人骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白在昆虫细胞中的表达和活性分析

目的:利用BaculoDirect杆状病毒表达系统融合表达人OPG功能片段p22-194和分枝杆菌HSP70 p111-125基因,并鉴定重组蛋白及其生物学活性。方法:将编码人OPG功能片段和分枝杆菌HSP70功能片段基因克隆至杆状病毒转座载体,将重组转座载体与BaculoDirectTM Linear DNA进行LR重组连接反应,构建出重组杆状病毒DNA,转染Sf9昆虫细胞,获得重组病毒。在Sf9细胞中进行表达,并对表达产物进行SDS-PAGE电泳、Western blotting分析,用Ni柱纯化。采用破骨细胞生成抑制试验和抑炎试验鉴定表达产物的生物学活性。结果:重组病毒在感染昆虫细胞后48h开始出现一相对分子质量为28 kDa大小的特异条带,感染后72～96 h蛋白量达到高峰。破骨细胞生成抑制实验及抑炎试验结果显示,重组蛋白能明显抑制破骨细胞的生长和分化,同时亦具有抑制炎症反应的作用。结论:利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中成功表达OPG-HSP70融合蛋白,该融合蛋白具有抑制破骨细胞生成和抑制炎症反应生物学活性。     

Dot-ELISA检测莱姆病血清抗体的实验研究

经实验研究,建立了检测莱姆病血清IgG的Dot-ELISA方法。阻断试验表明,本法具有特异性。经对10例伯氏疏螺旋体人工感染兔血清和24例正常兔血清标本的检测证实,该法与常规ELISA法检测的符合率为100％。重复性试验表明其重复性良好。     

Dot-ELISA检测莱姆病血清抗体的实验研究

经实验研究,建立了检测莱姆病血清IgG的Dot-ELISA方法。阻断试验表明,本法具有特异性。经对10例伯氏疏螺旋体人工感染兔血清和24例正常兔血清标本的检测证实,该法与常规ELISA法检测的符合率为100％。重复性试验表明其重复性良好。     

沙打旺牧草接种根瘤菌的增产效果

沙打旺是豆科黄芪属多年生草本植物。八十年代初,辽宁省开始大面积飞播和人工种植,用以改良“三化”草场和治理水土流失。在辽西广种沙打旺的土壤中沙打旺根瘤菌很少,其结瘤率在20％以下,有效瘤甚少,固氮能力很低。为改善沙打旺根系结瘤状况,提高共生固氮效果,增加飞播草地经济效益,我们于1983     

用间接荧光免疫法快速检测牙周袋内牙龈类杆菌

本试验选择成年牙周炎致病菌—产黑色素类杆菌群中牙龈类杆菌为指示菌,用牙龈类杆菌47A—1参考株制备标准抗血清,并和羊抗兔IgG荧光抗体,直接与牙周龈下菌斑标本涂片进行间接荧光反应,计数一个视野荧光反应阳性的牙龈类杆菌的菌数(三个视野平均值)。全过程只需1.5～2小时。用此法检查了90例健康人,75例牙龈炎及70例牙周炎患者,结果发现正常牙周人的牙龈类杆菌菌数为     

重组人IL-17A和IL-17F的制备方法及活性测定

人IL-17A和IL-17F具有很高的同源性,在炎症性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤中都发挥着重要的作用,是当前研究的热点.应用原核表达系统在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达了人IL-17A和IL-17F;经培养条件的优化,未发现可溶性目的蛋白的表达,免疫印记分析显示,重组蛋白位于包涵体中;对包涵体进行洗涤、凝胶过滤层析纯化和柱上复性,获得重折叠的可溶性蛋白;随后用SDS-PAGE对蛋白样品进行了纯度分析、采用免疫印记和质谱的方法鉴定蛋白产物成分、用ME3T3-E1和RAW264.7两个细胞株对IL-17A、IL-17F的生物学活性进行测定.结果显示,柱上复性的方法制备的谊重组蛋白具有较高的纯度和活性.建立的重组人IL-17A和IL-17F的制备方法可为相关研究中细胞因子的大量应用提供参考.     

1,3-二氯丙烯药剂对土壤微生物数量和酶活性的影响

通过室内培养实验研究了1,3-二氯丙烯对土壤中微生物数量和土壤酶活性的影响,以评价其环境生态效应.结果表明,1,3-二氯丙烯熏蒸土壤后,各浓度处理对土壤真菌数量有强烈的抑制作用;对土壤细菌和放线菌的影响开始均表现为抑制作用,然后抑制作用减弱,逐渐表现出一定的激活作用.1,3-二氯丙烯熏蒸土壤后,高浓度处理对土壤脲酶表现为抑制-激活作用;低浓度处理表现为激活-抑制-激活作用.对蔗糖酶表现为激活-抑制作用,且抑制率逐渐增大.对过氧化氢酶表现为抑制-激活作用,50 d后施药土壤和对照组土壤的过氧化氢酶活性基本趋于一致.