SARS冠状病毒基因结构中未知蛋白Orf7的研究

为探讨SARS-CoV未知蛋白在基因表达调控中的作用,本研究以鉴定的SARS-CoVBJ01毒株cDNA为材料,采用PCR方法扩增SARS-CoV未知蛋白基因Orf7,Orf8,Orf9,引入GFP和pDsRed作为报告基因,构建出5种表达质粒:pEGFP-Orf7,pEGFP-Orf8,pEGFP-Orf79,pcDNA3-Orf7,pcDNA3-Orf8。进行体外转染实验后,采用荧光酶标仪测量其细胞中荧光蛋白的表达量,再采用流式细胞仪进一步进行瞬时表达的分析比较。结果发现,pcDNA3-Orf7与pEGFP共转染时,pcDNA3-Orf7能够增强绿色荧光蛋白(GFP)的表达,pEGFP-Orf7与pDsRed共转染时pEGFP-Orf7可以增强红色荧光蛋白(RFP)的表达,且同时表达红色和绿色荧光的细胞数增加。本文首次证明了ORF7编码的63个氨基酸的蛋白具有反式激活作用,即为SARS-CoV自身的反式激活因子。     

雌激素受体p在胃腺癌中表达的研究

目的：检测雌激素受体β（ERβ）在胃组织的存在状况并研究其在人胃腺癌中的作用。方法：使用免疫组化方法,在蛋白水平对配对的原发性胃腺癌患者的癌组织及其癌旁非癌组织的ERB亚型进行检测,采用20例正常胃粘膜作为对照。结果：ERβ蛋白在部分胃腺癌及其癌旁非癌组织表达,但ERβ阳性率及表达模式不同。与配对的非癌组织相比,部分癌组织发生了ERβ表达减少或丢失,而且ERβ表达减少与低分化程度相关（P=0．041）,丢失的ERβ仅见于低分化癌。结论：ERβ可作为识别某些进展期胃腺癌发生发展的标志物,ERβ表达改变在低分化癌中更常见,也提示ERβ阳性胃腺癌可能比ERp表达丢失者预后更好;另外,在非癌组织腺上皮存在E邢的表达提示在正常胃组织中ERB很可能具有一种保护性作用。     

肠道病毒ECHO25河南分离株基因特征分析

首次对ECHO25病毒进行分子生物学分析,阐明ECHO25(Entric Cytopathic Human Orphanviruses Type25)病毒河南分离株的分子生物学特征及其与世界其它分离株的基因关系。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出VP1蛋白编码基因并进行序列测定,将所测4株ECHO25病毒的VP1序列与GenBank上已发表的ECH-O25病毒VP1区进行同源性比较及遗传进化分析发现:河南省4株ECHO25与标准株JV-4核苷酸同源性为79.2%～80.1%,氨基酸同源性为89.0%～92.4%;河南省4株ECHO25核苷酸同源性为93.0%～99.0%,氨基酸同源性为92.4%～97.5%;HN-01分离株与HN-26分离株高度同源,其核苷酸同源性达99.0%;河南省4株ECHO25同属B1基因亚型。     

弥漫大B 淋巴瘤12 号染色体基因表达的研究

目的:研究弥漫大B淋巴瘤(Diffuse Large B-Cell Lymphoma,DLBCL)12号染色体基因表达情况。方法:收取临床DLBCL病人淋巴结标本液氮速冻,快速冷冻切片,采用激光显微切割技术分离单纯淋巴瘤细胞,提取淋巴瘤细胞中的mRNA与表达谱芯片杂交,通过信号扫描、处理后获得表达基因杂交信号强度。每基因设11-20对探针。杂交信号与错配探针对比,扣除背景值后,使用Wilcoxon符号秩和检验选取与错配杂交信号有显著差异的基因作为分析结果(P=0.05)。随机选取两个检测到的基因,使用PCR方法检验基因芯片结果的可靠性。结果:成功地从快速冷冻保存的DLBCL标本中提取了RNA。使用表达谱芯片进行研究,发现了共164条12号染色体编码的基因在淋巴瘤细胞中表达。并根据胞内定位,基因功能和基因所属的代谢通路三种分类方法对所得基因进行分类分析。基因表达密度分析显示12号染色体上的基因表达情况与编码基因分布情况比较一致。结论:使用表达谱芯片研究了12号染色体上的基因表达情况,为研究DLBCL提供了依据。     

EV71病毒核酸快速检测方法的比较

PCR方法检测肠道病毒71型(EV71)的分子诊断技术十分快速敏感。目前已有多篇文献报道了不同的检测EV71的PCR方法,但对不同方法检测结果的比较还少有报道。本研究将检测肠道病毒通用5’UTR基因的3种定量PCR(rRT-PCR)方法和1种普通PCR(cRT-PCR)方法和特异性检测EV71的2种rRT-PCR和1种cRT-PCR方法进行特异性和敏感性比较评估。所有试验方法都有较好的特异性,无交叉反应。核酸最低检测限值为从8.19×101～8.19×105个拷贝,rRT-PCR比cRT-PCR更敏感。所有的rRT-PCR方法检测50份临床标本时都较敏感。     

柯萨奇病毒A组16型河南省分离株基因组序列分析

为了解河南省手足口病患者标本中分离柯萨奇A组的16型(CoxAl6)病毒基因组特征,对2010年采集的手足口病患者临床标本406份进行RT-PCR扩增和病毒分离鉴定;通过10对引物分段扩增和拼接CoxAl6分离株基因组序列,利用生物信息学软件对序列分析,构建序列遗传发育树。测序获得河南省CoxAl6分离株HN1162/HN/CHN/2010基因组全长序列7 411bp,5′非编码区(5′UTR)、P1、P2、P3、3′非编码区(3′UTR)区域核苷酸序列与GenBank公布的其它分离株相似性分别为87.0%～97.9%、77.0%～95.4%、80.3%～96.9%、77.9%～96.2%、80.5%～100%;VP1区核苷酸相似性为91.4%～96.4%,氨基酸相似性为99.3%～99.7%;遗传发育树分析表明与我国深圳、广州、福建分离株处于同一分支。河南省手足口病患者标本CoxAl6病毒分离株属于C2基因亚型/B-2基因亚型,对加强该病毒变异检测,预防控制手足口病疫情具有重要意义。     

粤西海域浮游植物群落结构特征的多元分析与评价

根据1998-1999年对粤西海域浮游植物的周年调查资料,本文采用主成分分析和聚类分析等多元统计分析方法研究该海域浮游植物的主要种类组成和群落结构的基本特征。研究结果表明,中肋骨条藻（Skeletonema costatum）、伏氏海毛藻（Thalassiothrix fauenfeldii）、小舟形藻（Navicula subminuscula）、颤藻（Oscillatoria sp．）、菱形海线藻（Thalassionema nitzschioides）、细弱海链藻（Thalassiosira subtilis）、齿角毛藻（Chaetoceros denticulatus）、北方劳德藻（Lauderia borealis）、中华盒形藻（Biddulphia sinensis）、纺锤角藻（Ceratium fusus）、翼根管藻（Rhizosolenia alata）、斯氏根管藻（Rhizosolenia stolterforthii）、短角弯角藻（Eucampia zoodiacu）、笔尖形根管藻（Rhizosolenia styliformis）、拟弯角毛藻（Chaetoceros pseudocurvisetus）等种类构成了粤西海域浮游植物的主体。春季、夏季和秋季该海域浮游植物可明显划分为近岸类群和近外海类群2个群落,冬季群落结构分化不显著,不形成明显的类群。各主要种类的季节演替现象十分明显。     

厚壳贻贝McCaspase 3-4基因的克隆及其在幼虫变态中的作用

为进一步了解细胞凋亡及其效应基因caspase-3在海洋贝类厚壳贻贝(Mytilus coruscus)变态中的作用, 研究通过RACE技术克隆并鉴定了一个厚壳贻贝caspase-3基因的cDNA全长, 并对该基因在幼虫变态中的作用进行了研究。碱基序列和氨基酸序列特征分析显示, 该基因编码的蛋白质具有典型的caspase P20和P10结构域, 但核心半胱氨酸活性位点QACXG五肽保守序列发生了突变。系统进化分析结果显示该基因与无脊椎动物Caspase-3聚在一起, 并与地中海贻贝(Mytilus galloprovincialis)caspase 3/7-4相似度最高, 因此将其命名为McCaspase 3-4。随后, 通过实时荧光定量PCR技术对该基因在成贝不同组织及幼虫变态不同时间点的表达水平进行了分析。结果显示, McCaspase 3-4在成贝外套膜和唇瓣中的表达量显著高于其他组织。肾上腺素诱导眼点幼虫变态12h后, McCaspase 3-4的表达水平出现显著上升, 并在刺激24h后达到最高, 表明该基因可能在幼虫变态早期发挥作用。利用RNA干扰技术敲降眼点幼虫McCaspase 3-4基因表达后的结果显示, 肾上腺素对眼点幼虫变态的诱导作用显著下降, 表明该基因在调控厚壳贻贝变态过程中具有重要作用。研究结果有助于理解细胞凋亡在厚壳贻贝幼虫变态中的作用及贝类变态的分子机制。     

人晶体膜内蛋白MPl9基因（LIM2）启动子上一个晶体特异顺式元件的鉴定

使用重叠和变异的寡核苷酸作为探针,凝胶迁移分析和竞争实验分析了LJM2转录起始位点上游-47至-32的区域,与其高度亲和结合的一个蛋白复合体看来仅仅结合到这个DNA双链区域的“敏感”位点。这个位点的序列由4个G核苷,接着7个其他核苷酸(AACCTAA)及连着另外4个G核苷组成,即GGGGAACCTAAGGGG;我们称其为Hsu元件。使用含有这个元件或相应的变异元件所构建的uM2基因启动子-CAT质粒的活性分析表明：Hsu元件是位于LJM2基因启动子之内,它是LJM2基因表达所必须的。结合到Hsu元件的反式因子存于晶体发育期间,看来是晶体特异性的。由于LIM2基因启动子并不包含一个经典的TATA盒,这个Hsu元件可能充当RNA复制酶复合体结合的位点。