睾丸支持细胞紧密连接的动力学调控

在睾丸精子发生的过程中,处于细线期和细线前期的精母细胞必须从生精上皮的基底室进入近腔室,这样形态上发育完全的精子才能在精子释放时进入到生精小管的内腔。显然,构成血-睾屏障的支持细胞间紧密连接的开放和关闭受到一系列信号分子的调节。已经发现的对该过程起调控作用的信号分子包括：转化生长因子β3(TGFβ3)、闭锁蛋白、PKA、PKC等。现就该领域研究的新进展以及可用于研究紧密连接动力学的一些模型进行综述。     

大鼠睾丸前促甲状腺激素释放激素原及其受体的表达与发育变化

为研究促甲状腺激素释放激素（thyrotrophin-releasing hormone,TRH)及其受体（TRH receptor,TRHR)在大鼠睾丸组织中的表达规律和在生殖发育调节中的作用,依据大鼠下丘脑中的前TRH原（PreproTRH,ppTRH)和垂体中的TRH－R cDNA设计引物,采用RT－PCR法从大鼠睾丸组织中获得了ppTRH和TRH－R的cDNA克隆,测序后构建表达载体,在大肠杆菌中表达了可溶性的pTRH t TRH-R融合蛋白,利用实时动态定量RT－PCR（real time quantitative RT-PCR)法观察了ppTRH和TRH－R在不同发育阶段大鼠睾丸中的表达变化,发现在睾丸间质细胞发育的初期阶段（第8天）,没有ppTRH和TRH－R的表达,但从第15天起能观察到pp-TRH和TRH－R的表达,并且表达量在20天,35天,60天和90天逐渐增加,这些结果表明：大鼠睾丸组织能特异性表达ppTRH和TRH－R,并且表达量与发育过程相关,ppTRH和TRH－R体外表达产物的获得为后续研究其功能奠定了基础。     

葡萄糖氧化酶—二氨基联苯胺—硫酸镍铵法在免疫酶双重染色技术中应用

作者在豚鼠胰腺组织石蜡切片的PAP免疫酶双重标记染色中,分别使用葡萄糖氧化酶-二氨基联苯胺-硫酸镍铵(Glucose oxidase-DAB-Nickel,GDN)和单纯DAB显示生长抑素(Somatostatin,SOM)及5-羟色胺(5-hpdroxytryptamin,5-HT)免疫反应细胞,获得良好的染色结果。该方法步骤简单,结果明确,背景清楚,是取得理想的免疫酶双重染色结果的新途径。     

地高辛标记寡核苷酸探针检测大鼠胰岛素mRNA

本实验采用地高辛标记前胰岛素寡核苷酸探针原位杂交组织化学技术,研究了Ｗｉｓｔａｒ大鼠胰腺组织胰岛素基因的表达。实验用Ｗｉｓｔａｒ大鼠５只,胰腺经４％多聚甲醛灌注固定,并在同一固定液中后固定２４ｈ,常规石蜡包埋切片。结果表明,经前胰岛素寡核苷酸探针杂交的胰腺切片中,胰岛Ｂ细胞呈蓝色。杂交反应物位于Ｂ细胞的细胞质和部分核仁中,胞核无色。胰岛其它细胞及胰腺外分泌部腺泡细胞无杂交反应物。对照切片中均无阳性信号出现。结果表明地高辛标记寡核苷酸探针不仅具备非同位素标记探针的优点而且能精确检测特异性ｍＲＮＡ的表达。本研究方法操作便利,可靠精确,重复性好。     

豚鼠胸腺含P物质、降钙素基因相关肽和神经肽Y神经的定位研究

为研究神经肽调节胸腺生理功能的作用途径,作者采用免疫组织化学ＡＢＣ法结合ＧＤＮ增强技术,以３０μｍ厚恒冷箱切片光镜下观察了豚鼠胸腺内含ＳＰ、ＣＧＲＰ和ＮＰＹ神经纤维的定位与分布。结果发现,ＳＰ和ＣＧＲＰ免疫反应神经纤维在胸腺内分布广泛,呈线状或串珠状,可见于血管周围,小叶间结缔组织和胸腺实质。实质中以皮髓质交界区和髓质区纤维分布较密集,而走行于皮质淋巴组织的神经纤维相对稀疏,胸腺小体附近亦可见含ＣＧＲＰ神经分布。含ＮＰＹ神经纤维主要分布于血管周围、小叶间隔和皮髓质交界区,仅少数分支穿行于皮质胸腺细胞之间。胸腺被膜中有上述３种肽能神经纤维分布。本研究结果表明,胸腺内有丰富的肽能神经分布,这可能是神经肽调节胸腺生理功能的重要方式之一。     

大鼠胰腺γ-氨基丁酸免疫组织化学定位

本文用ABC—GDN免疫组织化学方法,研究了γ-氨基丁酸(Gamma—Aminobutyric Acid,GABA)在大鼠胰腺的定位和分布,并用相邻切片法,观察它与胰岛素的共存关系。结果发现GABA免疫反应阳性细胞主要分布于胰腺内分泌部(胰岛)。在外分泌部亦有少许分布。大部分胰岛细胞呈GABA免疫反应阳性,集中位于胰岛的中央部。相邻连续切片免疫染色证实GABA与胰岛素共存于胰岛B细胞中。外分泌部胰腺GABA免疫反应阳性细胞,呈零散分布于腺泡和导管上皮间。本文为进一步探讨GABA在胰腺的生理作用提供了形态学依据。     

Ghrelin在正常及X线辐射损伤小鼠睾丸中的表达

目的探讨ghrelin在正常及X射线辐射损伤后小鼠睾丸中的表达变化及其意义。方法采用辐射剂量1·0GyX线对成年小鼠进行全身照射,于照射后16h取睾丸组织制备标本,免疫组织化学ABC法检测ghrelin在辐射损伤小鼠及正常对照组小鼠睾丸中的表达,探讨ghrelin表达的变化及意义。结果正常小鼠睾丸ghrelin主要表达在间质细胞的胞浆中,呈强阳性。X线照射后16h,ghrelin的表达主要集中于生精小管内各级生殖细胞中,特别是在精原细胞和初级精母细胞中有强阳性反应,且其表达具有生精周期特异性,而间质细胞中呈阴性。结论Ghrelin在小鼠正常及辐射损伤睾丸中的特异性表达和变化,提示其可能与睾丸精子发生、精子形成及辐射损伤修复有关,具有重要的睾丸生物学调节功能。     

p38 MAPK在小鼠睾丸不同发育阶段的表达和定位

为探讨丝裂原活化蛋白激酶p38 MAPK在小鼠睾丸不同发育阶段的表达，应用蛋白质免疫印迹杂交技术和免疫组织化学SABC法检测1至7周龄小鼠睾丸p38 MAPK的表达、定位及发育变化，并通过图像分析技术对免疫组织化学结果进行统计学分析。免疫印迹杂交发现，p38 MAPK在2～7周龄小鼠睾丸中均有表达。免疫组织化学结果显示，在2周龄小鼠睾丸曲细精管上皮中即可观察到p38 MAPK免疫阳性反应，免疫反应阳性细胞为精原细胞；3、4、5周龄小鼠睾丸仅有个别曲细精管上皮可见p38 MAPK免疫阳性反应；6、7周龄小鼠睾丸中p38 MAPK表达较丰富，免疫反应阳性细胞为精原细胞和初级精母细胞，免疫阳性反应物均主要位于细胞核内。在7周龄小鼠睾丸中还可见到部分间质细胞的细胞质亦呈p38 MAPK阳性。这些结果提示，p38 MAPK可能对生精细胞的增殖分化具有调控作用。     

人胰腺内分泌细胞中CD 57免疫反应性的表达

CD57是一种分子量为110 KD的糖蛋白,它是人类自然杀伤细胞(NK)和杀伤细胞(K)的特异性表面抗原。用它免疫小鼠产生的抗CD57单克隆抗体可特异性识别人的NK 和K 细胞表面抗原。本文应用ABC 免疫组织化学染色结合葡萄糖氧化酶DAB-硫酸镍铵显色技术研究了CD 57在人胰腺的表达和分布。结果发现,CD 57免疫反应(CD 57一IR)细胞主要分布在胰腺的内分泌部(胰岛),偶见于胰腺外分泌部的腺泡和导管上皮中。多数CD 57-IR 细胞呈典型内分泌细胞的形态特征。相邻切片法证明大多数Glu,SS,HPP 和PS 免疫反应细胞呈CD 57阳性。胰腺内神经纤维亦呈CD 57阳性。少数呈CD 57阳性的NK 和K 细胞散布在胰腺结缔组织中。本文对CD 57免疫反应性在人胰腺内分泌细胞中表达的意义进行了讨论。