

阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）是寄生于人和动物肠道的条件性肠道致病菌,能引起新生儿脑膜炎,致死性小肠结肠炎以及菌血症等,具有产生α-葡萄糖苷酶和吐温80脂酶、不发酵三梨醇以及无磷酸胺酶活性等生理生化特征,并且对干燥、渗透压和抗生素等有很强的抗性。该菌自然来源非常广泛,在水、土壤、植物根茎、动物肠道甚至加工食品都可存在,其中婴儿配方奶粉是婴儿感染阪崎肠杆菌的主要渠道。近年来基于α-葡萄糖苷酶反应的特异性生化检测和PCR扩增的分子检测技术已取得重要进展,但是目前还缺乏一种稳定检测该菌的分子分型检测技术。     

多重RT-PCR用于临床检测三种胃肠炎病毒的研究

轮状病毒、诺瓦克病毒和星状病毒是引起病毒性胃肠炎的主要病原因子。研究采用JV12/JV13、P1/P2和Mon340/Mon348三对引物,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR技术,并应用于128份临床粪便样本的检测,检出轮状病毒62份(48.44%),诺瓦克病毒8份(6.25%),星状病毒11份(8.59%)。在灵敏度试验中,轮状病毒的检测灵敏度为5pg/mL、诺瓦克病毒和星状病毒的检测灵敏度均为50pg/mL。该研究所建立3种常见胃肠炎病毒的多重RT-PCR方法具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于临床病原诊断和溯源。     

荧光素酶研究进展*

荧光素酶 (Luciferase)可以分为萤火虫荧光素酶和细菌荧光素酶两大类。萤火虫荧光素酶是分子量为 60～ 64kD的多肽链 ,在Mg²⁺、ATP、O₂ 存在时 ,催化D 荧光素 (D Luciferin)氧化脱羧 ,发出光 (λ =550～580nm)。细菌荧光素酶是含α、β两个多肽亚基的加单氧酶 ,它催化长链脂肪醛、FMNH₂ 和O₂ 的氧化反应 ,发出绿蓝光 (λ =490nm)。萤火虫荧光素酶和细菌荧光素酶     

微生物细胞ATP释放条件研究

在ATP生物发光法微生物细胞ATP释放剂的筛选研究中,发现采用环糊精等环状化合物可以解除表面活性剂类细胞ATP释放剂对发光反应系统的抑制作用,其中,7．5g／L环糊精CD（a）能中和1．5g／L的表面活性剂Ec和Es、Et,可以完全排除Ec、Es、Et对发光反应的抑制作用。通过比较各种细胞ATP释放剂释放ATP效果,筛选、组合出以表面活性剂Ec为代表的微生物细胞ATP释放剂;通过优化实验,发现用0．25～0．50g／L的Ec处理菌液1～2min时,细胞ATP的释放效果最好,从而建立了室温条件下简便、快速的微生物细胞ATP释放方法和ATP释放剂对发光反应系统抑制的消除方法。     

华南四省食品中空肠弯曲菌分离株的毒力相关基因分析和ERIC-PCR分型

【目的】了解空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)在华南四省食品中的污染状况及其遗传多样性,为食源性病原菌的风险监测和控制提供基础数据。【方法】采用传统国标和MPN组合的方法对华南四省市售生鲜禽畜肉及其制品、生食蔬菜、熟食、水产品、速冻食品、奶制品、食用菌7大类食品进行C.jejuni污染调查,对分离到的C.jejuni菌株进行12种毒力相关基因检测分析和ERIC-PCR分型。【结果】2011-2012年共检测样品558份,检出阳性样品14份,检出率2.51%,其中肉与肉制品的检出率达13.2%,污染量达8.77 MPN/g,获得C.jejuni14株。毒力相关基因分析显示9种毒力相关基因的携带率超过50%,而pldA和wlaN的携带率均为14.3%,virB11的携带率为0。ERIC-PCR分析结果显示15株C.jejuni可分为3簇共10种基因型,其中簇A中有4株的指纹图谱基本相同。【结论】华南四省中的生鲜禽肉类样品,存在不同程度的空肠弯曲菌污染,尤其是福州的鸭肉样品,其MPN值大于110 MPN/g,应加强生禽肉类的食品安全防控。     

沙门氏菌1,4,[5],12:i:-耐药性和遗传特征研究进展

近10年来,一种与鼠伤寒沙门氏菌具有相似抗原的非典型沙门氏菌血清型1,4,[5],12:i:-在全球多个国家检出率大幅度增加,目前已被列为引起人类沙门氏菌病的主要血清型之一。沙门氏菌1,4,[5],12:i:-菌株具多重耐药特性,存在分别以质粒和染色体介导的两种主要的多重耐药菌株(西班牙株系和欧洲株系)。多个抗生素抗性基因(blaTEM、blaCTX-M-1、aac(3)-IV、aadA2、cmlA1、sul1、sul2、dfrA12、strA-strB、tet(A)和tet(B))在1,4,[5],12:i:-耐药菌株中检出。遗传特征分析显示,沙门氏菌1,4,[5],12:i:-与鼠伤寒沙门氏菌具有很高的遗传相似度,并且推测是由于多个独立的遗传事件的改变,导致鼠伤寒沙门氏菌变异而产生不同的1,4,[5],12:i:-株系。对于沙门氏菌1,4,[5],12:i:-,相关快速、准确检测方法的建立及致病、耐药机制研究将是今后的重要方向。     

三种金黄色葡萄球菌显色培养基检测效果的比较

本文研究2种国外主流的金葡菌显色培养基和广东环凯微生物科技有限公司生产的PEN-TCF检测金葡菌的效果。通过研究3种产品对多种金葡菌菌株的回收率、最低检出限以及检测人工污染食品的回收率、特异性和抗干扰能力比较其检测效果。结果表明3种培养基的最低检出限相近, 显色培养基A和PEN-TCF的回收率较高, 但抗干扰能力较低; 显色培养基B回收率稍低, 而抗干扰能力较强; PEN-TCF和培养基B的特异性更优于培养基A。     

矿泉水水井取水管道内壁附着物分析研究

矿泉水水井因污染而在取水管道内壁形成大量的褐色粘液状粘泥 ,显微形态观察表明 ,典型样品中的粘泥主要为细菌污染大量繁殖形成的生物膜。样品经HCl处理后 ,其中黄褐色晶体、霉菌样丝状体消失 ,显示晶体和丝状体为金属沉积物 ;样品滴加亚铁氰化钾和HCl,出现普鲁士蓝沉淀 ,证明了样品中的金属沉积物是含铁物质 ,从而推断取水管内壁附着物主要为铁细菌大量繁殖 ,氧化铁、沉积铁而形成的生物膜。从生物膜中取样进行微生物分离培养 ,铁细菌检出阳性 ,固体培养物同样与亚铁氰化钾反应出现普鲁士蓝沉淀 ,且显微形态与样品中微     

荧光素酶研究进展

荧光素酶（Luciferase）可以分为萤火虫荧光素酶和细菌荧光素酶两大类。萤火虫荧光素酶是分子量为60－64kD的多肽链,在Mg^2 、ATP、O2存在时,催化D－荧光素（D－Luciferin）氧化脱羧,发出光（λ=550-580nm）。细菌荧光素酶是含α、β两个多肽亚基的加单氧酶,它催化长链脂肪醛、FMNH2和O2的氧化反应,发出绿蓝光（λ=490nm）。萤火虫荧光素酶和细菌荧光素酶可分别从萤火虫和发光细菌中直接提前,亦可用基因工程的方法进行生产。荧光素酶催化的发光反应能用生物发光检测仪进行灵敏、快速检测,因此该酶有多方面的途径,如应用于快速检测、报告基因分析、有毒有害物质分析等。