柑橘大实蝇气味结合蛋白基因BminOBP25的克隆、原核表达及组织表达分析

【目的】昆虫的气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)与嗅觉识别密切相关,在触角感受器淋巴液内运输外界的脂溶性气味分子顺利到达嗅觉受体过程中起着关键的作用。本研究对柑橘大实蝇Bactrocera minax的气味结合蛋白基因进行了克隆和表达分析,旨在更好地了解气味结合蛋白在柑橘大实蝇嗅觉识别中的作用及为进一步研究柑橘大实蝇嗅觉传递的分子机制奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术克隆柑橘大实蝇的气味结合蛋白基因,并进行生物信息学分析;构建重组表达载体p ET28a(+)-Bmin OBP25,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中,SDS-PAGE及Western blotting鉴定重组表达蛋白;采用荧光定量PCR检测该基因在柑橘大实蝇成虫不同组织中的表达。【结果】克隆获得柑橘大实蝇气味结合蛋白基因的c DNA全长序列,命名为Bmin OBP25(Gen Bank登录号:MH181875)。测序结果表明,Bmin OBP25开放阅读框全长447 bp,编码148个氨基酸,预测分子量为17.5 k D,编码序列具有OBPs典型的6个保守半胱氨酸和6个α螺旋区域特征。在IPTG诱导下目标蛋白以6×His标签融合蛋白的形式在宿主菌中得到稳定表达。荧光定量PCR分析表明,Bmin OBP25 mRNA在成虫触角、头(去除触角)、胸、腹、足、翅和产卵器中均有表达,其中在触角、头(去除触角)、足和产卵器中表达量较高。【结论】Bmin OBP25在柑橘大实蝇成虫触角、头、足和产卵器中具有高转录活性,提示该基因在非嗅觉组织中可能也具有生理功能,特别是可能在昆虫的取食与产卵地选择过程中起重要作用,其功能还需深入研究。本研究实现了Bmin OBP25基因的原核表达,为深入研究Bmin OBP25基因的功能奠定基础。     

石油分散剂BP-1100X对海洋围隔生态系的影响研究

在分散剂作用下,围隔水体中浮游动物种群数量明显减少,浮游植物因捕食压力不大而诱发“赤潮”,分散的原渍在围隔水体中的生态效应变得不明显,细菌生物量和生产力在实验前期比对照组高,后期则随原油降解而波动,这表明微生物积极参与了原油的降解活动,实验揭示,由于添加物的毒性作用促成的生态系的不平衡,也可最终导致“赤潮”发生。     

刺儿菜复合体的形态学研究

本文对不同产地,不同居群的全国２００份刺儿菜复合体标本的若干性状选用Ｅ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ的形象化散点图和柱状图方法进行研究分析,认为将大刺儿菜与小刺儿菜分为独立的种是合理的。     

SA-hIL2双功能融合蛋白的研制及其生物学鉴定

目的：制备链亲和素标记的人白细胞介素-2(SA-hIL2)融合蛋白,并研究其生物学功能。方法：构建SA-L-IL2-pET24重组表达质粒,在大肠杆菌中表达SA-hIL2融合蛋白,对表达的SA-hIL2融合蛋白采用镍金属螯合（Ni-NTA）层析柱进行纯化,透析复性。CCK-8法检测SA-hIL2融合蛋白对PHA刺激的人外周血淋巴细胞的增值活性,流式细胞仪分析SA-hIL2融合蛋白对生物素化的B16.F10肿瘤细胞表面锚定修饰效率。结果：SA-hIL2在大肠杆菌中实现了高效表达,约占菌体总蛋白的20％,制备的SA-hIL2融合蛋白纯度达到95％,并具有双重活性,即hIL-2促进PHA刺激的人外周血淋巴细胞的增值活性和SA介导的高效结合至已生物素化的B16.F10肿瘤细胞表面的功能（表面锚定修饰效率约95％）。结论：研制的SA-hIL2融合蛋白具有双重活性,可为研制表面修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供基础。     

新生隐球菌转录共激活因子MBF1基因的鉴定与敲除

目的构建新生隐球菌转录共激活因子MBF1基因缺陷菌株。方法采用套叠PCR方法 ,构建含有抗性基因NEO以及靶基因上下游同源DNA片段的基因敲除框,通过基因枪将重组片段转化入新生隐球菌,应用PCR筛选和DNA序列测序方法对基因突变株进行鉴定与验证。结果成功构建了新生隐球菌基因突变株mbf1裣。结论通过基因突变株mbf1裣的构建,为深入研究新生隐球菌转录辅助因子Mbf1的功能机制奠定基础。     

腹腔镜胆总管探查术在有上腹部手术史患者中的应用

目的:探讨有上腹部手术史患者行腹腔镜胆总管探查术的可行性和临床疗效。方法:回顾性分析我院2007年-2013年实施腹腔镜胆总管探查术(LCBDE)患者共90例,分为两组,A组为有上腹部手术史行LCBDE术(n=45),B组为既往无手术史行LCBDE术(n=45),比较两组之间手术时间、中转开腹率、结石残留率、术后并发症率、住院时间、结石复发率。结果:A组和B组在中转开腹率、结石残留率、术后并发症率、住院时间、结石复发率上并没有统计学差异(P0.05),而A组手术时间长于B组(P0.05)。结论:有上腹部手术史患者行LCBDE是安全可行的。成功的关键在于合适的病例选择、全面的术前评估、合理的穿刺点选择和精确的术中操作。