鸡氨肽酶N的高效可溶性表达及生物学功能分析

本研究旨为克隆鸡氨肽酶N(chAPN)基因,高效表达可溶性目的蛋白,并测定其生物学功能。应用RT-PCR方法从鸡胚肾细胞中克隆chAPN的基因片段,经测序鉴定后再克隆至原核表达载体pCOLD-TF,构建重组原核表达质粒pCOLD-TF-chAPN,在大肠杆菌BL21(DE3)中经不同条件诱导表达目的蛋白;利用镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定;Leu-PNA酶促反应和ELISA等方法检测目的蛋白生物学功能。结果显示,重组质粒pCOLD-TF-chAPN在大肠杆菌中以可溶形式高效表达;酶促反应及ELISA结果显示该蛋白具有酶活性,可结合传染性支气管炎病毒(IBV),并表现为剂量依赖性。这为今后研究chAPN的酶活性、作为IBV受体及抗病毒功能奠定了实验基础。     

黄河流域和长江流域棉区绿盲蝽对高效氯氰菊酯和毒死蜱的抗性监测

【目的】为了明确绿盲蝽Apolygus lucorum不同地理种群对化学杀虫剂的抗性现状及发展趋势,并为制定有效的化学防治措施及抗性治理策略提供参考,【方法】本文采用玻璃瓶药膜法,连续4年监测了采自黄河流域、长江流域棉区绿盲蝽田间种群对高效氯氰菊酯和毒死蜱的抗性水平及变化动态。【结果】(1)与室内饲养的廊坊敏感品系(Susceptible strain from Langfang,SLF)相比,长江流域棉区江苏南京及安徽滁州种群对2种药剂均未产生明显抗性(<5倍),江苏盐城种群对高效氯氰菊酯(3.4~8.5倍)和毒死蜱(3.3~5.8倍)仅有低水平抗性;(2)黄河流域棉区河南安阳、山东滨州及河北沧州种群对高效氯氰菊酯(7.1~22倍)、毒死蜱(5.2~20倍)均产生了中低水平抗性。【结论】2011至2014年间,各地理种群对两种药剂的敏感性在不同年度之间变异幅度小于3倍,抗性发展比较缓慢。黄河流域、长江流域棉区绿盲蝽田间种群对上述2种药剂敏感性的差异可能与当地用药历史和用药量有关。     

血清皮质抑素、分拣蛋白、人类白细胞抗原-G与妊娠期糖尿病患者糖代谢紊乱、胰岛素抵抗的关系及对妊娠结局的影响

摘要 目的：探讨血清皮质抑素（CST）、分拣蛋白（sortilin）、人类白细胞抗原-G（HLA-G）与妊娠期糖尿病（GDM）患者糖代谢紊乱、胰岛素抵抗的关系及对妊娠结局的影响。方法：选取2019年6月至2021年5月本院收治的333例GDM患者为研究组,另选取同期42例妊娠糖耐量正常的健康孕妇为对照组,比较两组研究对象糖代谢指标、胰岛素抵抗指标及血清CST、sortilin、HLA-G水平,采用Pearson相关性分析法分析糖代谢、胰岛素抵抗指标与血清CST、sortilin、HLA-G水平的相关性。根据随访期间的妊娠结局将GDM患者分为不良结局组与良好结局组,比较两组血清CST、sortilin、HLA-G水平及临床资料的差异,采用Logistic回归分析法明确导致GDM患者不良妊娠结局的危险因素。结果：研究组糖尿病家族史、合并高脂血症占比及空腹血糖（FPG）、服糖后1 h血糖（1hPG）、服糖后2 h血糖（2hPG）、糖化血红蛋白（HbAlc）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及sortilin水平均高于对照组（P＜0.05）,研究组血清CST、HLA-G水平低于对照组（P＜0.05）。GDM患者血清CST、HLA-G与FPG、2hPG、HbAlc、FINS、HOMA-IR均呈负相关（P<0.05）,血清sortilin与FPG、2hPG、HbAlc、FINS、HOMA-IR均呈正相关（P<0.05）。研究组不良妊娠结局发生率为15.32%。不良结局组年龄≥35岁、孕前1个月体质量指数（BMI）≥24 kg/m²、有不良孕产史、糖尿病家族史、合并高脂血症、血糖控制不佳占比及血清sortilin水平均高于良好结局组,血清CST及HLA-G水平低于良好结局组（P＜0.05）。Logistic回归分析结果显示,年龄≥35岁、孕前1个月BMI≥24 kg/m²、血糖控制不佳、血清CST低水平、血清sortilin高水平、血清HLA-G低水平为GDM患者妊娠结局不良的危险因素（P＜0.05）。结论：GDM患者血清CST、sortilin、HLA-G与糖代谢紊乱、胰岛素抵抗及不良妊娠结局关系密切,提示临床在加强血糖监测和控制的同时,检测血清CST、sortilin、HLA-G可能有助于评估GDM患者病情和预测不良妊娠结局的发生风险。     

鄂尔多斯地区自然发酵苦菜中优良特性乳酸菌的筛选

【背景】鄂尔多斯地区传统自然发酵苦菜风味和作用独特,但目前尚无关于发酵苦菜中乳酸菌种类及其生物学特性研究的报道。【目的】获得适用于工业化生产特性优良的乳酸菌。【方法】通过测定总酸度筛选高产酸菌株,并进行形态学鉴定、生理生化特性研究,以及16S rRNA基因片段分析。【结果】经鉴定5株高产酸的菌株均为植物乳杆菌,生长温度范围宽,并且具有耐酸、耐碱、耐盐、耐热的特性。【结论】试验菌株具有优良的生理特性和潜在的益生特性,可用于食品工业的生产。     

几株益生菌的体外抗新城疫病毒作用

【目的】探讨益生菌的抗新城疫病毒(NDV)作用并分析其可能的机制。【方法】采用NDV血凝试验和MTT比色法,分别在体外和鸡胚成纤维细胞(CEF)上评价益生菌对NDV血凝价和抑制率的影响。【结果】所选择的5株益生菌及其代谢产物都极显著地降低了NDV的血凝价,而2株致病菌及其代谢产物对NDV的血凝价均没有影响,这一结果说明益生菌可能对NDV具有直接破坏的作用,并且具有菌株特异性。益生菌可以显著地提高CEF对NDV的抑制率,并且这种作用具有量效关系(P0.01)。益生菌与细胞作用后再感染病毒,对NDV抑制率升高的结果反映了益生菌对NDV吸附细胞的阻断作用;从益生菌与病毒同时接入细胞后降低病毒对细胞侵害的现象,可以看出益生菌可能对病毒具有直接破坏作用;在细胞感染病毒后再接入益生菌对NDV抑制率极低的现象说明,病毒感染后益生菌再很难起作用。【结论】益生菌对NDV既具有直接破坏的作用,又可以阻断NDV对细胞的感染、抑制其在细胞内的增殖。     

高原链带藻抗氧化蛋白分离纯化与结构鉴定

【背景】微藻Desmodesmus sp. QL96从我国西藏地区分离得到,经形态鉴定隶属于链带藻属。前期研究发现,这种链带藻在4℃和25℃下均可生长,在25℃生长时,干细胞中蛋白质含量可高达71.68%(质量分数),而且蛋白粗提物具有一定的抗氧化活力。【目的】分离纯化Desmodesmus sp. QL96细胞中具有抗氧化活力的蛋白质,并对其结构进行鉴定。【方法】应用柱层析的方法分离纯化Desmodesmus sp. QL96细胞中具有抗氧化活力的蛋白质,通过化学发光法和细胞学实验对该蛋白的抗氧化活性进行检测,并通过质谱技术对其一级结构进行检测。【结果】Desmodesmus sp. QL96细胞中抗氧化蛋白的含量占微藻细胞干重的11.40%(质量分数);纯化的Desmodesmus sp. QL96抗氧化蛋白在一定浓度范围内对OH-、DPPH、ABTS自由基和H2O2具有较好的清除率(超过60%),细胞学实验显示其对H2O2诱导的HepG2细胞氧化损伤具有抑制作用,验证了其抗氧化功能;通过质谱技术检测了Desmodesmus sp. QL96抗氧化蛋白的氨基酸序列,并进行了生物信息学分析,结果显示,这种蛋白质的理论分子量为44.8 kD、pI 5.79,与NCBI中目前已知的其他物种蛋白质的相似性不超过59%。【结论】Desmodesmus sp. QL96可能生产一种具有抗氧化活性的新蛋白质,后续将对其转录本进行分析,验证其遗传信息的同源性,并分析其规模化生产和应用前景。