基因重组去整合素rAdinbitor对C6神经胶质瘤细胞FAK-Ras/MAPK通路的影响

rAdinbitor为大连医科大学生物化学与分子生物学教研室从旅顺产白眉蝮蛇毒腺中采用克隆技术得到的去整合素．之前研究已证明rAdinbitor具有抑制C6神经胶质瘤细胞增殖、促进C6神经胶质瘤细胞凋亡的作用．rAdinbitor对C6细胞作用的分子机制需要进一步研究．在此研究中,用E. coli BL21/pET23b-adinbitor表达rAdinbitor,通过Ni Sepharose 6 Fast Flow亲和层析柱对rAdinbitor进行纯化,纯化蛋白经Western blotting鉴定．用纤连蛋白(fibronectin,FN)诱导C6细胞．通过免疫沉淀和免疫印迹检测不同浓度的rAdinbitor对FN诱导的C6细胞中黏着斑激酶(FAK)、MEK1/2、Caspase-3的表达以及对FAK、ERK1/2活性的影响．研究表明：各实验组不同浓度的rAdinbitor均能明显降低FAK、MEK1/2的表达,对Caspase-3的表达起促进作用,并对ERK1/2的磷酸化有明显的抑制作用;除10 mg/L rAdinbitor对FAK磷酸化无明显抑制作用外,其余浓度的rAdinbitor对FAK的磷酸化起了明显抑制作用．这说明rAdinbitor对FAK及其下游Ras-MAPK传导通路的抑制在其抑制C6增殖过程中起了重要作用,Caspase-3表达升高提示,rAdinbitor可能通过抑制ILK及其下游的PI-3K/Akt途径起到了促进细胞凋亡的作用.     

白眉蝮蛇去整合素Adinbitor对Akt信号转导通路及对SSMC7721细胞增殖、迁移和凋亡的影响

研究白眉蝮蛇去整合素adinbitor对蛋白激酶B(Akt)通路信号分子的影响及对SSMC7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响.采用MTT法检测adinbitor对SSMC7721细胞增殖的作用;Hoechst33258试剂盒检测adinbitor对SSMC7721凋亡的影响; Transwell 检测adinbitor对SSMC7721细胞迁移的作用;Western印迹检测adinbitor对信号分子Akt及磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、核因子κB（NF-κB）的抑制蛋白IκB-α及NF-κBp65的影响;分光光度法检测其对半胱天冬蛋白酶-3 （caspase -3）活性的影响.结果显示,adinbitor可显著抑制SSMC7721细胞的迁移和增殖(与对照组比较,P＜005),促进凋亡. 在浓度梯度adinbitor作用下,Akt 表达量基本不变,但其磷酸化受到抑制.细胞浆内IκB α表达增加,细胞核内NF-κBp65表达减少,caspase-3活化倍数平均在2.24～3.85之间,以上作用均呈现剂量依赖性.结果说明,adinbitor可通过抑制Akt相关信号转导分子的作用而抑制SSMC7721细胞增殖和迁移,并促进其凋亡.