毕赤酵母X-33OCH1基因敲除菌株的构建及其表达低糖基化蛋白GM-CSF

摘要: 【目的】酵母表达外源糖蛋白时会对蛋白进行过度N-糖基化修饰,产生高甘露糖型糖链,影响蛋白的活性,其中α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)在这一过程中起着关键作用。通过敲除毕赤酵母X-33的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得一个对糖蛋白进行低糖基化修饰的毕赤酵母表达系统。【方法】采用双交换同源重组敲除目的基因的方法,首先敲除赤酵母X-33的URA3基因,获得一个尿嘧啶营养缺陷型的X-33(ura3-)菌株;然后用URA3基因作为选择标记,敲除X-33(ura3-)的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得OCH1基因敲除的X-33(och1-)菌株。用X-33 (och1-)菌表达糖蛋白GM-CSF,分析GM-CSF蛋白糖链的变化。【结果】首次成功敲除了X-33的URA3和OCH1基因,与野生型相比,X-33(och1-)菌表达的GM-CSF蛋白过度糖基化修饰程度明显降低。【结论】X-33(och1-)菌株的构建提供了一个对蛋白低N-糖基化修饰的毕赤酵母表达系统,也为进一步的糖基化改造提供了良好的基础。     

毕赤酵母X-33OCH1基因敲除菌株的构建及其表达低糖基化蛋白GM-CSF

【目的】酵母表达外源糖蛋白时会对蛋白进行过度N-糖基化修饰,产生高甘露糖型糖链,影响蛋白的活性,其中α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)在这一过程中起着关键作用。通过敲除毕赤酵母X-33的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得一个对糖蛋白进行低糖基化修饰的毕赤酵母表达系统。【方法】采用双交换同源重组敲除目的基因的方法,首先敲除毕赤酵母X-33的URA3基因,获得一个尿嘧啶营养缺陷型的X-33(ura3-)菌株;然后用URA3基因作为选择标记,敲除X-33(ura3-)的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得OCH1基因敲除的X-33(och1-)菌株。用X-33(och1-)菌表达糖蛋白GM-CSF,分析GM-CSF蛋白糖链的变化。【结果】首次成功敲除了X-33的URA3和OCH1基因,与野生型相比,X-33(och1-)菌表达的GM-CSF蛋白过度糖基化修饰程度明显降低。【结论】X-33(och1-)菌株的构建提供了一个对蛋白低N-糖基化修饰的毕赤酵母表达系统,也为进一步的糖基化改造提供了良好的基础。     

肝纤维化大鼠贮脂细胞的超微结构和免疫组织化学研究

探讨贮脂细胞在免疫性肝损伤时的形态学变化及意义。应用猪血清注射法造成大鼠肝纤维化 ,取肝脏做免疫组织化学染色和透射电镜观察。结果显示贮脂细胞数目增多 (P<0 .0 5 ) ,α-平滑肌肌动蛋白 (α- SMA)阳性 ,胞质内脂滴减少 ,粗面内质网和线粒体增多。结果表明贮脂细胞在肝纤维化过程中 ,细胞形态、数目和功能有明显改变     

胃肠肿瘤雌、孕激素受体与癌胚抗原的免疫组织化学研究

利用酶联亲和组织化学法和ＡＢＣ免疫组织化学法进行８８例胃肠肿瘤的雌激素受体（ＥＲ）、孕激素受体（ＰＲ）和癌胚抗原（ＣＥＡ）的检测．结果表明：ＥＲ、ＰＲ、ＣＥＡ的阳性率分别为３７．５％（３３／８８）、２７．３（２４／８８）、８８．６４（７８／８８）。ＥＲ、ＰＲ的阳性率与肿瘤的组织学分类及病理分级有关。ＣＥＡ仅与病理分级有关。且与性激素受体水平呈负相关。因此,性激素受体与ＣＥＡ的表达提供了肿瘤组织不同的生物学特征,同时检则ＥＲ、ＰＲ及ＣＥＡ水平对内分泌治疗及判断预后更有价值。