携带GFP发光基因人猴嵌合免疫缺陷病毒SHIV的构建及活性检测

目的获得正常感染宿主细胞并稳定表达绿色荧光的SHIV毒株,为后期建立发光SHIV/恒河猴感染模型奠定基础。方法通过分子克隆手段,将绿色荧光蛋白基因克隆到携带HIV-1包膜蛋白的SHIV病毒全基因组中,并在细胞水平检测各毒株的感染活性及荧光蛋白表达能力。结果得到一株可表达绿色荧光蛋白的病毒株SHIV-KB9nefGFP,并具有感染TZM-bl细胞系及猴PBMC的能力。结论该毒株在宿主细胞恒河猴PBMC中具有一定复制能力,希望通过后续的猴体内传代实验获得毒力更强的发光病毒。     

一株中肋骨条藻特异溶藻菌的分离鉴定及溶藻特性

【背景】赤潮频发引起严重的海洋生态学问题,不仅直接影响到海洋生态系统稳定、海洋生物资源可持续利用和水产养殖业等海洋产业的健康发展,而且对人类健康也构成了严重威胁。高效的溶藻细菌是生物法防控赤潮的有效工具之一。【目的】分离得到对中肋骨条藻具有高效溶藻效果的溶藻细菌,并对其进行分子鉴定,研究该菌株的溶藻机理以及溶藻菌所分泌溶藻物质的特性。【方法】采用2216E平板稀释涂布法分离纯化细菌,测定16S rRNA基因序列以鉴定细菌种类,利用显微镜计数溶藻菌处理后的目标藻种计算溶藻率,通过扫描电镜观察溶藻菌对中肋骨条藻的溶藻过程,利用常规生理生化方法研究溶藻菌溶藻物质的特征,并通过透析袋截留法研究溶藻物质分子量大小。【结果】分离得到一株中肋骨条藻高效溶藻菌FDHY-CJ,该菌株属于交替单胞菌属(Alteromonas sp. FDHY-CJ)。该菌株72 h处理赤潮藻结果显示,对中肋骨条藻溶藻率为95.45%,对于其他常见赤潮藻溶藻率低于40%。溶藻菌FDHY-CJ通过胞外分泌物溶藻;溶藻物质的溶藻特性不受反复冻融的影响,但对酸碱性及温度较为敏感;扫描电镜观察结果显示该溶藻菌的溶藻物质直接溶解中肋骨条藻的细胞壁,致使硅质壳打开、内容物流出,达到溶藻的效果;溶藻活性物质具有被乙醇和乙酸乙酯沉淀的特性。【结论】溶藻菌FDHY-CJ对中肋骨条藻具有特异溶藻作用,对其他常见赤潮溶藻效果不明显;该细菌溶藻方式为通过分泌物间接溶藻,溶藻物质属于蛋白类,大小在3.5?10 kD之间。     

SPEXIN生物学功能研究进展

Spexin(SPX)是一种多向性功能肽类物质,它包括信号肽序列、成熟肽片段及两侧的切割位点,广泛表达于多种器官和组织中。SPX在机体能量代谢、食欲、排便、痛觉、水盐平衡等生理功能中发挥重要作用。SPX还可作为循环系统中的内分泌信号和中枢神经系统中的神经递质发挥生物学作用,其潜在的临床应用价值亟待进一步探索。本文就SPX的结构及生物学功能进行综述。     

不同物质对白鬼笔菌丝生长的影响

本文研究了不同物质对白鬼笔菌丝生长的影响。采用平板培养法,以白鬼笔菌株Phallus impudicus-1为供试菌株,分析了5种物质对白鬼笔菌丝生长的影响。供试碳源中,当以红糖为碳源时,白鬼笔菌丝生长速率最快,为1.445mm/d,蔗糖和葡萄糖次之;供试氮源中,当以酵母膏为氮源时,白鬼笔菌丝浓密,菌丝生长速率最快,为1.413mm/d,牛肉蛋白胨、胰蛋白胨次之;供试无机盐中,磷酸二氢钾、氯化钾、氯化钙对白鬼笔菌丝生长有一定促进作用,而硫酸镁、氯化钠的添加不利于菌丝生长。当氯化钾质量浓度为0.5g/L时,白鬼笔菌丝生长速率最大,为1.034mm/d;供试维生素中,V_B1、V_B2、V_B6、V_c对菌丝生长均具有促进作用,其中当V_B6质量浓度为2mg/L时,白鬼笔菌丝生长速率最大,为1.673mm/d。供试植物生长调节剂中,6-BA对菌丝生长促进作用最强,其次为NAA。适宜的培养基配方是促进白鬼笔菌丝生长发育的关键因素。     

胶州湾滨海湿地土壤溶解性有机质的三维荧光特性

为了了解滨海湿地土壤中溶解性有机质的结构特征及来源,2014年1月在胶州湾采集光滩、碱蓬、芦苇和大米草湿地的土壤样品,测定土壤溶解性有机质(DOM)含量,利用三维荧光技术进行光谱分析.结果表明: 胶州湾4种湿地类型土壤溶解性有机碳(DOC)含量表现为大米草湿地＞光滩＞碱蓬湿地＞芦苇湿地,垂直剖面上随土层深度的增加DOC含量均呈减少的趋势.经光谱分析,胶州湾湿地土壤DOM的三维荧光光谱(3DEEMs)中出现了B、T、A、D和C等5种荧光峰,分别代表类酪氨酸、类色氨酸、类富里酸、类可溶性微生物副产物和类腐殖酸5种组分.利用荧光区域积分(FRI)法对5种组分进行定量分析,类色氨酸、类富里酸和类酪氨酸在DOM各组分含量中居前3位,类可溶性微生物副产物和类腐殖酸的含量次之,二者含量差异不显著.DOM的5种组分相互之间均呈显著正相关,与DOC含量呈显著正相关,与总磷、有效磷、总氮有不同程度的相关性.胶州湾4种湿地类型土壤DOM主要由生物相互作用内源产生,且腐殖化程度较低.     

改良腹腔镜下子宫悬吊术加圆韧带缩短术治疗子宫脱垂的临床观察

目的:研究改良腹腔镜下子宫悬吊术加圆韧带缩短术治疗子宫脱垂的临床效果。方法:将从2014年1月至2015年8月在我院妇科接受手术治疗的子宫脱垂患者60例作为研究对象,其中接受改良腹腔镜辅助下实施子宫悬吊术联合圆韧带缩短术者30例纳入观察组,接受阴式子宫切除术者30例纳入对照组,观察并对比两组治疗前后的盆腔器官脱垂定量(POP-Q)分度情况、手术相关指标及手术并发症。结果:与治疗前比,治疗后两组的POP-Q分度均显著改善(P0.05)。观察组的手术时间、术中出血量以及术后留院时长分别显著少于对照组(P0.05)。观察组的手术并发症总发生率是10.00%,显著低于对照组的33.33%(P0.05)。结论:在改良腹腔镜辅助下实施子宫悬吊术联合圆韧带缩短术对子宫脱垂患者的疗效显著,且有利于患者尽快康复,安全性高,值得临床推广应用。     

稳定表达CD19-FLUC-GFP的CT26细胞系的构建及鉴定

实体瘤缺乏明确的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell, CAR-T)治疗靶点。因此,通过慢病毒将已经明确的靶点分子CD19带入实体瘤细胞系,研究CD19 CAR-T细胞对其的杀伤,能够为CAR-T细胞针对实体瘤的治疗提供潜在的支撑。本研究利用三质粒慢病毒系统构建了稳定表达CD19、萤火虫荧光素酶(firefly luciferase, FLUC)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的结肠癌CT26细胞系CT26-CD19-FLUC-GFP。该细胞系与CT26细胞系的生长活性一致。通过流式细胞术检测不同代次CT26-CD19-FLUC-GFP细胞,证实了CT26-CD19-FLUC-GFP细胞连续传代至第5、10、22代后CD19及GFP的稳定表达。进一步证实,连续传代至第22代的CT26-CD19-FLUC-GFP细胞中的CD19 mRNA及FLUC表达水平显著高于对照组CT26细胞。与T细胞相比,CD19 CAR-T细胞能够显著杀伤CT26-CD19-FLUC-GFP细胞及MC38-CD19细胞。CT26-CD19-FLUC-GFP细胞腹腔植入小鼠体内1周后,通过活体成像仪可以检测到腹腔区域的FLUC表达。上述结果表明,成功构建了稳定表达CD19-FLUC-GFP的CT26细胞系,且该细胞系能够被CD19 CAR-T细胞特异性杀伤。     

亚热带人工针叶林叶绿素荧光参数日变化及其与植被生产力的关系

叶绿素荧光技术能够快速、灵敏、无损地测定植物光合功能对环境变化的响应,已成为当前植物光合能力测定的重要技术手段之一,但是探讨亚热带森林叶绿素荧光参数在不同季节日变化特征受环境因子影响的研究较少,更缺乏与植被生产力关系的研究。以亚热带人工针叶林为研究对象,利用2016年叶绿素荧光测量和涡度相关通量观测数据,分析了不同季节湿地松和马尾松叶片荧光参数实际光化学效率(Photochemical efficiency of PSⅡ,Φ_(PSⅡ))和非光化学淬灭(Non-photochemical quenching,NPQ)的日变化特征,并结合增强回归树等统计方法,定量化环境因子对其影响,最后探讨了荧光参数与总初级生产力(Gross primary productivity,GPP)和光能利用率(Light use efficiency,LUE)的关系。结果表明,Φ_(PSⅡ)日变化总体上呈现"U型",早晚高午间低,而NPQ先升后降,午间达到峰值,与Φ_(PSⅡ)的日变化显著负相关。研究发现,光照是影响亚热带人工针叶林Φ_(PSⅡ)日变化最主要的环境因子,Φ_(PSⅡ)随着光合有效辐射(Photosynthetically active radiation,PAR)的升高而降低,PAR对湿地松和马尾松叶片Φ_(PSⅡ)的相对贡献率分别为83.0%和51.1%。PAR对湿地松叶片NPQ日变化的相对贡献率也最高(77.2%),但马尾松的NPQ主要受叶片温度(Leaf temperature,T_(leaf))的影响(59.6%)。此外,GPP与Φ_(PSⅡ)显著负相关,而与NPQ有显著的正相关关系。LUE随着Φ_(PSⅡ)增长,但存在Φ_(PSⅡ)高而LUE低的情况,LUE与NPQ显著负相关,热耗散的比例越高,光能利用效率也相应降低。     

胶州湾滨海湿地枯落物分解过程中枯落物-土壤养分动态

通过为期52 d的室内实验模拟胶州湾滨海湿地米草、碱蓬、芦苇枯落物的分解过程,测定枯落物及土壤中有机碳(TOC)、氮(N)和磷(P)含量,研究枯落物分解过程中枯落物-土壤养分的动态变化。结果表明:52 d的分解过程中,米草、碱蓬和芦苇枯落物碳损失分别占初始总碳含量的24.44%、74.20%和49.75%;土壤中碳发生净积累;米草枯落物中氮发生净积累,碱蓬枯落物中氮发生净释放,芦苇枯落物中氮先积累后释放,后两者枯落物氮损失分别占初始总氮含量的37.93%和4.81%;土壤中氮发生净积累;枯落物和土壤中磷均表现为净释放,米草、碱蓬和芦苇枯落物磷损失分别占初始总磷含量的42.37%、59.27%和28.48%;枯落物-土壤系统中C、N、P的动态变化与枯落物和土壤性质密切相关,这主要是由微生物的活性和养分需求决定的。     

小白及多糖提取、脱蛋白工艺及抗氧化性研究

本研究探讨了小白及多糖提取、脱蛋白工艺及其抗氧化性。以粗多糖提取率为指标,在单因素实验的基础上进行正交试验,探讨微波额定功率百分比、微波时间、浸提温度、浸提时间对粗多糖提取率的影响,得到最佳提取工艺参数:微波功率为额定功率的40%,微波时间60 s,浸提温度70℃,浸提时间2.5 h,在此条件下小白及多糖的得率为38.33%。脱蛋白实验结果显示:酶-Sevag法脱蛋白效果最好,其蛋白质脱除率为80.01%,多糖损失率为24.58%。比较小白及多糖的抗氧化性,得出酶制小白及多糖和小白及粗多糖对DPPH自由基、O■有较好的清除能力,其IC_(50)值分别为24.855、28.948μg/mL,0.212、0.223 mg/mL。研究结果为小白及等药用植物多糖的提取及综合利用提供借鉴。