马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens )合成开菲尔多糖培养基组成的优化

研究了发酵培养基组成对Lactobacillus kefiranofaciens的菌体生长以及合成开菲尔多糖(Kefiran)的影响。通过比较L. kefiranofaciens利用各种糖类和麦芽汁的发酵情况,发现麦芽汁最利于菌体生长及发酵产糖;各种氮源对L. kefiranofaciens发酵影响不同,其中以酵母粉最好,采用一品鲜酵母粉发酵的最佳浓度为10%;正交实验和RSA方法确定对发酵影响显著的三个无机盐是MnSO4.4H2O、MgSO4.7H2O和KH2PO4,最佳用量为0.2g/L,1g/L,4g/L,此时发酵获得开菲尔多糖产量为2.6±0.05g/L。L. kefiranofaciens发酵生产开菲尔多糖96h时可达到最佳发酵结果。     

马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)产生的开菲尔多糖的分离及其结构特性

研究了Lactobacillus kefiranofaciens发酵产生的开菲尔多糖的初步纯化方法,并对开菲尔多糖的分子组成、分子量以及单糖之间的连接方式进行了研究。研究结果表明,采用酶解与Sevage试剂相结合的方法进行纯化,当蛋白去除率为93%时,多糖得率60%,样品中多糖的百分含量为96%。采用HPLC和红外光谱研究表明,培养基的组成会明显影响开菲尔多糖中葡萄糖与半乳糖的比例,由MRS培养基发酵产生的KEFⅠ的相对分子质量约为2.4×105Da,葡萄糖/半乳糖约为1:4;而由改良的MRS培养基发酵产生的KEFⅡ的相对分子质量约为1.5×105Da,葡萄糖/半乳糖约为1:10。Lactobacillus kefiranofaciens发酵的开菲尔多糖分子中均含有β糖苷键。     

唾液乳杆菌BSH1及其突变体的底物特异性

为了解析胆盐水解酶催化中心中关键氨基酸位点与其底物特异性的关系,以大肠杆菌pET-20b(+)表达系统为分子改造平台,采用理性设计,结合氨基酸定点突变的方法,成功构建了唾液乳杆菌Lactobacillus salivarius胆盐水解酶BSH1的7种突变体。通过对比L.salivarius BSH1及其突变体对6种结合胆盐的底物特异性表明,7种突变体对不同的结合胆盐的水解活性有所改变。结果说明,Cys2和Thr264分别是BSH1催化TCA和GCA的关键残基,且对酶的催化活性的保持具有关键作用。其中,高保守性的氨基酸位点Cys2不是BSH1唯一的活性位点,而其他突变的氨基酸位点可能作为BSH1的结合位点参与了底物的结合,也可能影响了底物进入BSH1活性中心的通道或底物结合口袋的体积与形状,进而影响了BSH1对不同结合胆盐的水解活性。     

电刺激家兔视前区-下丘脑前部对中脑躯体感觉单位的效应

家兔在氯醛糖-尿酯浅麻醉下手术,然后用三碘季胺酚制动。用玻璃微电极寻找中脑内侧网状结构对腓肠神经不同强度的刺激有反应的各种躯体感觉单位。对其中三类单位的活动及强直刺激视前区-下丘脑前部(PO-AH)对它们的影响作了分析。这三类单位是:高阈体感兴奋单位,即“痛”单位,高阈体感抑制单位和低阈体感抑制单位。对一些“痛”单位的位置作了组织学检查。实验结果表明:有16/31的“痛”单位放电受 PO-AH 强直电刺激的影响。在受影响的16个“痛”单位中,呈抑制效应的9个。这种抑制效应有时具有较长的后作用。18/31的“痛”单位的基础放电受 PO-AH 的影响,其中兴奋的10个。电刺激 PO-AH 对5个高阈体感抑制单位均呈加强抑制的效应,对17个低阈抑制单位的影响,也以抑制的居多数。PO-AH 对三类体感单位还有兴奋、兴奋-抑制效应。本文实验结果讨论了:(1)中脑内侧网状结构的“痛”单位。(2)PO-AH 与镇痛及针刺镇痛的关系。(3)PO-AH 对感觉功能的调制。