膜泡运输蛋白VdSec22参与大丽轮枝菌胞外蛋白的分泌和致病性

摘要:【目的】验证大丽轮枝菌分泌途径中一个膜泡运输蛋白VdSec22的功能,为防治棉花黄萎病提供潜在的生物靶点。【方法】利用“正负双向筛选法”的方法,构建大丽轮枝菌VdSec22蛋白编码基因缺失的突变体菌株ΔQF。通过农杆菌介导的转化,将其编码基因VdSec22重新导入ΔQF构建了功能回补菌株CΔQF。以野生型菌株为对照,检测上述菌株分泌胞外蛋白(果胶酶、纤维素酶和毒素蛋白)的能力;采用蘸根接种的方法,检测上述菌株对棉花致病性的差异。同时通过定量PCR检测内质网分子伴侣表达量的方法,推断突变体菌株ΔQF中是否发生了内质网应激反应。【结果】成功构建了基因敲除突变体ΔQF和功能回补菌株CΔQF。突变体菌株ΔQF的果胶酶、纤维素酶、毒素蛋白的分泌能力和对棉花的致病性均较野生型减弱,并且产生了内质网应激反应。重新导入VdSec22基因可弥补突变体菌株ΔQF的上述缺陷。【结论】VdSec22是大丽轮枝菌的一个重要分泌途径蛋白,在大丽轮枝菌诸多胞外致病蛋白的分泌和棉花致病性中起重要作用。VdSec22可作为防治棉花黄萎病的潜在生物靶点。     

保卫细胞液泡活体标记方法的比较

液泡的活体标记是研究保卫细胞液泡动态的前提.结合作者的研究,介绍了利用丫啶橙 (acridine orange, AO)、Lysotracker Red DND-99、二乙酸荧光素(fluorescein diacetate, FDA)、2', 7'-二(羧乙基)-5(6)-羧基荧光黄(BCECF-AM)以及绿色荧光蛋白( green fluorescent protein, GFP)转基因等活体标记保卫细胞液泡的方法.研究结果表明, AO可以方便和快捷的标记保卫细胞液泡; FDA标记可以显示液泡的边界, 也可以用于保卫细胞液泡的标记.利用转染GFP融合基因的方法也是标记保卫细胞液泡的最好选择.