DNA池快速筛查牛STAM1基因SNPs及估算等位基因频率

目的:旨在对不同牛种STAM1基因进行SNPs筛查,为地方牛种选种选育提供一定理论依据.方法:选取生长发育性状明显差异的务川黑牛和贵州荷斯坦奶牛2个牛种构建DNA池,设计1对引物分别扩增2个牛种STAM1基因第14外显子序列总长898bp.切胶回收后对PCR产物进行双向测序.结果:在牛STAM1基因中快速筛查到5个SNPs:A33C、C66G、C356T、T523A、T652C,其中A33C(Tyr→Ser)、C66G(Pro→Arg)、C356T(Glu→Lys)为错义突变,T523A为同义突变,T652C位于内含子区.贵州荷斯坦奶牛在T523A和T652C两个位点基因频率为1.0000,而务川黑牛分别为0.6730和0.8106.生物信息学分析表明:突变前后STAM1的RNA二级结构和蛋白质二级、三级结构均有明显改变.结论:DNA池结合测序技术可快速筛选SNP位点,检测到STAM1基因第14外显子5个SNPs.     

富铜酵母对西门塔尔牛日粮养分消化率和血液指标的影响

选用16头平均体重420 kg,年龄2.5岁中国西门塔尔牛阉牛,采用随机区组设计,分为4组,以混合精料和风干玉米秸秆为基础日粮,在基础日粮中分别添加富铜酵母0 mg/kg、80 mg/kg、160 mg/kg和240 mg/kg研究富铜酵母对西门塔尔牛营养物质消化代谢和血液指标的影响.结果表明:样品干物质、有机物质、粗蛋白质、无氮浸出物、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维消化率以80 mg/kg和160 mg/kg组较高(P<0.05);粗脂肪消化率以80 mg/kg组较高(P<0.05);80 mg/kg和160 mg/kg组沉积氮和沉积氮/消化氮显著高于对照和240 mg/kg组(P<0.05);160 mg/kg组Ca、P、Fe、Mn、Cu、S、Zn和Mo的存留率显著提高(P<0.05);80 mg/kg和160 mg/kg组血清甘油三酯显著提高(P<0.05);血糖、总胆固醇、白蛋白和总蛋白含量增加(P<0.05);160 mg/kg和240mg/kg组尿素氮显著降低(P<0.05);血清谷草转氨酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和乳酸脱氢酶无显著差异(P>0.05).160 mg/kg组血浆铜蓝蛋白显著升高(P<0.05);超氧化物歧化酶显著升高(P<0.05);80 mg/kg和160 mg/kg组谷胱甘肽过氧化物酶显著提高;240 mg/kg组则显著降低(P<0.05);丙二醛呈明显下降趋势.血清Cu含量逐渐增加,160 mg/kg和240 mg/kg组显著高于对照和80 mg/kg组(P<0.05).根据试验结果,富铜酵母添加量以80 mg/kg～160 ms/kg干物质为宜.     

牛病毒性腹泻病毒Erns-E2融合蛋白在果蝇S2细胞中的表达与鉴定

目的:利用果蝇S2细胞表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Erns-E2融合蛋白,并对其抗体结合能力进行鉴定.方法:用RT-PCR方法扩增BVDV NADL株Erns和E2蛋白的编码基因,利用(G4-S)3柔性15肽基因将扩增的2个基因连接,再与昆虫表达载体pMT/BiP/V5-His连接构建重组表达载体pMT/BiP/V5-His-E(MS)-E2,将后者与筛选质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞后表达Erns-E2融合蛋白.并对表达产物进行鉴定.结果:SDS-PAGE结果表明,融合蛋白相对分子质量为76 800;Westem blotting检测表明,该融合蛋白具有与BVDV抗体良好的结合能力.结论:BVDV的Erns-E2融合蛋白能在果蝇S2细胞中进行表达;经鉴定,表达产物具有良好的抗体结合能力,可用于抗原检测.     

牛病毒性腹泻病毒E^rns-E2融合蛋白在果蝇S2细胞中的表达与鉴定

目的：利用果蝇S2细胞表达牛病毒性腹泻病毒（BVDV）Erns-E2融合蛋白,并对其抗体结合能力进行鉴定。方法：用RT-PCR方法扩增BVDV NADL株Erns和E2蛋白的编码基因,利用（G4-S）3柔性15肽基因将扩增的2个基因连接,再与昆虫表达载体pMT/BiP/V5-His连接构建重组表达载体pMT/BiP/V5-His-Erns-E2,将后者与筛选质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞后表达Erns-E2融合蛋白,并对表达产物进行鉴定。结果：SDS-PAGE结果表明,融合蛋白相对分子质量为76800;Western blotting检测表明,该融合蛋白具有与BVDV抗体良好的结合能力。结论：BVDV的Erns-E2融合蛋白能在果蝇S2细胞中进行表达;经鉴定,表达产物具有良好的抗体结合能力,可用于抗原检测。     

The analysis of genetic diversity and differentiation of six Chinese cattle populations using microsatellite markers

A total of 321 individuals from six cattle populations of four species in a bovine subfamily in China were studied using 12 pairs of microsatellite markers. The genetic diversities within and between populations were calculated. The phylogenetic trees were constructed by （δμ）^2 and DA distances, and the divergence times between populations were estimated by （δμ）^2. Altogether, 144 microsatellite alleles were detected including 24 private alleles and nine shared alleles. Chinese Holstein had the largest number of private alleles （10）, whereas Bohai black and Buffalo had the smallest number of private alleles （2）. Chinese Holstein showed the highest genetic variability. Its observed number of alleles （Na）, mean effective number of alleles （MNA）, and mean heterozygosity （He） were 7.7500, 4.9722, and 0.7719, respectively, whereas, the Buffalo and Yak showed low genetic variability. In the phylogenetic trees, Luxi and Holstein grouped first, followed by Bohai and Minnan. Yak branched next and buffalo emerged as the most divergent population from other cattle populations. Luxi and Bohai were estimated to have diverged 0.039-0.105 million years ago （MYA）, however, buffalo and Holstein diverged 0.501-1.337 MYA. The divergence time of Yak versus Minnan, Holstein and buffalo was 0.136-0.363, 0.273-0.729, and 0.326-0.600 MYA, respectively.     

Identification of microsatellites in cattle unigenes

To identify EST-SSR molecular markers, 41,986 cattle UniGene sequences from NCBI were mined for analyzing SSRs. A total of 1,831 SSRs were identified from 1,666 ESTs, which represented an average density of 19.88 kb per SSR. The frequency of EST-SSRs was 4.0%. The dinucleotide repeat motif was the most abundant SSR, accounting for 54%, followed by 22%, 13%, 7% and 4%, respec-tively, for tri-, hexa-, penta- and tetra-nucleotide repeats. Depending upon the length of the repeat unit, the length of microsatellites varied from 14 to 86 bp. Among the di- and tri-nucleotide repeats, AC/TG (57%) and AGC (12%) were the most abundant type. Annotation of EST-SSRs was also carried out. Three hundred primer pairs were randomly designed using Prime Premier 5.0 program and Oligo 5.0 for further experimental validation.     

牛背梁自然保护区食肉目和偶蹄目动物的区系特征与生态分布

牛背梁自然保护区(108°45′~109°04′E,33°47′~33°56′N)位于秦岭山脉东段,地跨秦岭南北坡。采用样线调查法和访问调查法,于2003年5月~2004年8月,对该保护区食肉动物及偶蹄动物的区系特征和生态分布进行了研究。该保护区共有18种食肉动物及偶蹄动物,其中属我国级、级重点保护动物的兽类分别有2种和7种。分析表明,保护区的有蹄类动物物种丰富,秦岭分布的有蹄类在该区域均有分布,但食肉动物种数仅占整个秦岭地区的45.5%。这些兽类中,属于东洋界的兽类有12种,占66.7%;属古北界的仅1种,占5.5%;其余5种为广布种,占27.8%。牛背梁保护区在动物地理区划上应属古北界和东洋界物种交汇的区域,且为东洋界逐渐向古北界过渡的区域。分析该区域食肉动物及偶蹄动物的生态分布发现,这些物种的垂直分布幅度有很大的差异。垂直分布幅度在海拔高差1300m以上、1000m左右、450~700m之间的物种各占1/3。结果还表明,区内这些兽类物种的丰富度随海拔的升高具有先升后降的垂直变化规律。不论是秦岭南坡还是北坡,分布在海拔1800~2200m区域的兽类物种最多,所占比例大于80%;而在海拔2600m以上区域,兽类种数降至最少,仅占50%左右。兽类丰富度的海拔梯度也体现于这些兽类在各植被类型中的分布上。中山针阔叶混交林中分布的兽类种数最多,而在中低山落叶阔叶林、亚高山针叶林及亚高山灌丛草甸中分布的兽类则较少。     

牛分枝杆菌 MPB63基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

以牛分枝杆菌 Vallee111 染色体 DNA 为模板,以 MPB63 成熟蛋白基因特异性引物进行 PCR 扩增,获得约 400 bp 的 DNA 片段 . 通过 T-A 克隆技术,将 PCR 产物克隆至 pGEM-T Vector 中,成功地构建出克隆载体 pGEM-T-63. 以 BamH Ⅰ和 EcoR Ⅰ双酶切 pGEM-T-63 和 pET28a(+) ,并将纯化的 MPB63 基因亚克隆至 pET28a (+) 中,构建出原核表达载体 pET28a-63. 将 pET28a-63 转化至感受态 E.coli BL21(DE3) 中,经 IPTG 诱导和 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,可见约 18 ku 外源蛋白带 . 蛋白质印迹分析发现,该蛋白质具有牛分枝杆菌抗原性,从而为进一步研究 MPB63 的亚单位疫苗及 DNA 疫苗奠定基础 .     

纪念研制牛血清白蛋白合格产品40周年

BSA是一个古老的生物纯蛋白质。150年来,产品质量是一直处于有色泽、有酶活性水平。该作专业研制生物产品,精心研制BSA达40年(1960-2002),制得了白色、无酶活性的BSA产品,为工业化生产工艺作出了贡献。