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国内外曾有文献报道采用支持物法或微管法作为一种液体闪烁测量的方法,但这些方法是在被测样品量甚微下进行的。“Counting Exchange”报道的被测样品量的范围在100—300微升之间,而目前国内外开展的生殖甾体激素放射免疫测定的被测样品量均在1毫升左右,用以上方法有一定的困难。故我们设计了 相似文献
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莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因的克隆与表达分析 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】为揭示昆虫病原真菌分泌的几丁质酶对宿主感染致病时的作用,对莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因进行了克隆与表达,并检测了表达产物的活性。【方法】采用CTAB法提取菌体DNA,设计特异性引物,多次PCR扩增克隆莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因全序列,并克隆基因的ORF片段chit1,与载体pPIC9K相连接,构建表达载体pPIC9K-Chit1,转入毕赤酵母感受态细胞中,然后通过1.5mg/L浓度的G418筛选及PCR验证,将阳性转化子进行诱导培养,对发酵液分别进行酶活性测定试验、几丁质酶透明圈验证试验和SDS-PAGE电泳检测。【结果】莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因全长序列为2756bp(NCBI登录号:EU795711),PCR扩增得到开放阅读框ORF片段chit1为1827bp,其中包含3个内含子,5′端非编码区长76bp,3′端非编码区240bp,编码424个氨基酸的几丁质酶前体,理论信号肽剪切位点在Gly(20)与Leu(21)之间;毕赤酵母重组细胞发酵液中几丁质酶活性随着发酵时间的延长而增加,72h达到最大值482.5U/100μL,透明圈活性验证试验显示,在含1%的几丁质平板上可出现明显的透明圈,表达产物SDS-PAGE电泳检测其分子量为41.0kDa。【结论】本研究克隆到莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因,其ORF成功重组到毕赤酵母中并表达出有活性的几丁质酶。基因表达产物的利用对进一步研究病原真菌染病昆虫的机制等具有重要意义。 相似文献
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用放射免疫方法(RIA)测定血清或血浆中LH、FSH和睾酮的含量已经成为观察男性垂体—睾丸功能变化的一个重要手段。但血样采集有损人体而不易被人接受;特别是需要连续采样时倍感困难。此外,由于这些生殖激素本身的生理波动,仅仅测定一次血样并不能完全反映其变化的真实状况。因此,寻找一种简单且能替代血清测定的方法对临床诊断和治疗将会大有帮助。尿液易采集,而且测定尿液中LH、FSH和睾酮的变化有可能得到与测定血清相近的资料。Baghdassarian等人就曾发现24小时尿中 相似文献
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