槲皮素对黄粉虫血淋巴酚氧化酶的生理效应

用酶标仪法测定了槲皮素对黄粉虫Tenebrio molitor酚氧化酶（phenoloxidase, PO）的生物活性。结果表明：在离体条件下,对黄粉虫血淋巴PO的IC₅₀为0.625 mmol/L。在活体情况下,当槲皮素-DMSO溶液或槲皮素水悬浮液（5 μL）注入虫体后,在浓度低于1.0 mmol/L时对黄粉虫血淋巴PO具有激活作用,当浓度高于2.0 mmol/L时则对PO具有明显的抑制作用;单独注射5 μL DMSO溶液对PO活性亦有一定的激活作用。试虫被注射槲皮素后,PO活性在2～4 h内迅速下降,然后缓慢上升,处理8 h左右达到最高点,其后低浓度处理PO活性保持不变,而高浓度处理则逐渐下降,提示低浓度槲皮素可以引起试虫的免疫反应。在PO测活体系中加入0.5％的BSA后对PO活性无影响,并能使槲皮素在测活体系中保持稳定。     

外源茉莉酸甲酯诱导的棉花防御对棉蚜及斜纹夜蛾发育的影响

【目的】明确外源茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,Me JA)诱导的棉花防御对棉蚜Aphis gossypii及斜纹夜蛾Spodoptera litura发育的影响。【方法】采用4种浓度(0.5、1.0、2.0、4.0 mmol·L~(-1))的Me JA处理4片真叶期的棉苗,在处理后的1、3、5、7、15 d测定棉叶中过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)的活性及总酚含量;选择2种浓度(1.0 mmol·L~(-1)、2.0 mmol·L~(-1))的Me JA处理棉苗,在处理后的棉苗叶片上接入棉蚜或斜纹夜蛾幼虫,记录并统计棉蚜若蚜的发育历期及单雌产蚜量、斜纹夜蛾幼虫的发育历期及幼虫重量的变化。【结果】不同浓度的Me JA处理后,棉苗POD、PPO活性及总酚含量均显著提高。0.5、1.0、2.0 mmol·L~(-1) Me JA处理棉苗5 d后,棉苗POD活性达到最高水平,分别为对照的4.11倍、5.71倍、4.74倍。4种不同浓度Me JA处理棉苗15 d后,棉苗POD活性均显著高于对照(P0.05);4种不同浓度Me JA处理棉苗3 d后,棉苗PPO活性达到最高水平,分别为对照的1.7倍、2.1倍、2.16倍、2.71倍。2.0、4.0 mmol·L~(-1) Me JA处理棉苗15 d后,棉苗PPO活性均显著高于对照(P0.05);0.5、1.0 mmol·L~(-1) Me JA处理棉花15 d后,棉苗总酚含量达到最高水平,分别为对照的1.73倍、1.58倍。2.0、4.0 mmol·L~(-1) Me JA处理棉苗7 d后,棉苗总酚含量达到最高水平,分别为对照的1.6倍、1.7倍;1.0、2.0 mmol·L~(-1) Me JA处理棉苗后,棉蚜若蚜的发育历期均为对照的1.07倍;棉蚜单雌产蚜量比对照减少20%、39.4%。斜纹夜蛾幼虫的重量比对照减少12.7%、34.2%;幼虫的发育历期为对照的1.22倍、1.25倍。【结论】4种浓度的外源Me JA处理均可显著提高棉花主要防御酶的活性及总酚含量,外源Me JA诱导的棉花防御对棉蚜、斜纹夜蛾的发育具有显著的抑制作用。     

刚竹叶提取物对斜纹夜蛾酚氧化酶抑制作用研究

采用酶标仪法测定了刚竹叶提取物对斜纹夜蛾酚氧化酶(PO)活性的影响。结果表明:6种不同溶剂(极性大小:去离子水乙醇丙酮乙酸乙酯氯仿石油醚)获得的竹叶提取物均对PO表现为抑制作用(三氯甲烷提取物在0-300 mg/L范围内,对PO表现为激活作用),且随提取物浓度的升高,抑制作用有逐渐增强的趋势。丙酮提取物对PO的抑制效果最显著(IC50为550 mg/L),其次为乙酸乙酯提取物和乙醇提取物(IC50分别为575 mg/L和700 mg/L);丙酮提取物对斜纹夜蛾酚氧化酶的抑制效果属于可逆过程,抑制类型为非竞争性抑制,抑制常数Ki为158.2 mg/L。     

莱氏绿僵菌对斜纹夜蛾的致病力及生理效应

【目的】测定莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi Nr5772菌株对斜纹夜蛾Spodoptera litura幼虫及蛹的致病能力,研究莱氏绿僵菌侵染后在寄主体内的发育及对寄主的生理效应,探讨莱氏绿僵菌的致病机制。【方法】采用浸渍法测定莱氏绿僵菌孢子对斜纹夜蛾3-6龄幼虫及蛹的致死中浓度(LC_(50))和致死中时(LT_(50))。采用微量注射法接种莱氏绿僵菌虫菌体,在不同时间后采集斜纹夜蛾幼虫血淋巴,在显微镜下检查虫菌体的数量、形态及寄主血细胞数量,并用酶标仪测定寄主血淋巴酚氧化酶(Phenoloxidase,PO)的活性。【结果】M.rileyi孢子对3龄斜纹夜蛾幼虫毒力最强,10 d后LC_(50)=3.12×10~6个孢子/mL,龄期越大,致病力越低;孢子浓度为5×10~9个/mL时,对3龄幼虫的致死速度最快,LT_(50)=4.55 d,致死速度随龄期的增大和浓度的降低逐渐减缓;M.rileyi孢子对蛹的致病力远低于对幼虫的致病力。注射接种虫菌体后,64 h内,虫菌体数量在寄主血腔中以幂函数的形式增长,寄主的血细胞数量没有明显的变化;在侵染初期(接种后44 h内),血淋巴PO活性正常;在侵染后期,虫菌体数量不再增加(55-64 h后),逐渐转化为菌丝体,并快速杀死寄主,PO活性受到抑制。【结论】莱氏绿僵菌Nr5772菌株对斜纹夜蛾幼虫有较强的致病力,应在害虫低龄期应用;莱氏绿僵菌在侵染初期对寄主血细胞和血淋巴PO无影响,后期则完全抑制PO活性。     

黄粉虫幼虫体壁硬化过程中酚氧化酶活性的变化

为研究酚氧化酶(PO)在昆虫蜕皮过程中的功能和作用, 采用微量测定法研究了黄粉虫Tenebrio molitor体壁硬化过程中血淋巴和表皮中的PO活性变化。结果表明：初蜕皮幼虫血淋巴中PO活性较高, 但随着体壁的不断黑化与硬化, 其活性呈现下降趋势, 在3～4 h内达到最低点, 而后PO活性逐渐上升, 7 h左右活性上升至最高, 并接近于正常幼虫的水平;在刚蜕完皮后的1 h内, 体壁中 PO活性基本无变化, 但随后即开始下降, 3 h左右降到最低点, 然后开始回升, 6~7 h左右恢复到正常水平, 并趋于稳定;以L-DOPA为底物, 通过双倒数曲线作图法求得黄粉虫血淋巴PO的Km＝1.176 mmol/L, 体壁PO的Km＝0.881 mmol/L, 表明体壁PO与底物L-DOPA的亲和力要高于血淋巴PO。研究表明两种来源的酚氧化酶均参与了黄粉虫幼虫的体壁硬化过程, 但在作用方式及与底物的亲和力方面存在差异。     

中国钩瓣叶蜂属一新种及一新记录种(膜翅目:叶蜂科)

记述采自山东的中国钩瓣叶蜂属Macrophya Dahlbom 1新种：斑咐钩瓣叶蜂Macrophya maculotarsalina Wei et Liu.sp.nov.与Macrophya vacillans近似,但小盾片附片黑色,后足跗节大部白色,后足胫节具红斑,腹部第2背板两侧具侧白斑,第3、4背板无白斑,背地里单眼后区宽长比大于2,侧沟明显,锯腹片的锯刃强烈突出等,易与后者鉴别,斑股钩瓣叶蜂Macrophya femorata Marlatt,1898是中国新记录种,该种原记载分布于日本,新种的模式标本保存于中南林学院昆虫模式标本室。     

紫外分光光度计法与酶标仪微量法测定酚氧化酶蛋白含量及活力的比较

分别采用紫外分光光度计比色法与酶标仪微量法测定菜青虫Pieris rapae(L.)体内酚氧化酶蛋白含量和活力,以水杨醛缩对硝基苯胺为抑制剂,对2种方法的结果进行比较。结果表明,微量法和比色法在检测酚氧化酶(PO)蛋白含量、酶活力和抑制剂对PO抑制作用时结果无显著性差异。因此,微量法可以替代比色法,使用试剂量大大降低,重复性好,操作简单、快捷。     

昆虫几丁质合成酶及其抑制剂

几丁质合成酶(CS)是几丁质合成的关键酶,它具有3个结构域:结构域A、结构域B和结构域C,其中结构域B是催化域。根据氨基酸序列的差异,几丁质合成酶分为两类:CS-A及CS-B,分别在表皮及围食膜基质中催化合成几丁质。关于几丁质合成有2种假想模型。有多种抑制剂可以抑制几丁质的合成,其中核苷肽抗生素类及核苷磷酸类作用于CS的催化部位,是竞争性抑制剂,其它抑制剂的作用机理仍不明确。