哺乳动物性别分化的调控

哺乳动物性别分化调控的分子机制的研究特别是性别分化的层次调控、剂量补偿和性染色体进化这三个领域,已取得快速进展。已经发现Ｙ染色体性别决定区基因（ＳＲＹ）、Ｘ染色体ＤＳＳ－ＡＨＣ决定区基因１（ＤＡＸ－１）、甾类生成因子１基因（ＳＦ１）和Ｗｉｌｍｓ瘤抑制基因（ＷＴ－１）等与哺乳动物性别决定有关。ＳＲＹ启动睾丸分化,但胚胎发育成雄性的其余步骤由睾丸分泌的激素控制。ＤＡＸ－１编码一种女性特异功能的蛋白质,     

X染色体失活——一种特殊方式的基因调控

剂量补偿是使Ｘ连锁基因的表达水平在两性间达到平衡的过程。生物界实现剂量补偿的策略有很多种,真兽亚纲哺乳动物是随机失活雌性的一条Ｘ染色体。Ｘ失活开始于ＸＩＣ,然后传播到整条染色体。ＸＩＳＴ基因定位于ＸＩＣ中,参与Ｘ失活的启动,可能是Ｘ失活决定基因。最近在人和小鼠中发现了逃避Ｘ失活的基因。探讨这些基因逃避Ｘ失活的机制有助于理解Ｘ染色体失活是如何对基因表达进行调控的。人和小鼠中有一些基因的Ｘ失活状态不同,提示了性染色体的持续不断的进化改变 。     

可随HeLa细胞传代而传递的反义RNA真核表达系统

为研究反义ＲＮＡ表达载体在细胞内的稳定性,构建了一个特异性针对β地中海贫血基因ＩＶＳ－２－６５４Ｃ→Ｔ（β６５４）突变ｍＲＮＡ前体异常剪接位点的反义ＲＮＡ表达载体ｐＣＭＶＡ．ｐＣＭＶＡ转染β６５４ＨｅＬａ细胞后,通过ＲＮＡ定量检测反义片段对β６５４ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用;再从转染后传代５次并冰冻保存１年的ＨｅＬａ细胞中回收反义表达载体,转染另外的β６５４ＨｅＬａ细胞,同样检测它对β６５４ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用．结果显示该载体在细胞传代前后均能阻断β６５４异常剪接,部分恢复其正常剪接途径：用回收的ｐＣＭＶＡ转染β６５４ＨｅＬａ细胞后,正常剪接的βｍＲＮＡ水平［β／（β＋β＊）］由０．０５上升到处理后１５ｄ的０．４８,而２种对照质粒处理后对这一比值影响不大．表明ｐＣＭＶＡ可在ＨｅＬａ细胞中随着细胞传代而传递下去,并保持结构与功能完整     

46,XY女性性反转患者SRY基因启动子区一个新的点突变及其功能分析

通过ＤＮＡ序列测定在一名４６,ＸＹ女性性反转患者ＳＲＹ基因启动子区发现了一个新的突变：ｎｔ．－８１Ｇ→Ａ．该突变不见于正常男性,因此不是ＤＮＡ多态性．为了检测这一点突变对ＳＲＹ基因表达功能的影响,构建了分别由正常或突变的人ＳＲＹ基因启动子区片段调控氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）报告基因表达的两个质粒,寡核苷酸探针杂交证实该启动子片段正常或携带有Ｇ→Ａ突变．这两个质粒分别与ｐＳＶ－β－半乳糖苷酶内对照质粒共转染ＨｅＬａ细胞后,瞬间表达分析显示这一突变对ＣＡＴ酶活性水平无显著影响（０．５０＞Ｐ＞０．２０）．上述正常和突变的ＳＲＹ基因启动子片段与Ｋ５６２细胞核抽提物的凝胶阻滞实验也表明,突变对Ｋ５６２细胞核蛋白与ＳＲＹ基因启动子区的结合影响不大．研究ＳＲＹ基因的表达调控对阐明人的性别决定机制及性反转的病理机制具有重要意义     

反义基因治疗

除了反义核酸和核酶外,最近又发展了一种新型的反义药物———反义肽核酸(PNA)。反义治疗的经典策略是阻断异常基因的表达;随着研究的深入,又发现了以反义药物调整基因表达比例(即调控基因治疗)的反义治疗途径。本文对反义基因治疗的策略、反义药物的设计及稳定性等方面的新思路和该领域的发展与应用前景作了概括介绍。     

哺乳动物性别分化的调控

哺乳动物性别分化调控的分子机制的研究特别是性别分化的层次调控、剂量补偿和性染色体进化这三个领域,已取得快速进展。已经发现Ｙ染色体性别决定区基因（ＳＲＹ）、Ｘ染色体ＤＳＳ－ＡＨＣ决定区基因１（ＤＡＸ－１）、甾类生成因子１基因（ＳＦ１）和Ｗｉｌｍｓ瘤抑制基因（ＷＴ－１）等与哺乳动物性别决定有关。ＳＲＹ启动睾丸分化,但胚胎发育成雄性的其余步骤由事丸分泌的激素控制。ＤＡＸ－１且编码一种女性特异功能的蛋白质,它在男性中被ＳＲＹ所抑制。ＳＦ－１和ＷＴ－１在ＳＲＹ开启之前作用于性腺和肾上腺发育的启动。哺乳动物通过随机失活雌性两条Ｘ染色体中的一条来使Ｘ连锁的基因在两性间的表达水平达到平衡（剂量补偿）。Ｘ染色体失活由Ｘ染色体失活中心（ＸＩＣ）控制。失活的Ｘ染色体专一转录基因（ＸＩＳＴ）是ＸＩＣ的强烈候选者,它可能参与Ｘ失活的启动。对有袋目和单孔目动物性染色体的研究为我们提供了其进化的信息。有证据支持性染色体起源于一对同源常染色体,而ＳＲＹ的祖先基因可能是ＳＯＸ－３。     

46,XY女性性反转患者SRY基因启动子区一个新的点突变及其功能分析

通过ＤＮＡ序列测定在一名４６,ＸＹ女性反转患ＳＲＹ基因启动子区发现了一个新的突变：ｎｔ－８１Ｇ－Ａ。该突变不见于正常男性,因此不是ＤＮＡ多态性。为了检测这一点突变对ＳＲＹ基因表达功能的影响,构建了分别由正常或突变的人ＳＲＹ基因启动子区片段调控氯霉素乙酰转移酶报告基因表达的两个质粒,寡核苷酸探针杂交证实该启动子片段正常或携带有Ｇ－Ａ突变。     

反义基因治疗

除了反义核酸和核酶外,最近又发展了一种新型的反义药物－反义肽核酸（ＲＮＡ）。反义治疗的经验策略是阻断异常基因的表达;随着研究的深入,又发现了以反义药物调整基因表达比例（即调控基因治疗）的反义治疗途径。本文对反义基因治疗的策略,反义药物的设计及稳定性等方面的新思路和该领域的发展与应用前景作了概括介绍。     

FⅧ基因倒位与血友病甲

最近发现ＦⅧ基因的内含子２２倒位是约半数重型血友病甲患的共同分子缺陷。由ＦⅧ基因内含子２２内的ＦⅧＡ的基因拷贝和上游约５００ｋｂ处的两个ＦⅧＡ的基因拷贝这一发生同源重组在Ｘｑ２８所引入的大片段。