甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA7的表达与结合活性分析

几丁质脱乙酰酶(Chitin deacetylase,CDA)是昆虫几丁质代谢酶系中的重要组分,是害虫防治的重要靶标。通过RT-PCR技术克隆得到编码甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶secda7基因(Gen Bank登录号为MG604929),该基因长1 431 bp,包含开放阅读框长1 134 bp,SeCDA7蛋白的预测分子量分别为43.156 k D。结构域分析显示,SeCDA7具有一个多聚糖乙酰基转移酶催化区,属于第Ⅴ类CDA蛋白。分别构建了原核和真核重组表达载体,利用大肠杆菌和Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统转染Sf9昆虫细胞,成功表达了SeCDA7蛋白,纯化SeCDA7蛋白并分析几丁质结合活性,结果表明SeCDA7蛋白具有几丁质结合活性;荧光定量PCR结果显示secda7基因主要在中肠组织表达。本研究实现了甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶基因secda7的外源表达,并鉴定出SeCDA7蛋白具有几丁质结合活性,为深入探究甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶的生理功能提供了理论依据。     

超量表达NrCN基因提高烟草植株对TMV的抗性

利用农杆菌介导的遗传转化法将含有普通烟草Ubi.U₄启动子驱动NrCN基因表达的元件导入TMV敏感烟草品种K326中,对筛选鉴定出的T₀代转基因植株接种TMV,测定其接种前后不同时期的理化指标,以接种TMV的野生型植株为对照。结果显示,转基因植株和野生型植株接种TMV前叶绿素（Chl）和MDA含量及SOD、POD和CAT酶活力均无显著差异,但接种TMV后野生型植株Chl含量逐渐降低,转基因植株Chl含量先增后降,在接种TMV后5 d时转基因植株叶片Chl含量显著高于野生型植株。接种前期（0³ d）转基因植株MDA含量略低于野生型植株,但差异不显著;但接种后期（3⁵ d）前者的MDA含量显著低于后者。接种TMV后转基因植株中SOD、POD及CAT酶活性变化幅度较野生型植株高,以CAT的变幅最为显著。另外,Real-time PCR分析结果表明,接种TMV后3 d时转基因植株MAPK、PR-1a及NrCN表达量均显著高于野生型植株。以上结果表明,通过转基因技术提高烟草抗病基因NrCN的表达量,能提高防御酶活性及病程相关基因的表达量,从而延缓植株感染TMV的发病时间,增强敏感植株对TMV的抗性。     

超量表达MrCN基因提高烟草植株对TMV的抗性

利用农杆菌介导的遗传转化法将含有普通烟草Ubi．U4启动子驱动MrCN基因表达的元件导入TMV敏感烟草品种K326中,对筛选鉴定出的T0代转基因植株接种TMV,测定其接种前后不同时期的理化指标,以接种TMV的野生型植株为对照。结果显示,转基因植株和野生型植株接种TMV前叶绿素（Chl）和MDA含量YLSOD、POD和CAT酶活力均无显著差异,但接种TMV后野生型植株Chl含量逐渐降低,转基因植株Chl含量先增后降,在接种TMV后5d时转基因植株叶片Chl含量显著高于野生型植株。接种前期（0-3d）转基因植株MDA含量略低于野生型植株,但差异不显著;但接种后期（3～5d）前者的MDA含量显著低于后者。接种TMV后转基因植株中SOD、POD及CAT酶活性变化幅度较野生型植株高,以CAT的变幅最为显著。另外,Real-timePCR分析结果表明,接种TMV后3d时转基因植株删蹦、PR-1α及NrCN表达量均显著高于野生型植株。以上结果表明,通过转基因技术提高烟草抗病基NNrCN的表达量,能提高防御酶活性及病程相关基因的表达量,从而延缓植株感染TMV的发病时间,增强敏感植株对TMV的抗性。     

城市地表硬化对银杏生境及生理生态特征的影响

城市大规模的地表硬化改变了城市环境,影响了城市中植物的正常生长。利用土壤水分温度仪ECH2O测定了不同硬化地表下土壤含水率(WCS)和土壤温度(Ts),利用LI-6400光合仪,并配备荧光叶室,测定了银杏生长的环境因子和银杏生理生态参数。研究结果表明,城市地表硬化对银杏生长环境的影响主要表现为空气温度(Ta)和土壤温度(Ts)升高,空气相对湿度(RH)和土壤含水率(WCS)下降,银杏对地表硬化的生理生态响应表现为净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Gs)降低,叶面饱和水汽压亏缺(VPDL)增大,叶片含水率(LWC)下降;最大光化学效率(Fv/Fm)和PSⅡ实际光合电子传递量子效率(ΦPSⅡ)下降,硬化程度越高,银杏受到的胁迫越重;受城市地表硬化的影响,银杏吸收的光能用于光化学反应的比例减少,而用于热耗散和荧光耗散的比例增加,城市硬化地表上银杏的水分利用效率(WUE)、光能利用效率(LUE)和CO2利用效率(CUE)明显下降。     

恶性肿瘤患者感染状况调查及相关因素分析

目的通过对恶性肿瘤患者感染状况的调查,了解恶性肿瘤感染的特点,为临床上对于肿瘤患者感染的及时防治,提供充足的理论依据。方法应用各种平板对采集的标本进行细菌培养,按ATB系统进行细菌鉴定。并以SPSS 13.0统计学软件进行分析、检验。结果1124例恶性肿瘤患者中,共有68例（6.0%）出现了细菌感染,进一步分析发现性别、年龄、吸烟状态均与恶性肿瘤患者感染具有一定相关性。结论对于老年、男性、吸烟的中晚期恶性肿瘤患者,特别在中性粒细胞下降后,应高度注意其感染的发生。     

家蚕FoxG转录因子的鉴定及其在精巢发育中的功能初探

[目的]Fox家族蛋白是调控动物发育的关键转录因子.本文分析了鳞翅目昆虫家蚕Bombyxmori的BmFoxG亚家族蛋白在精巢发育中的作用,为基于生殖系统的家蚕性状优化或害虫不育技术的开发提供理论依据.[方法]利用PCR克隆家蚕BmFoxG-1 和 BmFoxG-2基因;通过生物信息学工具对BmFoxG蛋白的结构及理化性质进行分析;采用qPCR技术检测BmFoxG基因在家蚕不同发育阶段的精巢中的表达变化;在家蚕Bm12细胞株中过表达BmFoxG-1,并通过qRT-PCR分析BmFoxG-1调控的靶基因.[结果]本文克隆获得了 BmFoxG-1(933 bp)和 BmFoxG-2(702 bp)两个基因.BmFoxG-1 和 BmFoxG-2蛋白均包含保守的Forkhead结构域,但BmFoxG-1蛋白在C端多出约60个氨基酸.BmFoxG-2基因在家蚕不同发育时期的精巢中的表达量均较低;BmFoxG-1 的表达均显着高于BmFoxG-2,且随着发育时期而变化,暗示BmFoxG-1参与精巢的发育.生殖细胞发育基因BmVasa、BmCyclinA等多个细胞周期基因以及精子鞭毛发育相关基因BMSK0009828在不同发育阶段的精巢中的表达趋势与BmFoxG-1类似,且BmFoxG-1在家蚕细胞中的过表达可以显著上调BmVasa、BmCyclinA和BMSK0009828等精巢发育相关基因的表达.[结论]我们推测BmFoxG-1蛋白可能通过调节精巢细胞周期或生殖细胞的功能来调节家蚕精巢的发育.     

基于特异性PCR和荧光检测技术快速鉴定艾纳香

为建立快速准确的艾纳香分子鉴定方法。采取筛选艾纳香及其混伪品基因组DNA的提取方法,针对艾纳香特异性位点设计引物,优化PCR扩增条件,荧光检测扩增产物。结果表明碱裂解法更适于艾纳香基因组DNA的提取;叶绿体基因（tDNA）特异引物能特异性扩增艾纳香DNA,其扩增产物荧光检测呈绿色,混伪品无反应发生。试验结果显示该法简化了分子鉴定过程,省时节力,且结果准确可靠,可作为艾纳香植物和药材的鉴定方法。     

不同年龄组人表皮干细胞Integrin beta1表达分析研究

目的：分析不同年龄组包皮组织中表皮干细胞Integrin beta1 的表达，为组织工程学种子细胞的选用提供依据。方法：利用DispaseⅡ 和BSA 共同作用，分散表皮和真皮组织部分。对不同年龄组分离的表皮干细胞进行Integrin beta1 免疫荧光染色，利用流式细 胞仪检测不同年龄组Integrin beta1表达的阳性率。结果：不同年龄组分离得到的表皮干细胞形态一致。细胞生长状态和生长速度以 7 岁年龄组为最佳，其次是16 岁年龄组，最后是30 岁年龄组。流式细胞仪检测不同年龄组Integrin beta1 的表达，7 岁组阳性率为 93 %，16 岁组阳性率为56 %，30 岁组阳性率仅为3.5 %。结论：随着年龄的增长，皮肤组织中表皮干细胞的含量降低，低年龄段皮 肤组织是组织工程学种子细胞的良好选择。     

魔芋葡甘聚糖制备低聚糖及抗氧化研究进展

魔芋葡甘聚糖(konjac glucomannan, KGM)是β-D-吡喃葡萄糖与β-D-吡喃甘露糖通过β-1,4糖苷键连接成的多糖，被广泛应用于食品工业，具有减少、延缓细胞氧化的能力，但高粘度限制了其应用范围和效率。多种理化及生物方法能将KGM降解为魔芋葡甘低聚糖(Konjac glucomannan oligosaccharides, KOGM),降解方法及对应参数直接影响降解效率及KOGM的结构和特性。KOGM不仅粘度低，抗氧化能力也比KGM更优越。KGM和KOGM的抗氧化能力使其在对抗糖尿病、心血管疾病、神经性疾病甚至是癌症等疾病中发挥着重要作用。该文综述了KGM降解制备KOGM的方法，概述了KGM和KOGM的抗氧化研究进展，对KGM和KOGM的未来研究方向进行展望，为KGM和KOGM的多领域应用奠定基础。     

水稻OsNramp4介导锰离子吸收和转运的功能分析

锰(Mn)是植物生长发育必需的矿质营养元素。水稻天然抗性相关巨噬细胞蛋白(natural resistance-associated macrophage protein, OsNramp)家族有7个成员,其中4个具有Mn²⁺转运活性。OsNramp4已被鉴定为一个铝离子转运蛋白,但尚未报道其是否具有Mn²⁺转运活性。本文利用Mn²⁺吸收突变株Δsmf1进行OsNramp4功能互补实验,分析OsNramp4对Mn²⁺的响应,研究环境Mn²⁺胁迫对敲除突变体nramp4的生长势以及Mn²⁺吸收和转运的影响。结果显示:OsNramp4能互补Δsmf1的Mn²⁺吸收缺陷表型;水稻根部OsNramp4的表达受Mn²⁺的诱导;高Mn²⁺胁迫下, nramp4的长势明显优于野生型对照,突变体地上部Mn²⁺含量显著低于野生型,且根-茎Mn²⁺转运率明显低于野生型...