高浓度氯苯优势降解菌的筛选及其降解酶的纯化

[目的]分离纯化出一株高浓度氯苯优势降解菌株,对其所产氯苯降解酶进行分离与纯化,为该菌株及其氯苯降解酶的研究提供理论参考.[方法]利用梯度富集培养技术和无菌滤纸片平板法分离菌株,通过形态特征及16S rRNA基因序列分析初步鉴定菌株,用气相色谱法测定培养液中氯苯浓度,以单位细胞氯苯降解率评价菌株对氯苯的降解能力,以氯苯降解率表示氯苯降解酶的活性.取纯化菌株的发酵酶液制备粗酶液,经硫酸铵梯度盐析、透析脱盐、DE-52离子交换层析、G-100凝胶层析和透析浓缩后,进行SDS-PAGE凝胶电泳检验酶的纯度并测定酶的分子量.[结果]从氯苯长期驯化的成熟期活性污泥中筛选到一株以氯苯为唯一碳源和能源的氯苯优势降解细菌LW13,该菌株在以2000 mg/L氯苯为唯一碳源的无机盐培养基中仍能正常生长,其单位细胞氯苯降解率可达1.37 ×10-10.扫描电镜观察到该菌株细胞大小约为2.3 ×0.8μm,长有数根端生鞭毛.16S rRNA基因序列相似性比较表明该菌株与Lysinibacillus fusiformis(溶藻菌)的相似性达95.5％.所纯化的氯苯降解酶为胞外酶,带正电荷,其分子大小约为57 kDa.整个纯化过程中酶纯化倍数化达8.0倍,酶活回收率达52.51％,酶量回收率达6.57％.纯化后的氯苯降解酶在30℃-55℃和pH在6.0-8.0之间都保持较高的酶活性,其最适反应温度和pH分别在40℃和pH8.0左右.[结论]所分离的氯苯优势降解菌属于Lysinibacillus属菌株,该菌株能有效降解高浓度(500-2000 mg/L)氯苯废水,通过逐级分离纯化,可获得氯苯降解酶纯酶,纯化指标符合分离纯化基本规律,纯化效果较为理想.     

低氧促进肺腺癌A549细胞迁移的机制*

目的: 探讨低氧促进肺腺癌A549细胞迁移的机制。方法: 培养肺腺癌A549细胞,转染慢病毒获得稳定敲低ACC1的A549细胞株,转染si-RNA获得敲低SREBP-1的A549细胞。分别以低氧(5％ O₂)联合低氧诱导因子1α(HIF-1α)抑制剂PX-478(25 μmol)处理A549细胞,低氧联合亚油酸(LA)(20 μmol)处理敲低ACC1的A549细胞,低氧处理敲低胆固醇调节原件结合蛋白1(SREBP-1)的A549细胞。Transwell实验检测细胞迁移,蛋白质印迹法检测HIF-1α、ACC1及上皮-间质转化(EMT)相关波形蛋白(Vimentin)及E-钙黏蛋白(E-Cadherin)的表达与SREBP-1的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测低氧联合HIF-1α抑制剂PX-478(25 μmol)处理A549细胞后ACC1及SREBP-1 mRNA水平变化。每项实验重复三次。结果: 与常氧组相比,低氧组A549细胞迁移数增加,ACC1与HIF-1α表达上调(P均＜0.01),SREBP-1表达上调(P＜0.05);与低氧对照组相比,PX-478(25 μmol)抑制A549细胞迁移,SREBP-1表达下调(P＜0.05);低氧处理A549细胞后ACC1 mRNA上升(P＜0.05),SREBP-1 mRNA水平上升(P＜0.01);低氧并使用PX-478(25 μmol)处理A549细胞24 h,ACC1 mRNA水平下降(P＜0.05),SREBP-1 mRNA 水平下降(P＜0.01);转染si-RNA获得敲低SREBP-1的A549细胞,Transwell 实验显示si-SREBP-1组细胞迁移数较常氧对照组减少(P＜0.01);低氧处理si-SREBP-1组与si-NC组,与对照组相比si-SREBP-1组细胞迁移数减少(P＜0.01)但与常氧组相比差异无统计学意义(P＞0.05);Western blot检测到si-SREBP-1组ACC1表达较对照组下降(P＜0.01);低氧处理si-SREBP-1组,ACC1表达较对照组下降(P＜0.01);敲低ACC1抑制A549细胞迁移(P＜0.05),敲低ACC1后A549细胞在常氧和5％ O₂条件下细胞迁移数目差异无统计学意义(P＞ 0.05);低氧处理敲低ACC1的A549细胞并给予LA(25 μmol)促进A549细胞迁移(P＜0.05)。结论: 低氧通过HIF-1α/SREBP-1/ACC1途径调节脂肪酸代谢进而促进肺腺癌A549细胞迁移。     

陆地棉品种和骨干品系黄萎病抗性鉴定

选育和推广抗病品种是防治陆地棉黄萎病的主要措施,为了早日实现多类型、多区域大面积抗病品种的应用,本研究选取107份遗传背景差异较大的种质,利用河北省农林科学院棉花研究所小安舍试验站黄萎病病圃进行了3年黄萎病抗性重复鉴定。鉴定得到抗病品系8个,占7.5%;耐病品种(系)20个,占18.7%。本研究表明,当前被作为育种亲本的抗病品系还太少,需要深入开展抗病遗传机制,以及与其他经济性状协同改良的关系,为陆地棉抗病育种提供理论指导;达到抗病或接近抗病水平的大部分品种(系)来自于海陆野远缘后代,具有外源基因血统,证明了远缘杂交是陆地棉黄萎病抗性改良的有效手段。     

冻干甲型肝炎减毒活疫苗的研制

研制冻干甲肝减毒活疫苗,提高疫苗的稳定性,便于保存及运输,保证疫苗的接种效果.采用CA-9冻干保护剂,按13.5的比例加入疫苗,制备冻干疫苗.冻干甲肝减毒活疫苗具有与液体疫苗相同的安全性及免疫原性.在2～8℃保存的有效期较液体疫苗的3～5个月提高到18个月.在室温和37℃保存的稳定性也明显提高.冻干甲肝减毒活疫苗的稳定性良好,无需低温保存、冷链运输,便于甲肝疫苗的大规模推广应用.     

几种珍贵的热带蝴蝶

几种珍贵的热带蝴蝶１蓝地蛱蝶ＰｒｅｃｉｓｏｒｉｔｈｙａＬｉｎｎａｅｕｓ翅展４５～５８ｍｍ。雌雄色彩不同。主色翠蓝，前后翅外部各有两个翠蓝眼纹，又称翠蓝眼蛱蝶。产于亚洲东南部中国、柬甫寨、马来西亚等地。常见于稻田之中。以其艳丽和稀有而珍贵。２美目蛱蝶Ｐ...     

用人工合成的丁型肝炎病毒抗原多肽检测丁肝病毒IgM抗全及其初步应用

用人工合成的丁型肝炎病毒抗原（ＨＤＶ－Ａｇ）肽建立了检测抗ＨＤＶ－ＩｇＭ抗体的ＥＬＩＳＡ方法。本法操作简便、快速、重复性好、特异性强,与抗ＨＡＶ－ＩｇＭ＇抗ＨＢｃ－ＩｇＭ、抗ＨＢｓ－ＩｇＭ、抗ＨＣＶ－ＩｇＭ、抗ＣＭＶ－ＩｇＭ、抗ＲＶ－ＩｇＭ、类风湿因子（ＲＦ）及抗核抗体（ＡＮＡ）阳性血清均不起反应,且可被２－巯基乙醇阻断而不起反应。经初步临床应用,３１例正常人血清抗ＨＤＶ－ＩｇＭ全部阴性,２８例慢     

用人工合成的丁型肝炎病毒抗原多肽检测丁肝病毒IgM抗体及其初步应用

用人工合成的丁型肝炎病毒抗原（ＨＤＶ－Ａｇ）肽建立了检测抗ＨＤＶ－ＩｇＭ抗体的ＥＬＩＳＡ方法,本法操作简便、快速,重复性好,特异性强,与抗ＨＡＶ－ＩｇＭ、抗Ｈｋ－ＩｇＭ、抗ＨＢｓ－ＩｇＭ、抗ＨＣＶ－ＩｇＩ、抗ＣＭＶ－ＩｇＭ、抗ＲＶ－ＩｇＭ、类风湿因子（ＲＦ）及抗核抗体（ＡＮＡ）阳性血清均不起反应,且可被２－巯基乙醇阻断而不起反应。经初步临床应用,３１例正常人血清抗ＨＤＶ－ＩｇＭ全部阴性,２８例慢活肝患者检出率为３２．１％（９／２８）,１７例慢迁肝患者血清阳性率为１１．８％（２／１７）１８例肝癌和肝硬化病人血清阳性率为２２．２％（４／１８）这三组病人与正常对照者相比较均有显著性差异（Ｐ＜０．００１）。此外,抗ＨＤＶ－ＩｇＭ阳性血清的ＡＬＴ值均明显高于正常参考范围,提示在ＨＤＶ感染过程中,患者肝细胞进一步受损。实验结果证明,抗ＨＤＶ－ＩｇＭ是诊断ＨＤＶ感染的重要指标,对ＨＤＶ感染早期诊断具有重要价值。     

克山病是一种“心肌线粒体病(Mitochondrial Cardiomyopathy)”

亚急克病人心肌线粒体内膜电子传递链的琥珀酸氧化酶系,琥珀酸脱氢酶和细胞色素氧化酶活性明显低于对照。H~ -ATP酶的活性及其对寡霉素的敏感性都明显下降。ATP能量化后线粒体膜电位的变化也比对照明显降低。膜脂流动性低于对照。亚急克病人心肌线粒体内观察到较多的电子致密无定形物质,经电镜X射线微区等方法分析,认为这些物质不是Ca_3(PO_4)_2,而可能是一种蛋白质凝聚物。此外,心肌线粒体的硒含量远低于对照,而Ca含量明显高于对照。上述结果都反映亚急克病人心肌线粒体明显损伤。根据克山病患者心肌细胞线粒体结构与功能方面呈现的如此广泛与明显的异常,可将克山病称为“心肌线粒体病(Mitochondrial Cardiomyopathy)”。     

长链非编码RNA对骨肉瘤的调控作用北大核心CSCD

骨肉瘤是一类主要发生于长管状骨的原发性恶性骨肿瘤,其主要特征是由肿瘤细胞直接形成不成熟的骨或骨组织。患者具有严重的疼痛症状和软组织肿胀,严重的可导致病理性骨折。由于骨肉瘤侵袭性较高和转移较快,其临床治疗效果较差,且患者具有较高的癌症致死率。尽管目前在骨肉瘤发生、发展的机制研究上取得了较大进展,但关于骨肉瘤的生理、病理机制尚未完全清楚。长链非编码RNA作为非编码RNA的一种,在各类肿瘤的发生和发展中发挥关键性作用;其对骨肉瘤细胞的生长、增殖、迁移、侵袭以及骨肉瘤的发生、发展、耐药性和预后也具有重要的调控作用。因此,明确长链非编码RNA在骨肉瘤中的作用,为进一步探究骨肉瘤的发病机制和临床治疗提供潜在的生物标志物。     

不同内固定方法对肱骨近端骨折的预后影响

目的:探讨不同内固定方法对肱骨近端骨折的预后影响。方法:选取90例因肱骨骨折入院治疗的患者的临床资料进行回顾性分析,按照内固定方法的不同将所有患者分为A组和B组。其中A组为44例,均采用锁定加压钢板治疗;B组为46例,均采用解剖型钢板治疗。比较两组患者术后并发症的发生情况,并且采用Neer评分系统评定肱骨近端骨折治疗后的肩关节功能等级。结果:获得有效随访资料共79份,占87.8%。其中锁定加压钢板组获得有效随访的数量为39,占43.3%;解剖型钢板组获得有效随访的数量为40,占44.4%。根据Neer评定标准,A组患者的肩关节功能Neer评定优良率为92%,显著高于B组87.5%,两组之间差异无统计学意义(x~2=0.131,P0.05)。结论:锁定加压钢板内固定法对肱骨近端骨折预后明显优于解剖型钢板,更有利于患者早期功能锻炼的进行和肩关节功能恢复。