骨髓间充质干细胞移植对急性肝功能衰竭大鼠肝再生、炎症反应及转换生长因子-β受体的影响

摘要 目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对急性肝功能衰竭（ALF）大鼠肝再生、炎症反应及转换生长因子-β受体（TGF-βR）的影响。方法：将90只SD级大鼠以随机数表法分成模型组（n=30）、健康组（n=30）及治疗组（n=30）。健康组不予以任何处理,模型组和治疗组大鼠则通过四氯化碳蓖麻油溶液腹腔注射制作ALF大鼠模型,治疗组大鼠取BMSCs通过门静脉注射治疗,模型组则予以等量生理盐水干预。造模后第7 d,比较三组大鼠的肝功能指标水平,炎症反应以及TGF-βR相关指标表达情况,并进行相关性分析。结果：模型组与治疗组大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）以及总胆红素（TBIL）水平均高于健康组,但治疗组大鼠上述肝功能指标水平低于模型组（均P＜0.05）。模型组与治疗组大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平以及肝组织TNF-α mRNA表达均高于健康组,但治疗组大鼠血清TNF-α水平以及肝组织TNF-α mRNA表达低于模型组（均P＜0.05）。模型组与治疗组大鼠TGF-βR1和TGF-βR2蛋白表达均高于健康组,但治疗组大鼠上述蛋白表达低于模型组（均P＜0.05）。经Spearman相关性分析发现：ALT、AST及TBIL水平与血清TNF-α、TNF-α mRNA及TGF-βR1、TGF-βR2蛋白表达水平均呈正相关关系（均P＜0.05）。结论：BMSCs移植在促进ALF大鼠肝再生方面效果显著,且有效减轻炎症反应、下调TGF-βR1和TGF-βR2表达水平。     

MUM1、UBE1在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的探讨MUM1、UBE1在弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中的表达及预后判断中的应用价值。方法对80例DLBCL,NOS标本,采用免疫组织化学EnVision二步法检测MUM1和UBE1的表达,并与临床资料比较。结果MUM1、UBE1在DLBCL中表达的阳性率分别为62．5％（50／80）及65％（52／80）,MUM1及其与UBE1同时表达时与患者的Ann Arbor分期、年龄、结外侵犯部位数目、LDH水平及国际预后指数的危险度均相关（P〈0．05）;生存分析显示MUM1及其与UBE1同时表达时,生存率较低。结论MUM1在DLBCL中高表达提示预后不良,特别是在同时出现UBE1高表达时更显著;MUM1和UBE1同时高表达可作为判断患者预后的重要指标。     

共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒的构建及其免疫原性研究

为研制猪瘟活载体疫苗,构建共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒并研究其免疫原性。应用PCR方法从pMD19-T-E2质粒和pMD19-T-pIL2质粒中分别扩增E2基因和pIL-2基因,将扩增的全长E2基因和pIL-2的编码区基因序列通过柔性接头序列(5个甘氨酸密码子)串联,插入腺病毒穿梭载体AdTrack中,在受体菌中与骨架载体AdEasy同源重组。重组质粒AdEasy-E2-pIL-2转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒rAd-E2-pIL-2。用rAd-E2-pIL-2免疫家兔,经兔体交互免疫试验评定其免疫效果。结果显示,经RT-PCR和West-ern blot检测,成功构建了rAd-E2-pIL-2,重组病毒滴度达108.12PFU/mL。rAd-E2-pIL-2接种家兔后刺激接种兔产生猪瘟病毒特异性抗体,淋巴细胞转化试验结果显示猪瘟病毒诱导兔淋巴细胞特异性增殖,攻毒后rAd-E2-pIL-2接种兔和猪瘟病毒C株接种兔均未出现定型热反应。研究结果表明,rAd-E2-pIL-2免疫兔可以预防猪瘟病毒C株接种引发的体温反应,rAd-E2-pIL-2可望成为猪瘟候选疫苗。     

促泌素在胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达及其临床意义

目的 比较促泌素(secretagogin,SCGN)与传统的神经内分泌标记物在胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达差异.方法 收集胃肠道手术标本共88例,其中实验组为8例类癌和20例非典型类癌,对照组为40例腺癌伴神经内分泌分化和20例腺癌.所有标本均使用SCGN、PGP9.5、CD56、NSE、Syn及CgA进行免疫组织化学SP两步法染色.结果 SCGN可在胃肠道粘膜同有层腺体的弥散性神经内分泌细胞中表达,多显示“开放型”的神经内分泌细胞.除CD56和NSE各在1例胃肠道腺癌中阳性表达外,SCGN及其它标记物在20例腺癌中均无表达,所有标记物之间均无统计学差异(P＞0.05).SCGN在40例胃肠道腺癌伴神经内分泌分化、20例非典型类癌和8例类癌巾的阳性表达率均最高,分别为62.5％ (25/40)、90％(18/20)和100％(8/8),PGP9.5阳性表达率均最低分别为32.5％(13/40)、45％ (9/20)和37.5％(3/8),两标记物在这三组肿瘤中的表达均有显著统计学差异(P＜0.01),而CD56、NSE、Syn和CgA在以上三组肿瘤中的表达率均较高,与SCGN比较均无统计学差异(P＞0.05).所有标记物在腺癌伴神经内分泌分化、非典型类癌和类癌中的阳性表达率均明显高于腺癌(P＜0.01);SCGN、Syn和CgA在非典型类癌和类癌巾的阳性表达均高于腺癌伴神经内分泌分化(P＜0.05);所有标记物在非典型类癌和类癌之间的阳性表达率均无统计学差异(P＞0.05).结论 SCGN作为一种新型的神经内分泌标记物与传统标记物Syn和CgA联合,可应用于胃肠道神经内分泌肿瘤的临床病理诊断.     

减毒鼠伤寒沙门菌三型分泌表达系统的构建及其特性

为开发新型重组减毒鼠伤寒沙门菌口服活疫苗载体,本研究以pYA3493质粒为基础,用鼠伤寒沙门菌sopE_(Nt100)基因及其启动子替代原有的P_(trc)启动子,构建沙门菌三型分泌表达载体pYA-sopE_(Nt100);再将质粒pYA-sopE_(Nt100)电转入沙门菌ΔcrpΔasd SL1344,构建减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统,研究其生物学特性,进一步将报告基因egfp克隆入sop E基因下游,构建重组菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100)-egfp),感染Vero细胞,用Western blotting分析该系统递呈外源抗原的能力。PCR、酶切及测序结果表明,减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统构建成功;生物学特性鉴定结果表明,其血清型与亲本株Δcrp SL1344及野生株SL1344保持一致;其生化特性与亲本株基本相近,但与野毒株相比发生明显变化;生长速度也更为缓慢;重组菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))的LD50较野生株SL1344降低了7.0×104倍;Western blotting结果发现,重组菌培养上清中能检测到Sop E_(Nt100)-egfp融合蛋白(37 k Da);重组菌株感染Vero细胞后,可以同时检测到Sop E_(Nt100)-egfp融合蛋白(37 k Da)和EGFP蛋白(27 k Da)。以上结果证实,本研究成功构建了新型减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统,其能够有效递呈外源抗原,该重组菌株有潜力作为安全、稳定、高效表达外源基因的口服重组活疫苗载体。     

柠条根系中丛枝菌根真菌的季节性变化及影响因素

采用传统染色检测与PCR-DGGE相结合的方法,研究了柠条根系丛枝菌根真菌(AMF)的季节性变化, 并利用主成分分析(PCA)和典范对应分析(CCA)分析了土壤因子与AMF季节变化之间的关系.结果表明: 柠条根系AMF总侵染率、丛枝侵染率、泡囊侵染率和土壤孢子密度均具有显著的季节性差异. 总侵染率从春季至秋季呈下降趋势,其他指标呈上升趋势. 春、夏、秋3个季节的柠条根系中共检测出9种AMF分子种,但每个季节的AMF群落组成、多样性指数均有一定的差异.主成分(PCA)和典范对应分析(CCA)表明,随着土壤总氮、总磷和有机碳的增加,泡囊侵染率减少;随着土壤含水量和速效磷的降低, 土壤AMF孢子密度增加;根系内AMF群落组成的季节性差异主要受土壤总磷、速效磷和有机碳的影响.     

鼠伤寒沙门菌SL1344株环化腺苷酸合成酶缺失株平衡致死系统的构建及其雏鸡免疫保护试验

摘要:【目的】为构建鼠伤寒沙门菌环化腺苷酸合成酶缺失株平衡致死系统,并对其生物学特性进行检测。【方法】以鼠伤寒沙门菌SL1344Δcya株为亲本株,利用重组自杀性质粒(pREΔasd)介导的同源重组技术,经两步法缺失并筛选asd基因缺失株(SL1344Δcya Δasd)。将含asd基因且无抗性的pYA3493质粒电转化至缺失株SL1344ΔcyaΔasd,构建重组菌株SL1344ΔcyaΔasd (pYA3493)。【结果】试验结果表明,重组菌株SL1344ΔcyaΔasd(pYA3493)生化特性和生长速度与参考株SL1344相比差异较大,与亲本株SL1344Δcya基本一致,SL1344ΔcyaΔasd(pYA3493)失去了利用麦芽糖、乳糖、山梨醇等碳源的能力,也不能分解H2 S、半乳糖和鼠李糖,但仍保留了利用葡萄糖的能力。对1日龄雏鸡攻毒试验表明,SL1344ΔcyaΔasd(pYA3493)毒力较参考株SL1344降低了约104倍。免疫保护试验显示,1日龄雏鸡免疫SL1344ΔcyaΔasd(pYA3493)后第17天,利用鼠伤寒沙门菌参考株攻毒,保护率为62.5%。【结论】鼠伤寒沙门菌SL1344株环化腺苷酸合成酶缺失株平衡致死系统构建成功,且具有较好的免疫保护性,为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服疫苗奠定基础。     

新疆卡拉麦里山有蹄类自然保护区冬季狼的家域

正狼(Canis lupus)是食肉目(Carnivora)、犬科(Canidae)、犬属(Canis)食肉类哺乳动物(盛和林等,1999),是世界上分布最广和研究最多的大型食肉动物(Ripple et al.,2014)。目前,我国狼的分布已由过去的全国性分布缩小至东北、西北和内蒙等地区(Zhang,1999)。在斯洛伐克,研究人员通过无线电项圈获取分布在两个国家公园内两群狼的家域利用情况(Findo and Chovancova,2004),加     

26例中国先天性晶状体异位患者的基因诊断及手术初步效果观察

摘要 目的：总结26例中国先天性晶状体异位患者的基因诊断及晶状体异位的手术疗效。方法：回顾性收集2019年3月-2020年3月就诊于北京同仁医院眼科来自不同家系的双眼先天性晶状体异位患者26例共52眼。收集详细临床资料，提取外周静脉血全基因组DNA，应用靶向基因捕获技术筛查晶状体异常相关基因突变对所有患者进行基因诊断，采取微创晶状体-玻璃体切除或白内障超声乳化手术，记录视力、人工晶状体位置及主要并发症，采用配对t检验对术前术后最佳矫正视力进行比较。结果：患者均为汉族，男性14例，女性12例，年龄（21.2±15.2）岁。25例患者存在FBN1突变，1例为GJA8突变。22例（84.6%）可确诊为马凡综合征，3例诊为"潜在马凡综合征"。42眼采取微创晶状体-玻璃体切除类手术，7眼采取白内障超声乳化类手术。有31眼（59.6%）存在视网膜变性行网膜激光光凝。平均随诊时间（15.7±3.7）月，术后6个月及末次随访的最佳矫正视力（最小分辨角对数视力，0.30±0.16及0.21±0.11）均高于术前（0.76±0.31），差异有统计学意义（t=12.492，P＜0.001；t=13.171，P＜0.001）。术后所有眼的人工晶状体位置及稳定性良好，未发生视网膜脱离、黄斑水肿、人工晶状体脱位、人工晶状体偏位、继发性青光眼、眼内炎等并发症。结论：马凡综合征是此26例中国人先天性晶状体异位的主要病因，FBN1基因突变检测可为确诊提供有力证据，微创晶状体-玻璃体切除联合人工晶状体悬吊术效果好。     

马铃薯HXK基因家族鉴定及表达特征分析

为探究马铃薯HXK家族的功能，本研究利用生物信息学方法，对马铃薯HXK基因家族成员进行鉴定，并采用实时荧光定量PCR对该基因在不同模拟逆境胁迫下的表达进行分析。研究利用同源比对方法从马铃薯基因组中鉴定获得到6个马铃薯HXK基因，分别命名为StHXK1-StHXK6。该家族基因分别分布于马铃薯的6条染色体上，其编码蛋白长度为497~533 aa，等电点为5.36~6.11，分子质量在53 736.38~58 184.71 Da，均为亲水蛋白。亚细胞定位预测表明，StHXK家族成员主要在叶绿体中表达。该家族成员二级结构均以α-螺旋和不规则卷曲为主，三级结构高度相似。顺势元件分析发现马铃薯HXK基因主要包含光响应元件、激素响应元件、胁迫响应元件及生长发育相关元件。qRT- PCR结果表明，StHXK基因在ABA诱导下均上调表达显著，50 μmol/L ABA胁迫下，StHXK1和StHXK2在处理24 h相对表达量较高，分别为对照的286.4倍和152.02倍，200 mmol/L NaCl处理下，除StHXK1和StHXK4基因相对表达量在处理时间2 h呈上调表达，其余StHXK基因均呈不同程度的下调表达。在10% PEG胁迫处理下，StHXK基因相对表达量呈不同程度的上调表达。综上所述，StHXK基因对ABA、NaCl和PEG胁迫处理均存在不同程度的响应。