| 牛分枝杆菌 MPB63基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 姜秀云,王春凤,王春芳,何昭阳.牛分枝杆菌 MPB63基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J].生物化学与生物物理进展,2005,32(2):129-132. |
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| 作者姓名： | 姜秀云 王春凤 王春芳 何昭阳 |
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| 作者单位： | 1. 吉林农业大学生物技术学院,长春,130118;吉林农业大学动物科技学院,长春,130118
2. 吉林农业大学动物科技学院,长春,130118 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（30270986）,国家高技术“863”计划资助项目（2003AA241121002）和吉林农业大学科研启动基金资助项目. |
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| 摘 要： | 以牛分枝杆菌 Vallee111 染色体 DNA 为模板，以 MPB63 成熟蛋白基因特异性引物进行 PCR 扩增，获得约 400 bp 的 DNA 片段 . 通过 T-A 克隆技术，将 PCR 产物克隆至 pGEM-T Vector 中，成功地构建出克隆载体 pGEM-T-63. 以 BamH Ⅰ和 EcoR Ⅰ双酶切 pGEM-T-63 和 pET28a(+) ，并将纯化的 MPB63 基因亚克隆至 pET28a (+) 中，构建出原核表达载体 pET28a-63. 将 pET28a-63 转化至感受态 E.coli BL21(DE3) 中，经 IPTG 诱导和 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，可见约 18 ku 外源蛋白带 . 蛋白质印迹分析发现，该蛋白质具有牛分枝杆菌抗原性，从而为进一步研究 MPB63 的亚单位疫苗及 DNA 疫苗奠定基础 .
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| 关 键 词： | 牛分枝杆菌， MPB63 基因，克隆，原核表达 |
Cloning and Expression of Mycobacterium bovis Secreted Protein MPB63 in E. coli |
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| JIANG Xiu-Yun,WANG Chun-Feng,WANG Chun-Fang and HE Zhao-Yang.Cloning and Expression of Mycobacterium bovis Secreted Protein MPB63 in E. coli[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2005,32(2):129-132. |
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| Authors: | JIANG Xiu-Yun WANG Chun-Feng WANG Chun-Fang and HE Zhao-Yang |
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| Institution: | 1)College of Biotechnology, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China; 2)College of Animal Science, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;College of Animal Science, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;College of Animal Science, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;College of Animal Science, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mycobacterium bovis MPB63 gene cloning porkaryotic expression |
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