细菌生物被膜检测与分析方法

细菌生物被膜(Biofilm,BF)由物体表面集聚生长的微生物群落和自身分泌的胞外物质构成,是造成细菌产生多重耐药性的原因之一。可靠、简单和快速的BF检测方法有助于有效预防和治疗相关疾病。基于不同原理的检测与分析方法已广泛用于BF研究中,本文从生物学方法、物理方法和化学方法等方面对BF检测方法进行总结,重点阐述显微镜技术在BF检测中的应用。并介绍了近年来发展的拉曼光谱、质谱成像、MALDI-TOF-MS等新技术,同时比较其优点和局限性,以便研究者找到最合适和最新的研究方法。     

TMD2前断裂CFTR翻译后的连接及氯离子通道功能

CFTR基因突变导致一种常染色体隐性遗传疾病——囊性纤维化(CF)。利用split Ssp DnaB intein的蛋白质反式剪接技术的真核细胞双载体转CFTR基因,旨在研究翻译后水平CFTR的连接,以及由其建立的氯离子通道功能。于CFTR膜内第2个跨膜结构域(TMD2)前的Glu838密码子后将其cDNA断裂为N端和C端两部分,与具有蛋白质反式剪接作用的split Ssp DnaB intein编码序列融合,分别插入到载体pEGFP-N1和pEYFP-N1,构建一对真核表达载体pEGFP-NInt和pEYFP-IntC。用脂质体将这对载体共转染至幼年仓鼠肾细胞(BHK),瞬时表达实验用Western blotting观察CFTR蛋白质的连接,并用膜片钳技术记录Cl-通道电流。结果显示,基因共转染细胞呈现完整的CFTR蛋白条带,膜片钳记录到全细胞Cl-电流和单个Cl-通道开放活性。结果表明split Ssp DnaB intein的蛋白质反式剪接技术可用于双载体共转移CFTR基因,为CF基因治疗应用双腺相关病毒载体(AAV)转运CFTR基因,克服AAV的容量限制提供了依据。     

29个香蕉基因型遗传多样性的SRAP分析

采用SRAP分子标记技术对29个香蕉品种(系)的多样性进行研究,结果显示,64对SRAP引物中筛选出25个多态性较高的引物组合,共扩增出324条条带;UPGAM聚类图显示所有供试的29个香蕉品种(系)可分为2个类群且与基因型相一致;实验结果与形态、农艺性状标记分类基本一致。研究表明,SRAP技术可有效运用于香蕉基因型的遗传和育种研究。     

丹皮酚抗肿瘤作用及其机制研究

丹皮酚主要通过杀伤肿瘤细胞、诱导凋亡,影响肿瘤血管生成,促进IL-2及TNF-α生成,下调COX-2表达发挥抗肿瘤作用;但我们研究证实丹皮酚对体外神经胶质瘤U251细胞及肝癌HepG2细胞无明显抑制作用。丹皮酚作为抗肿瘤有效中药分子开发新药尚需深入的体内外实验研究与探讨。     

舒巴坦与亚胺培南对多重耐药鲍曼不动杆菌体外联合抗菌活性研究

目的评价舒巴坦与亚胺培南对临床分离的80株多重耐药鲍曼不动杆菌的体外联合抗菌活性,为临床治疗多重耐药鲍曼不动杆菌的感染提供实验依据。方法采用琼脂稀释、棋盘设计法测定舒巴坦与亚胺培南单用及联合应用对临床分离的80株多重耐药鲍曼不动杆菌的最小抑菌浓度（MIC）,并计算抑菌浓度指数（FIC）,判定联合效应：FIC≤0．5为协同作用,0．5〈FIC≤1．0为相加作用,1．0〈FIC≤2．0为无关作用,FIC〉2．0为拈抗作用。结果舒巴坦与亚胺培南联州后,两种药物对多重耐药鲍曼不动杆菌的MIC值均显著降低,FIC指数在0—0．5、0．5～1的百分率为12．5％、85．0％。结论舒巴坦与亚胺培南联用对多重耐药鲍曼不动杆菌的抗菌作用主要呈现协同和相加作用,并以相加作用为主。     

棒络新妇生物学特性研究初报

棒络新妇１年一代，以卵在树干，叶片内越冬。卵期１９９－２２０天，４月下旬孵化。幼蛛八龄，８月中旬成熟，９月中旬产卵。幼蛛生活历期１２１．１天，成蛛寿命４７－６２天，雌雄比６：１。成蛛日食量０．７７３７克，是一些害虫的重要天敌。该蛛发生与气候，海拔高度，天敌等关系密切。采取封山林，禁止在林内使用化学农药，移动卵块庳大繁殖。     

东洞庭湖地区野禽驯养繁殖基地的禽流感病毒调查

为了解东洞庭湖地区野禽驯养繁殖基地禽流感病毒感染状况,2011年11月至2013年10月,调查4家野禽驯养繁殖基地的养殖情况,同时采集环境标本(包括新鲜粪便标本和水标本)。利用PCR和病毒分离方法对标本进行检测。部分标本进行了核酸检测,禽流感病毒(AIV)阳性率为36.62%,2012年3月份阳性率最高(47.83%)。粪便标本、水标本的AIV阳性率分别为40.45%、30.19%,二者无统计学差异。共分离到28株AIV病毒,亚型包括H10、H4、H5和N7、N8,集中于11~12月的标本,主要来源于君山区野禽驯养繁殖基地的雁类和野鸭的新鲜粪便标本。野禽驯养基地的环境标本中存在AIV病毒,以A(H10N7)为主,建议对其进行定期监测。     

脑心肌炎病毒VPl蛋白100位氨基酸的突变导致其对小鼠致病性的改变

作为脑心肌炎病毒（EMCV）的天然宿主,感染小鼠能引发多种疾病,其中包括脑炎、心肌炎及糖尿病．本研究利用之前构建完成的EMCV分离毒株BJC3的野生型感染性克隆,采用定点突变方法构建了4个VPl第100位氨基酸突变的突变株感染性克隆（VPt第100位氨基酸分别突变为丝氨酸、丙氨酸、异亮氨酸和脯氨酸）并获得了拯救病毒．虽然各突变病毒及野生型亲本拯救病毒在BHK-21细胞上形成的噬斑大小有所不同,但各病毒在BHK-21细胞上的复制水平未见差异．通过对突变病毒致病性进行系统分析,探究了VPl第100位氨基酸在病毒致病性及感染后疾病表型中所起的重要作用．结果表明,异亮氨酸和脯氨酸突变病毒对小鼠的致死率降低,脑中病毒载量减少且脑组织损伤轻微,而丝氨酸和丙氨酸突变病毒表现了与野生型亲本病毒相似的高致病性．结果证实,EMCVVPl第100位苏氨酸在病毒的体内复制中起重要作用,其突变会导致病毒对小鼠致病性的改变．