人类免疫缺陷病毒1型逃避RNA干扰的研究

用RNA干扰(RNAi)技术来阻断特定基因的表达,为治疗诸如人类免疫缺陷病毒1型(HIV—1)等慢性病毒感染提供了一种新的手段。虽然,通过小干扰RNA(siRNA)以降解序列特异性的mRNA可选择性地抑制一些在HIV—1复制过程中起关键作用的病毒蛋白,但RNAi技术仍然存在着许多问题亟待解决。本文就HIV—1特异性的RNAi技术作用的潜力和持久性作一研究。     

利用花色素苷合成调节基因C1-R作为基因枪转化效果指示的研究

报道了玉米花色素苷合成调节基因Ｃ１－Ｒ在小麦幼胚、玉米愈伤组织、水稻愈伤组织、烟草叶片中的瞬时表达情况。由于调节基因Ｃ１－Ｒ激活了植物体细胞内花色素苷的合成,因此不需任何生色底物,即可活体观察到花色素苷的表达。结果表明,对于目前仍主要通过基因枪法转化的几类主要粮食作物──小麦、玉米、水稻、枪击４８ｈ后,放大２倍便清晰可见红色斑点,且其表达强度远高于ＧＵＳ的表达,证明Ｃ１－Ｒ可作为一个很好的衡量打枪效果的指示,同时还证明其在双子叶植物──烟草叶片的基因枪转化瞬时表达体系中也起同样的作用。     

RAS-RAF蛋白相互作用结构域的单分子力谱分析北大核心CSCD

利用自行构建的光镊系统,通过in vitro单分子力谱测量,在单分子水平研究了RAS/RAF/MEK/ERK信号传导通路中的重要信号传导蛋白RAF与其上游G蛋白RAS结合的势垒形态。RAS与野生型RAF的单分子结合力分布情况显示,RAS-RAF结合至少涉及RAS结合区(RAS binding domain,RBD)及半胱氨酸富集区(cysteine rich domain,CRD)两个作用位点。而RAS与RAF突变体RAF(Q257R)的单分子结合力分布,存在两个以上的结合域:最可几力为95 pN的包络对应RAS-RAF[RBD]结合;最可几力为117 pN的包络对应RAS-RAF[CRD]结合;最可几力为159 pN的包络对应RAS-RAF[RBD]和RAS-RAF[CRD]同时存在(叠加)时的相互作用。而且在大于200 pN的范围(光镊有效量程之外),RAS与RAF(Q257R)的结合力仍然有相当的概率分布。这说明,突变体RAF(Q257R)比其野生型更易于与RAS结合,且可能涉及新的结合位点。该发现对解释Q257R的致病机理及设计拮抗剂均有重要指导意义。     

黄芪多糖结构及其单糖组成的气相色谱-质谱研究

目的:研究不同样品黄芪多糖的结构和单糖组成差异。方法:采用闪式提取、乙醇沉淀法从黄芪根部提取多种多糖化合物,脱除蛋白、凝胶层析后的多糖化合物经水解、乙酰化后利用气相色谱-质谱法分析黄芪水溶性多糖中单糖组成、结构及其比例,将同样的方法应用到8个不同产地或不同级别的黄芪样品中。结果:黄芪多糖所含单糖种类主要有L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、L-木糖、D-核糖、L-核糖、D-半乳糖,D-葡萄糖,D-甘露糖,且不同黄芪样品所含黄芪多糖里含有的单糖种类及含量有较大差别。结论:该研究可为黄芪品种甄别及黄芪多糖品质分析提供参考。     

集胞藻PCC6803中S2P同源蛋白基因sll0862缺失突变株对热胁迫与氧化胁迫的响应

原核生物中S2P参与应答外界环境刺激,然而行光合作用的蓝细菌-集胞藻PCC6803的S2P同源蛋白功能未知。【目的】考察集胞藻PCC6803中S2P同源蛋白sll0862是否参与外界环境刺激的应答。【方法】监测在高温和氧化胁迫的条件下sll0862基因缺失突变株与野生株在生长速率或存活率上的差异,利用水样调制叶绿素荧光仪(water-PAM,脉冲-振幅-调制叶绿素荧光仪)测量在高温和氧化胁迫的条件下突变株与野生株叶绿素荧光参数的差异,来考察其光合作用差异。【结果】sll0862突变株与野生株在正常的培养环境中生长速率并无差异,但是将sll0862突变株与野生株在48℃加热处理半小时后,sll0862突变株的存活率明显低于野生株。当初始OD730值为0.1的藻液中添加终浓度为1 mmol/L双氧水的时候,sll0862突变株的生长速率比野生株明显低,而且氧化胁迫条件下突变株与野生株的调制叶绿素荧光有差异。【结论】集胞藻PCC6803中sll0862基因的缺失导致突变体对高温与氧化胁迫响应出现缺陷,提示有功能的sll0862参与响应热和氧化胁迫。研究结果为进一步阐述S2P同源蛋白sll0862在集胞藻PCC6803中的功能奠定基础。     

尿液外泌小体中miRNA的含量与肾纤维化的关系

目的:探讨尿液外泌小体(exosomes)中微小RNA(miRNA,miR)的变化与肾纤维化的关系,以寻找早期诊断肾纤维化的生物标志物。方法:以行肾穿刺活检术并诊断为原发性肾脏病的患者为研究对象,其中,肾活检未发现肾纤维化的患者作为对照组,而存在轻到中度肾纤维化的患者作为纤维化组。收集20 m L晨尿,用超速离心方法分离尿液exosomes,用电镜观察其形态,用定量PCR方法检测其中miRNA的含量,并分析其与肾纤维化的关系。结果:超速离心获得的尿液沉淀物呈现exosomes的形态学特征。miR-21、miR-29b、miR-29c、miR-30e、miR-192、miR-200a、miR-200c和miR-429可在所有患者的尿液exosomes中被检出,但含量存在较大差异。与对照组相比,纤维化组患者尿液exosomes中,miR-21、miR-29b、miR-30e和miR-200c的含量显著增高,miR-29c的含量显著下降,而miR-192、miR-200a和miR-429的含量无显著变化。尿液exosomes中miRNA含量与纤维化肾组织中miRNA表达量的变化并不完全一致。结论:尿液exosomes中miR-29c和miR-21的含量在肾纤维化的病变中发生显著改变,可能成为早期诊断肾纤维化的生物标志物。     

玛咖醇提物对正常小鼠免疫功能的影响

本文采用小鼠碳粒廓清、植物血凝素(PHA)诱导淋巴细胞转化,以及血清溶血素和抗体生成细胞测定等实验,研究南美植物玛咖的乙醇提取物对正常小鼠免疫功能的影响。结果表明,玛咖醇提物显著提高PHA诱导的淋巴细胞转化,促进血清溶血素生成,并增加抗体生成细胞的产生,而对单核巨噬细胞的吞噬功能无显著影响。因此,玛咖醇提取物可提高正常小鼠细胞和体液免疫功能,增强机体抵抗力。     

激光诱变玫瑰孢链霉菌结合链霉素抗性筛选法选育达托霉素高产菌株

将经过20 mW激光辐照20 min的达托霉素(Daptomycin)生产菌株-玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)D-38的孢子悬液倾注在含有1．9λg／mL链霉素的高氏一号培养平板上。通过链霉素抗性法筛选获得了10％正变率的突变株,其中突变株LC-54摇瓶发酵单位为81．2 mg／L,比出发菌株提高了39％。     

小麦花药培养对培养温度的反应 Ⅱ.不同基因型小麦花药的适宜培养温度

前文报道小麦花药对短期高温培养——33℃培养8天转25℃(或26°)——的反应有明显的基因型差异,并且根据这种对短期高温培养反应的差异把不同基因型粗略地分为高温型、中间型和低温型等。为了探索各种不同