Bac-to-Bac/BmNPV杆状病毒在家蚕幼虫中表达重组鲎C因子

鲎C因子是鲎血细胞中一种对内毒素具有高亲和力的丝氨酸蛋白酶,被内毒素激活后可水解人工合成的三肽底物,因而能替代传统的鲎试剂用于内毒素检测。通过RT-PCR从东方鲎血细胞中扩增出鲎C因子基因(factor C)序列,利用Bac-to-Bac/BmNPV杆状病毒表达系统在家蚕幼虫中表达该蛋白,并对其进行活性测定。结果显示:被感染的家蚕血清稀释后能检测到Factor C活性,稀释500倍的血清可以用于内毒素检测,且其灵敏度能达到0.2 EU/mL,有望开发新型的、低成本的内毒素检测试剂。     

昆虫细胞制备AAV-ITR基因表达微载体

AAV-ITR基因表达微载体是只含有腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)倒置末端重复序列(Inverted terminal repeats,ITR)、基因表达顺式元件和目的基因,而不含有其他外源DNA序列的双链或单链DNA。本研究利用杆状病毒表达系统,制备得到两种重组杆状病毒Bac-ITR-EGFP和Bac-inrep,并将二者的P3代病毒共同感染昆虫细胞Spodoptera frugiperda(Sf9),抽提小分子量DNA,获得AAV-ITR-EGFP基因表达微载体,2×107的Sf9细胞抽提可以得到100μg AAV-ITR-EGFP基因表达微载体,核酸电泳显示AAV-ITR-EGFP基因表达微载体主要以单体和二聚体的形式存在。将AAV-ITR-EGFP基因表达微载体通过polyethylenimine(PEI)转染HEK 293T细胞,24 h后荧光显微镜观察有EGFP表达,48 h后达到高峰,转化效率达到65%。     

基于消化酶和肠道益生菌作用的枇杷叶降血糖作用研究

目的：通过研究枇杷叶提取液消化前后对肠道益生菌的生长和代谢产生的影响，以及在消化过程中对消化酶活力的影响来探讨枇杷叶提取液的降血糖作用。方法：通过体外试验，考察了不同浓度的枇杷叶提取液对3种益生菌的增殖作用及对肠道消化酶的活性影响，并探讨了枇杷叶提取液经消化酶消化后对肠道益生菌的增殖作用。结果：（1）一定浓度的枇杷叶提取液对单独培养的双歧杆菌有显著的促进作用，但其对嗜酸乳杆菌的生长代谢无显著影响。（2）枇杷叶提取液经消化酶作用后对肠道益生菌的促生作用显著降低，甚至表现出抑制作用。（3）试验组代谢产物中的丙酸含量要明显高于对照组，而其他两种酸的含量差别并不显著。（4）浓度为6 g/L的枇杷叶提取液对蛋白酶活力的促进作用最为显著，而所研究的不同浓度枇杷叶提取液对胰淀粉酶活力均表现出抑制作用，对胰脂肪酶的活力无显著影响。结论：枇杷叶提取液可能是通过降低淀粉酶的活性及通过增加益生菌代谢产物中的丙酸含量来达到降低血糖浓度的目的。