丝状真菌中的Velvet家族蛋白

丝状真菌是重要的微生物资源,能够产生大量的小分子活性化合物,如β-内酰胺类抗生素、夫西地酸、环孢霉素和他汀类药物等。这些小分子次级代谢产物的生物合成受全局性调控因子的调控,除丝状真菌中已发现的Lae A外,还存在一类具有Velvet结构域的特殊调控因子,它们在丝状真菌的生长发育和次级代谢调控中发挥着重要的作用。本文综述了丝状真菌Velvet家族蛋白(Ve A、Vel B、Vos A和Vel C)的结构特征及其对有性生殖、无性生殖和次级代谢产物合成等方面的调控作用,并探讨了可能的分子调控机制通路,为揭示次级代谢调控网络和激活沉默基因产生新型结构的化合物提供一定的参考价值。     

过表达全局调控因子LaeA对橘青霉美伐他汀的合成及产孢的影响

【目的】研究橘青霉中全局性调控因子Lae A过表达对美伐他汀生物合成过程及产孢的影响。【方法】同源克隆法从橘青霉中克隆获得lae A基因,构建p Gi HTGi-lae A载体,经农杆菌介导转化转入橘青霉,利用hygromycin基因进行阳性克隆子的PCR筛选。使用HPLC方法比较PGA发酵液中橘青霉野生型菌株WT和Lae A过表达菌株OE::lae A的美伐他汀产量差异。血球计数法进行孢子产量比较。荧光定量PCR方法分析WT和OE::lae A中美伐他汀合成基因簇表达量。【结果】成功构建p Gi HTGi-lae A载体,并获得Lae A过表达橘青霉菌株(OE::lae A)。OE::lae A中,lae A基因表达量较WT增加29%,mlc B表达量较WT增加72%,mlcR表达量增加153%,孢子产量由(2.38±0.24)×107/cm2减少到(1.40±0.11)×107/cm2,美伐他汀产量从(35.77±4.63)mg/L提高到(201.46±9.98)mg/L。【结论】在橘青霉中过表达Lae A可能通过提高mlcR和mlc B基因的转录来增加美伐他汀的产量,同时过表达lae A基因不利于孢子的形成。这些结果为美伐他汀生物合成的全局性调控和高产菌株的开发提供基础。     

甜味剂对七味白术散治疗抗生素相关性腹泻小鼠肠道微生物及酶活性的影响

目的 探讨4种常用甜味剂对七味白术散治疗抗生素相关性腹泻的影响，为药剂辅料的选用对药效的影响及临床治疗指导患者服药提供实验依据。方法 选择42只SPF级昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、七味白术散组、蔗糖组、糖精钠组、山梨醇组和木糖醇组，每组6只。造模阶段正常组灌胃无菌水，模型组和治疗组采用抗生素混合液（庆大霉素+头孢拉定）建立小鼠抗生素相关性腹泻模型。治疗阶段对正常组和模型组小鼠灌胃无菌水，5个治疗组小鼠分别灌胃七味白术散、蔗糖+七味白术散、糖精钠+七味白术散、木糖醇+七味白术散及山梨醇+七味白术散。治疗结束后，分别收集各组小鼠脾脏、胸腺以及肠道内容物，进行脏器指数、肠道微生物数量及肠道酶活性分析。结果 与模型组相比，七味白术散组和山梨醇组小鼠的脾脏指数增加，但差异无统计学意义（均P>0.050）；各组小鼠的胸腺指数差异无统计学意义（P>0.050）。与七味白术散组相比，添加甜味剂组别的腹泻小鼠肠道内容物中的细菌数和大肠埃希菌数均有一定程度的增加，其中山梨醇组的大肠埃希菌数量变化最小（P=0.002）；蔗糖组和山梨醇组腹泻小鼠肠道内容物中的双歧杆菌数量（P<0.00...