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尽管重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)具有重大的治疗价值,然而在实际应用却受到体内半衰期过短因而需要频繁重复注射的限制.为了解决这一问题,我们利用两种不同分子量(5 kD和 20 kD)的单甲氧基聚乙二醇丙醛(mPEG-PAL)对rhG-CSF的N端氨基进行了定点PEG化修饰.通过正交实验的统计学方法得到了最适修饰条件.研究发现,PEG化后的rhG-CSF具有了更高的体外稳定性,其体内活性也得到了很大提高,体内作用时间得到很大延长.因此,对于rhG-CSF的N端氨基定点PEG化修饰,可以显著提高rhG-CSF的临床应用价值. 相似文献
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重叠延伸PCR法构建小鼠Sumf1基因的定点突变真核表达载体 总被引:4,自引:0,他引:4
前期通过染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,CHIP)筛选出了转录因子activator protein.2 alpha(AP-2α)的靶基因Sumf1.采用重叠延伸PCR定点诱变技术,对AP.2α在Sumf1内含子片段上的两个结合位点的碱基进行定点突变,并构建定点突变表达载体.DNA测序表明,Sumf1内含子片段103—111bp,411~419bp两处的碱基已分别由GCCGTCAGG突变为GAAGTCCTG,由GCCTCTAGG突变为GGATCTCTG,成功实现定点诱变,为进一步研究AP-2α对基因Sumf1的表达调控奠定了基础. 相似文献
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限制和修饰 (restrictionandmodification ,R M)系统是指由限制性内切酶和甲基化酶组成的单亚基或多亚基复合酶系统 ,两者通常成对出现 ,具有相同的DNA识别位点 ,其作用相反。R M系统在原核生物中普遍存在 ,在保护细胞免遭外源病毒侵害方面具有重要作用[1] 。作为发酵剂的乳酸乳球菌在乳制品发酵中具有重要作用 ,但这类菌株极易遭受噬菌体感染 ,导致菌株产酸力降低 ,甚至发酵失败 ,造成严重的经济损失。所以在乳制品发酵过程中防止噬菌体感染就成为十分重要的问题。通过自然筛选或诱变处理等手段筛选噬菌… 相似文献
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Metabolic reprogramming is one of the critical features in cancer. Tumor cells preferentially utilize glycolysis instead of oxidative phosphorylation in the presence of oxygen, namely 'Warburg Effect'. Recent studies have provided new insights into the Warburg effect, elucidating metabol- ic-dependent and independent mechanisms of metabolic enzymes regulated by post-translational modifications and providing further evidence for the critical role of these tricks in cancer metabolism and tumorigenesis. Of particu- lar interest, we summarized the latest advances in both the metabolic and the non-metabolic functions of metabolic enzymes via the acetylation regulation in the Warburg effect. In addition, their potential roles in cancer metabol- ism therapy will also be briefly discussed. 相似文献
98.
Jianwei Liu ;Zhu Wang ;Jintian He ;Gaizhen Wang ;Rongbo Zhang ;Baohua Zhao 《Acta biochimica et biophysica Sinica》2014,(9):782-791
The bacterial plasminogen-activator staphylokinase (Sak) is a promising thrombolytic agent for treating acute myocar- dial infarction. To effectively reduce the immunogenicity of Sak while maintaining its fibrinolytic activity, site-specific PEGylation was performed in the present study. The che- moselective cysteine PEGylation site was selected within an immunodominant region (amino acid residues 71-87) using an in sUico approach. The PEGylated Sak variants pre- pared in this study showed a purity of 〉97.0%. PEGylation at Position 80 resulted in a Sak variant Sak(E80C-PEG) which has similar fibrinolytic activity and thermostability compared with the native recombinant staphylokinase (r-Sak). The immunogenicity of Sak(E80C-PEG) in guinea pigs was greatly reduced compared with the native r-Sak. Furthermore, preliminary pharmacokinetic results sug- gested that the plasma clearance of Sak(E80C-PEG) from the blood stream of rabbit was significantly decreased com- pared with that of r-Sak, resulting in a 2.8-fold increase of initial half-life and a 3.8-fold increase of systemic availabil- ity. In summary, these results demonstrated that site-specif- ic PEGylation yielded a novel Sak variant Sak(E80C-PEG) with remarkable advantages over the unmodified Sak. 相似文献
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芥子油苷是一类由氨基酸合成的次生代谢产物,脂肪族芥子油苷主要来源于甲硫氨酸,因侧链长度和结构的不同而拥有多样化的生物活性。根据拟南芥不同组织中芥子油苷组分和含量的特点及生物信息学分析,我们推断脂肪族芥子油苷的侧链修饰反应中可能存在由甲基亚磺酰基芥子油苷向甲硫基芥子油苷转化的还原反应,候选基因为甲硫氨酸硫还原酶2(Peptide Methionine Sulfoxide Reductase 2,PMSR2)。为了验证这一假设,我们构建了过量表达PMSR2基因的转基因拟南芥,对其芥子油苷组分及含量进行了测定,并与野生型和PMSR2基因缺失的突变体进行了对比分析,结果表明,PMSR2基因的过量表达并未使芥子油苷含量与组分发生明显变化,但PMSR2基因缺失的突变体与野生型相比,MS GSL/MT GSL的值显著提高,证明PMSR2参与了脂肪族芥子油苷侧链的修饰反应,可以将MS GSL中的硫还原生成MT GSL。该酶的鉴定进一步完善了对芥子油苷合成途径及其侧链修饰的认识,为深入研究脂肪族芥子油苷的生理功能奠定了理论基础。 相似文献
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目的:考察蛙凝素(Odorranalectin,OL)修饰对聚谷氨酸苄酯-聚乙二醇纳米粒(PBLG-PEG-NPs)材料的Calu-3细胞(人肺腺癌细胞)毒性和细胞摄取作用的影响。方法:碘氧化法制备蛙凝素修饰聚合物材料;以姜黄素(curcumin,Cur)为模型药物,采用乳化溶媒蒸发法制备聚谷氨酸苄酯-聚乙二醇纳米粒(PBLG-PEG-NPs)和蛙凝素修饰聚谷氨酸苄酯-聚乙二醇纳米粒(OL-PBLG-PEG-NPs);MTT法考察三种纳米粒对Calu-3的细胞毒性;采用激光共聚焦显微镜对两种纳米粒的Calu-3细胞摄取作用进行定性观察。结果:给予高浓度(2 mg·mL-1)纳米粒培养Calu-3细胞时,细胞存活率大于75%。蛙凝素修饰纳米粒后其被细胞摄取的量从62.7%增加到了81.2%。结论:OL可用于黏膜给药载体的修饰,OL-PBLG-PEG-NPs细胞毒性低、生物相容性好,有望成为一种鼻腔粘膜给药优良载体。 相似文献