小菜蛾溶菌酶Pxlys的基因克隆及其 重组蛋白的抗菌活性分析

【目的】本研究旨在通过研究小菜蛾Plutella xylostella溶菌酶的功能,进一步认识小菜蛾的免疫防御机理,为小菜蛾的生物防治提供新的思路。【方法】利用RACE技术克隆小菜蛾溶菌酶基因。构建原核表达载体pET-29a-Pxlys,利用原核表达系统表达并用镍柱亲和层析纯化重组蛋白Pxlys。利用牛津杯法检测重组蛋白Pxlys对停滞棒杆菌Corynebacterium stationis、藤黄微球菌Micrococcus luteus、金黄色葡萄球菌Staphyloccocus aureus、大肠杆菌Escherichia coli、志贺氏菌Shigella sp.、沙门氏菌Salmonella sp.和苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis的抑菌活性,并利用扫描电子显微镜观察重组蛋白Pxlys对停滞棒杆菌和大肠杆菌的溶菌特征。【结果】克隆获得开放阅读框长423 bp的小菜蛾溶菌酶基因Pxlys(GenBank登录号： MN702780)序列,它编码140个氨基酸,相对分子质量为15.79 kD。抑菌试验表明,重组蛋白Pxlys不仅对革兰氏阳性细菌的停滞棒杆菌、藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌有较强的抑菌活性(抑菌圈直径分别为20.0±1.1, 19.0±0.5和16.5±0.5 mm),而且对革兰氏阴性细菌大肠杆菌、志贺氏菌和沙门氏菌也有抑菌活性(抑菌圈直径分别为16.3±0.5, 15.0±0.5和14.0±1.1 mm),重组蛋白Pxlys对革兰氏阳性细菌比对革兰氏阴性细菌表现出更强的抑菌活性。另外,重组蛋白Pxlys还表现出对苏云金芽胞杆菌的抑菌活性。扫描电子显微镜下,经重组蛋白Pxlys处理过的停滞棒杆菌和大肠杆菌的溶菌特征不同。【结论】Pxlys具有广谱的抗微生物活性,其对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌的抑菌机理可能存在不同。研究结果为深入研究小菜蛾免疫防御系统提供基础。     

藏羚羊肌红蛋白（MGB）基因编码区的克隆与分析

为了探讨藏羚羊低氧适应的分子生物学机制,从藏羚羊(Pantholops hodgsonii)骨骼肌组织中提取总RNA,通过逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)技术扩增出MGB基因编码区cDNA片段,并与pGEM-T Easy载体连接构建重组质粒,转化DH5α菌。扩增培养后鉴定阳性质粒并进行序列测定,结果与NCBI数据库进行比较。结果显示,MGB基因编码区由465bp组成,编码154个氨基酸。其序列与绵羊、牛、猪、人、小鼠、大鼠的同源性分别是98%、97%、90%、86%、82%、81%。推测出的氨基酸序列与绵羊、牛有98%同源性,而与猪、人、小鼠及大鼠分别有89%、85%、80%、79%的同源性。与NCBI数据库登录的绵羊的MGB cDNA序列比较发现,藏羚羊MGB基因的21位和78位密码子分别发生了突变(GGT→GAT和GAA→AAG),其对应的氨基酸分别由甘氨酸变为天冬氨酸及谷氨酸变为赖氨酸。至此,成功克隆出藏羚羊MGB基因编码区,为进一步揭示藏羚羊低氧适应的分子机制打下基础。     

大沙鼠种群年龄结构的季节变化和繁殖特征

2003~2004年在内蒙古包头市达茂联合旗腾格淖尔地区对大沙鼠(Rhombomys opimus)年龄组成的季节变化及其繁殖特征进行了研究。结果表明,大沙鼠的年龄组成存在着明显的季节变化和年度之间的差异,在2月至次年的4月没有幼体,6月无亚成体;大沙鼠的性比无论从总体还是各个年龄组看,均存在着差异,特别到老体,这种差异更加突出。在内蒙古包头腾格淖尔地区的大沙鼠一年中部分个体参与第三胎繁殖,而且其繁殖状况存在着年际之间的差异。     

三种百合鳞茎提取物的抑菌作用

采用纸片琼脂扩散法测定了宜昌百合、岷江百合及兰州百合鳞茎甲醇提取物对革兰氏阳性细菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)和革兰氏阴性细菌(大肠杆菌、沙门氏菌)的抑制活性,并对3种百合鳞茎提取物的含量与抑菌活性进行了剂量-效应关系分析。结果表明:3种百合鳞茎提取物对4种细菌均具有抑制活性,对革兰氏阳性细菌的抑菌活性高于对革兰氏阴性细菌的抑菌活性,且宜昌百合和岷江百合两种野生百合鳞茎提取物的抑菌活性均高于普通食用的兰州百合;3种百合鳞茎提取物的含量与抑菌活性之间存在明显的剂量-效应关系,即随着提取物含量的升高,抑菌活性明显升高。     

腾格里沙漠东南缘藓结皮微生物组基因多样性及功能

本研究对腾格里沙漠东南缘沙坡头地区藓结皮土壤样品进行了宏基因组测序, 以揭示该地区藓结皮土壤中参与固碳、固氮等生态功能的微生物基因及其代谢通路。结果表明, 藓结皮土壤中细菌域微生物最多, 其次为古生菌域和真核生物域。在细菌域中, 放线菌门(Actinobacteria)数量最多, 其次是变形菌门(Proteobacteria)和蓝细菌门(Cyanobacteria)。基于eggNOG和KEGG数据库对构建的非冗余基因集进行功能预测, 藓结皮土壤中微生物基因多样性和代谢路径多样性高。藓结皮土壤中与固氮相关的代谢通路丰度低可能是藓结皮固氮量微弱的根本原因, 造成利用大气中氮气合成氨的生态功能减弱。而藓结皮已经形成的氮库主要通过硝酸盐还原途径将硝酸盐还原成铵盐, 可能用于藓结皮微生物组自身的氨基酸合成, 也可能为藓类植物的生长提供有效氮源。     

原发性翼状胬肉中COX-2与iNOS的表达及相关研究

目的:探讨环氧合酶2(COX-2)与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在原发性翼状胬肉中的表达及其在发生发展过程中的作用.方法:原发性翼状胬肉组织与对照组的正常结膜组织标本均取自石河子大学第一附属医院眼科行手术治疗的患者,采用免疫组织化学Elivision法分别检测56例原发性翼状胬内、20例正常结膜中COX-2、iNOS的表达;脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated 2'-deoxyuridine 5'-triphosphate-biotin nick end labeling,TUNEL),检测不同时期原发性翼状胬肉细胞中凋亡细胞的表达.结果:56例原发性翼状胬肉中COX-2的阳性表达率,静止期为50%,进行期为87.5%,正常结膜为0(0/20).iNOS的阳性表达率,静止期为50%,进行期为92.5%,正常结膜50%.COX-2、iNOS阳性表达在原发性翼状胬肉与正常结膜两组间差异有显著意义,P＜0.001.正常结膜对照组无凋亡细胞表达,静止期和进行期胬肉组织中均出现凋亡细胞,凋亡细胞的表达在静止期和进行期2组间的表达有明显差异(P＜0.05)).结论:COX-2、iNOS在翼状胬肉中的表达,提示COX-2、iNOS可促进新生血管形成,可能与翼状胬肉的发生、发展以及术后复发有关,细胞凋亡在翼状胬肉的发生中起重要作用,COX-2、iNOS抑制剂以及细胞凋亡的调控可望成为降低翼状胬肉复发率新的依据.     

原生动物细胞休眠现象的研究进展

原生动物细胞在一定条件下形成包囊是一较普遍的现象。本文总结了原生动物细胞休眠现象的研究,包括休眠细胞的结构分化,细胞生命活动特征,与细胞休眠过程相联系的大核DNA的变化及其在转录水平的表达调节和转录后蛋白质的修饰等的进展。并预期,关于休眠细胞的分化及其基因调控,蛋白质的修饰,细胞信号的传递及其细胞骨架的作用等,可能是未来研究的主要方面。     

重症病毒性脑炎患儿预后不良的危险因素及预测模型的构建与评价

摘要 目的：探讨重症病毒性脑炎（SVE）患儿预后不良的危险因素并构建和评价其预测模型。方法：选取2021年1月～2022年5月我院收治的120例SVE患儿，根据6个月后的儿童格拉斯哥预后评分量表（CGOS）评分将其分为预后不良组和预后良好组。收集SVE患儿临床资料，采用多因素Logistic回归分析SVE患儿预后不良的危险因素并构建其预测模型，采用受试者工作特征（ROC）曲线分析SVE患儿预后不良预测模型的预测价值。结果：120例SVE患儿预后不良发生率为42.50%（51/120）。预后不良组病程和发热、惊厥持续时间长于预后良好组，惊厥、应激性高血糖、中重度脑电图异常比例高于预后良好组，脑脊液降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）水平高于预后良好组（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示，病程、发热持续时间及惊厥持续时间延长、应激性高血糖、中重度脑电图异常和PCT、CRP升高为SVE患儿预后不良的独立危险因素（P＜0.05）。SVE患儿预后不良预测模型方程：y＝－16.463＋0.376×病程＋0.198×发热持续时间＋0.353×惊厥持续时间＋0.661×应激性高血糖＋1.305×中重度脑电图异常＋0.662×PCT＋0.071×CRP，该模型H-L检验P＞0.05。ROC曲线分析显示，该预测模型预测SVE患儿预后不良的曲线下面积为0.938，敏感度和特异度分别为82.35%、93.51%。结论：病程、发热持续时间、惊厥持续时间、应激性高血糖、脑电图异常、PCT、CRP为SVE患儿预后不良的影响因素，基于上述危险因素构建的预测模型对SVE患儿预后不良的预测价值较高。     

胶州湾石油降解菌的分布

胶州湾是我国的一个重要港口,自从黄岛输油码头投入使用后,海上油运事业发展很快。但近些年来,随着油运和沿海石油工业的发展,胶州湾受到较为严重的石油污染。这样它不仅影响海产养殖和盐业,而且成为南黄海的污染源。因此,研究并阐明海湾中油污自净化的规