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目的:针对人源HDAC2外显子拼接功能区(CDS)基因,运用双管法突变体构建技术,构建HDAC2去乙酰化酶功能失活的片段缺失与关键位点突变体,检测突变体的SUMO化修饰E3连接酶功能活性,探究此HDAC2新功能是否受到其固有的去乙酰化酶功能的影响.方法:设计HDAC2 100-322位氨基酸密码子缺失的片段突变体引物与142位H→A点突变体引物,利用HDAC2的pcDNA3.1真核表达质粒为模板,通过耐热Fusion酶PCR反应双管扩增相应的单链DNA,并经退火、模板酶切、乙醇纯化、感受态转化、抗性平板筛选、测序鉴定获得两种HDAC2去乙酰化酶功能失活的pcDNA3.1真核表达质粒.免疫印迹检测突变体质粒在细胞中的表达,荧光素酶(LUC)报告基因实验检测其SUMO化修饰E3连接酶功能活性.结果:成功构建HDAC2去乙酰化功能失活的片段缺失突变体pcDNA3.1/HDAC2 (DEL 100-322AA)与关键位点突变体pcDNA3.1/HDAC2(142 H→A).C-myc标签的免疫印迹检测显示两种突变体在细胞中可稳定表达.将突变体转染进入三种细胞,LUC报告基因分析结果显示突变体仍具有E3连接酶功能活性.结论:HDAC2的E3连接酶功能不依赖于其去乙酰化酶活性,并且E3连接酶功能结构域位于其序列C端. 相似文献
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Cu~(2+)胁迫条件对涡虫体内过氧化氢酶活性的影响 总被引：6，自引：0，他引：6
实验以0 .2 5、0 .5、1.0、2 .0mg·kg- 1 4种质量浓度的CuSO4 溶液培养东亚三角头涡虫(Dugesiajaponia) 4 8h后,提取其体内蛋白质并测定其过氧化氢酶(CAT)的活性。测定结果:涡虫体内蛋白的CAT酶活性依次为12 .5 9、2 3.74、18.37、18.72ū·mg- 1 。以自来水(实验室常规培养方法)为对照,其相应的酶活性为18.78ū·ｍｇ- 1 。实验结果表明:低浓度下Cu2 + 刺激CAT酶活性增加,而在高浓度下,由于涡虫耐受力的存在而使涡虫的CAT酶活性维持在正常水平(与对照组差异不大)。当Cu2 + 浓度达到4mg·kg- 1 时所培养的涡虫不到2 4h全部死亡。 相似文献
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