丹参水溶性成分对环腺苷酸磷酸二酯酶的抑制作用

丹参水溶性提出物发现有抑制体外环腺苷酸磷酸二酯酶(cAPD)的作用。这种抑制对被试动物和组织具有普遍性,但以家兔子宫、大脑、膀胱和肺中的cAPD 最敏感。每个测定含微克量级的丹参水溶性有机物即可产生明显抑制作用,剂量增加到1～2毫克出现完全抑制。兔脑匀浆上清液中的蛋白质对其cAPD 有保护作用。酶作用动力学的研究指出,丹参水溶性成分对兔脑cAPD 表现典型的非竞争性抑制,并且是不可逆性抑制。丹参水溶性提出物用硅胶G 薄板层析可检出16个斑点。用有机溶剂分离的部分4(主要为斑点13)对兔脑cAPD 的抑制力最强,其50%抑制量为8微克/毫升,比茶碱强32倍。丹参水溶性成分可能通过抑制cAPD 而发挥某些生理效应。     

丹参水溶性成分对环腺苷酸磷酸二酯酶的抑制作用

丹参水溶性提出物发现有抑制体外环腺苷酸磷酸二酯酶(cAPD)的作用。这种抑制对被试动物和组织具有普遍性,但以家兔子宫、大脑、膀胱和肺中的cAPD最敏感。每个测定含微克量级的丹参水溶性有机物即可产生明显抑制作用,剂量增加到1～2毫克出现完全抑制。兔脑匀浆上清液中的蛋白质对其cAPD有保护作用。酶作用动力学的研究指出,丹参水溶性成分对兔脑cAPD表现典型的非竞争性抑制,并且是不可逆性抑制。丹参水溶性提出物用硅胶G薄板层析可检出16个斑点。用有机溶剂分离的部分4(主要为斑点13)对兔脑cAPD的抑制力最强,其50%抑制量为8微克/毫升,比茶碱强32倍。丹参水溶性成分可能通过抑制cAPD而发挥某些生理效应。     

磷酸酪氨酸蛋白专一抗体的制备和纯化

以偶联磷酸化酪氨酸的牛血清白蛋白（ＢＳＡ）作为免疫原免疫兔获得抗血清。自抗血清中分离获得抗体。自酪胺合成磷酸酪胺,并偶联到溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ上。抗体经磷酸酪胺－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和柱纯化,所得抗体专一性强,Ｄｏｔ ｂｌｏｔ显示：抗体仅对酪氨酸磷酸化的蛋白质包括酪氨酸磷酸化的血清白蛋白,溶菌酶,卵清蛋白起抗原抗体反应,而不识别非酪氨酸磷酸化的溶菌酶,卵清蛋白,也不识别作为免疫     

转录因子XBP1S基因表达谱差异分析

目的 应用基因表达谱芯片技术了解XBP1S在肝细胞中可能上调或下调的基因,了解其可能的调节功能线索.方法 构建pcDNA3.1（-）-XBP1S真核表达载体,转染HepG2细胞,同时以空载体pcDNA3.1（-）处理相同细胞系作为对照.48 h后制备细胞裂解液,提取mRNA,应用基因表达谱芯片技术对差异表达mRNA进行检测和分析.结果 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误,提取高质量的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行基因表达谱芯片技术分析.经过差异基因表达谱的筛选,发现HepG2细胞转染XBP1S以后,有38个基因表达水平显著上调,30个基因表达水平显著下调.结论 成功构建XBP1S的真核表达载体pcDNA3.1（-）-XBP1S,运用基因表达谱芯片技术成功筛选了XBP1S转染细胞后的差异表达基因,这些差异表达基因包括细胞周期、蛋白质的翻译合成及运输、能量代谢、体内免疫调节、细胞凋亡及细胞内的信号转导等方面起重要作用及肿瘤发生相关的基因,为进一步阐明XBP1S可能存在的调控机制及XBP1S蛋白可能的生物学功能提供理论依据.     

环腺苷酸及其相关化合物的氧化铝薄板层析

使用极性不同的溶剂系,研究了3',5'-环腺苷酸(cAMP)及其相关化合物在国产中性氧化铝薄板上的层析行为,发现正丁醇:乙醇:水(30:10:13)系统能把cAMP与腺嘌呤、腺苷、3',5'-环鸟苷酸、二腺苷焦磷酸、AMP(GMP GTP ATP)等分离开来。磷酸盐和柠檬酸盐的中性水溶液能定量地洗脱cAMP斑点。从而使方法达到分离定量的目的,用于cAMP化学合成反应液的分析和环核苷酸磷酸二酯酶活力的测定。