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本研究旨在通过构建西农萨能羊固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)基因的重组腺病毒超表达载体,获得有感染性的病毒颗粒,并检测该基因过表达后对乳腺上皮细胞中脂肪酸代谢相关基因的影响,为进一步研究该基因在脂肪酸代谢及泌乳调控中的功能奠定基础。根据GenBank中收录的西农萨能羊SREBP-1基因的序列设计引物,PCR扩增后进行测序。将测序正确的目的基因连接到穿梭载体pAdTrack-CMV后并进行线性化,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌Escherichia coli BJ5183感受态细胞中进行同源重组,将重组成功的质粒进行PacⅠ酶线性化,转染HEK 293细胞进行重组腺病毒的包装、扩繁及滴度测定。病毒液感染原代乳腺上皮细胞,实时荧光定量检测SREBP-1超表达效果及对脂肪酸代谢相关基因的影响。结果表明:重组腺病毒质粒构建成功,腺病毒滴度为109U/mL。病毒液感染乳腺上皮细胞48 h后,SREBP-1基因表达量上升大约15倍,72 h后,表达量上调了30倍;对脂肪酸代谢相关基因的影响在72 h较为明显,其中,脂肪酸合酶(FASN)及酰基辅酶A羧化酶(ACC)均显著上调了大约两倍,过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)上调了大约1.5倍,肝素X受体(LXRα)及甘油三酯水解酶(ATGL)表达量升高了1.2倍;其中硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)表达水平无明显变化。表明在西农萨能羊乳腺上皮细胞中,SREBP-1能够促进脂肪酸合成相关基因的表达,对山羊乳腺脂肪酸代谢具有调控作用。 相似文献
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Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)在哺乳动物组织中对于调节器官大小、肿瘤发生和细胞的增殖、分化、凋亡等具有重要作用。为探究YAP1基因在新西兰白兔肌肉组织生长发育中的生物学功能，本研究通过RT-PCR从新西兰白兔腿肌中克隆到YAP1基因，并对其生物信息学功能、表达模式及亚细胞定位、启动下游基因表达的转录活性，以及参与调控肌肉组织生长发育的功能进行分析。结果表明，YAP1的CDS区序列长度为1 302 bp,编码433个氨基酸，等电点为5.10的亲水性蛋白质，YAP1蛋白不存在信号肽和跨膜区域，其结构主要由无规则卷曲构成。系统进化树分析表明，与绵羊的亲缘关系较近，与小鼠的亲缘关系较远。亚细胞定位显示，该蛋白质在细胞核和细胞质中均有表达。RT-qPCR结果显示，YAP1基因在新西兰白兔的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、子宫和肌肉中均有表达，但在肌肉中的表达量最高，且在腿肌组织中表达水平较高。双荧光素酶报告基因检测结果表明，YAP1基因第127位的丝氨酸突变为丙氨酸(YAP1-S127A),8xGTIIC的启动子活性明显增强。在肌肉细胞中过表达YAP1基... 相似文献
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