GST pull-down验证流感病毒PB1-F2蛋白与热休克蛋白40的相互作用

为体外验证流感病毒PB1-F2与热休克蛋白Hsp40相互作用,通过两个方向的GST pull-down试验验证PB1-F2与Hsp40的相互作用。构建GST-多肽融合蛋白原核表达载体pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,并在大肠杆菌(E.co-li)BL21中诱导表达;构建真核表达载体pLEGFP-Hsp40及pCAGGS-PB1-F2,并分别转染293T细胞使其表达Hsp40及PB1-F2融合蛋白,然后进行GST pull-down试验验证二者的相互作用。成功地构建了两种蛋白的各种表达载体,经表达、纯化获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白,GST pull-down试验正反两方向都证实了PB1-F2与Hsp40的相互作用,初步证实了流感病毒PB1-F2在体外能与Hsp40发生相互作用。     

单纯疱疹病毒2型感染细胞多肽27真核表达质粒的构建及表达

为了构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞多肽27(ICP27)真核表达质粒,应用PCR技术从HSV-2 333株的基因组中扩增ICP27基因,并连接至真核表达载体pEGFPC2,对阳性克隆进行菌落PCR、酶切和测序鉴定后,成功构建了重组质粒pEGFPC2-ICP27。用X fect转染试剂盒将重组质粒pEGFPC2-ICP27转染至Vero细胞中,并用RT-PCR及W estern b lot-ting检测其表达情况。结果显示,ICP27基因在Vero细胞中得到正确表达。真核表达质粒pEGFPC2-ICP27的构建成功,为进一步研究ICP27对宿主细胞的影响奠定了基础。     

Twist及Akt2在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨Twist、Akt2在甲状腺乳头状癌中的表达和相互关系。方法应用免疫组化方法,对60例甲状腺乳头状癌、10例结节性甲状腺肿进行Twist、Akt2表达的研究。结果甲状腺乳头状癌Twist及Akt2阳性表达率分别为81.67%(49/60)及60.00%(36/60),结节性甲状腺肿Twist及Akt2阳性表达率分别为0.00%(0/10)及10.00%(1/10),前者与后者相比差异有统计学意义(P<0.05);Twist及Akt2在甲状腺乳头状癌中的表达水平与病人的年龄及原发肿瘤分期无关,但与有无淋巴结转移相关(P<0.05),且Akt2的表达在T3,4期肿瘤及T1,2期肿瘤相比也具有显著性(P<0.05);Twist及Akt2的表达呈正相关(r=0.492,P=0.000)。结论在大多数甲状腺乳头状癌的上皮细胞中都存在Twist及Akt2的过表达,其淋巴结转移的发生与Twist及Akt2过表达或功能的不正常可能有密切的关系;Twist与Akt2的表达呈正相关。     

荷包猪SLA -2原核表达系的建立及表达研究

目的:建立荷包猪SLA -2原核表达系并研究SLA -2在pET - 32中的表达.方法:设计SLA -2胞外区的表达引物,亚克隆荷包猪SLA -2的胞外区,并转化入原核表达系统pET - 32进行表达,SDS - PAGE分析其表达产物的特性.结果:PCR结果显示,SLA -2胞外区亚克隆大小为840bp,酶切鉴定证实成功插入pET - 32表达载体,构建重组质粒pET - 32a(+)/SLA -2.SDS - PAGE显示,SLA -2基因导入宿主菌后成功表达,蛋白大小为51.4ku,与预期结果相符,蛋白相对表达含量达到了45%.结论:结果表明荷包猪SLA -2在pET - 32系统中成功表达,蛋白表达量符合要求,可用于下一步的结构和功能检测.     

蛇床子素对L-和N-型钙通道的影响

目的：比较蛇床子素对不同钙通道亚型的作用差异。方法：首先在tsA201细胞上瞬时转染Cavl．2,Cav1.3,Cav2．2e[37a],和Cav2．2e[37b]通道,然后采用全细胞膜片钳技术,记录tsA201细胞上的钙电流,并观察蛇床子素对各种钙通道亚型的影响。结果：蛇床子素可以浓度依赖性抑制Cav1．2和Cav1.3电流,抑制的半有效浓度分别为162．1μmol·L-1和56．2μmol·L-1．此外,蛇床子素对Cav2．2通道也有一定的抑制作用,在300μmol·L-1。的浓度下,抑制38％的Cav2．2e[37a]电流和61％的Cav2．2e[37b]电流,蛇床子素对钙电流的抑制是快速可逆的。蛇床子素在各个测试电位水平均能抑制上述四种钙通道电流,但不改变电流的激活阂值和最大峰值电流的激活电压。结论：蛇床子素以浓度依赖的方式抑制多种钙通道亚型并表现出不同的亲和力。     

明日叶查尔酮对小鼠肝癌细胞PCNA和BCL-2蛋白表达影响

目的：研究明日叶（Angelica keiskei Koidz）查尔酮对小鼠肝癌细胞PCNA和BCL-2蛋白表达的影响。方法：将50只皮下接种肝癌H22细胞株的小鼠随机分为5组,每组10只。高、中、低剂量组分别每日经口灌胃给予40、20、5mg/kg的查尔酮,肿瘤对照组给予等量生理盐水,连续10d,环磷酰胺组隔天腹腔注射环磷酰胺20mg/kg。取肝癌组织用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法测各组小鼠肝癌细胞增殖活性,免疫组化法检测各组肝癌细胞增殖细胞核抗原（PCNA）和凋亡相关蛋白BCL-2表达水平。结果：高剂量查尔酮组和肿瘤对照组的肝癌细胞增殖活性分别为（0.716±0.018）和（1.135±0.032）,差别有显著性（P〈0.05）。高剂量组PCNA和BCL-2蛋白表达率分别为28.33%和16.77%,肿瘤对照组分别为72.77%和65.17%,差异均有显著性（P〈0.05）。结论：查尔酮可降低小鼠肝癌细胞PCNA和BCL-2表达水平,对肝癌细胞增殖有一定抑制作用。     

血钙对老年肺炎患者的严重程度及预后的影响

目的：研究血清钙离子浓度与老年肺炎患者的严重程度及预后的关系。方法：按照脓毒症的诊断标准将入住急诊ICU的老年肺炎患者206例,分为脓毒症组（155例）和非脓毒症组（51例）,脓毒症组又按照预后分为存活组（91例）和死亡组（64例）。分别测定血清钙离子浓度、血浆白蛋白、C-反应蛋白（CRP）、血白细胞计数等有关的实验室指标,比较2组指标的差别。结果：脓毒症组中血清钙离子浓度较非脓毒症组降低,CRP、血白细胞计数较非脓毒症组升高（P〈0．01）;亚组分析中,死亡组中血清钙离子浓度较存活组降低（P〈0．01）,CRP较存活组升高（P〈0．05）,血白细胞计数两组比较无明显差异（P〉0．05）;血清钙离子浓度与血浆白蛋白的浓度呈高度正相关。结论：血清钙离子浓度对判断老年肺炎患者的预后有一定的临床意义。     

HER2阳性乳腺癌中CD44v6的表达与曲妥珠单抗耐药的关系

目的：探讨曲妥珠单抗在治疗HER2阳性的转移性乳腺癌时,产生耐药性与CD44v6表达的相关性。方法：共66例HER2阳性转移性乳腺癌患者入组。接受曲妥珠单抗治疗的患者37例,其中18例获得了治疗前和治疗后转移性癌组织。采用免疫组化S-P法对治疗前、治疗后的不同乳腺组织进行CD44v6表达的研究。结果：CD44v6在经曲妥珠单抗治疗产生耐药的活检组织中阳性表达程度明显高于治疗前。结论：CD44v6的表达与曲妥珠单抗耐药相关。     

血清与血浆中HBsAg在全自动酶免分析检测结果比较

目的：探讨血浆取代血清检测乙肝标志物的检测结果以及临床意义。方法：选取我科检测乙肝标志物的血样30份,分别放在抗凝剂管和普通干燥试管,采用全自动酶免疫分析仪检测HBsAg,将检测结果进行OD及S/CO值统计处理,并进行比较分析。结果：血清与二种血浆检测结果相关系数均0.99,二种血浆与血清结果相关关系良好（P〉0.0 5）,无显著性差异。结论：血浆代替血清完全可以用于全自动酶标分析仪进行检测,既可以节省预处理时间,又可以减少标本在分离吸移血清过程中出现差错,值得临床推广和应用。     

甲基苯丙胺中毒大鼠纹状体COX-2、PGE2、EP2受体及小胶质细胞表达的研究

目的：通过研究COX-2、PGE2、EP2受体及小胶质细胞在甲基苯丙胺中毒大鼠纹状体内的表达变化探讨甲基苯丙胺中毒大鼠纹状体中COX-2／PGE2系统与小胶质细胞活化之间的关系。方法：将40只健康成年雄性SD大鼠,随机分成对照组10只和实验组30只（实验组分成三个亚组,分为末次给药后1天组、2天组和3天组,n=10）。实验组给予10mg／kg的MA腹腔注射,对照组给予同样剂量的生理盐水,每天注射两次,注射时间为8：00、20：00,连续注射4天。分别于末次给药后的第1天、第2天、第3天处杀。用免疫组化技术对中毒大鼠纹状体（CPU）中COX-2、EP2受体及Iba1（钙离子接头蛋白,小胶质细胞内一种特异性标记物）的表达进行检测,并进行图像分析。另外,取大鼠的纹状体运用酶联免疫法检测PGE2的含量。结果：COX-2、PGE2、EP2受体及小胶质细胞在各组均有表达。与对照组相比,实验组中：COX-2、PGE2、EP2受体的1天组表达均不同程度下降;2天组中COX-2表达水平大幅度上升,PGE2、EP2受体表达仍低于正常水平;3天组COX-2表达水平继续升高,而PGE2、EP2受体表达趋于正常组水平。而小胶质细胞表达水平则是三个实验组均高于正常组,且3天组高于2天组,2天组高于l天组。对照组与实验组有显著性差异（P〈0．05）。结论：COX-2／PGE2系统与甲基苯丙胺中毒大鼠纹状体内小胶质细胞活化无明显相关性;COX-2与甲基苯丙胺的神经毒性有关。