两种黄素蛋白对奴卡霉素化合物的催化

【背景】2,4-二酮吡咯烷类化合物奴卡霉素和替达霉素都含有C-10酮基结构,但是该结构是由两种不同的酶短链脱氢酶NcmD和黄素腺嘌呤二核苷酸(flavine adenine dinucleotide, FAD)依赖的脱氢酶TrdL分别催化形成的。然而奴卡霉素生物合成基因簇中的FAD依赖的酶NcmL是否能回补NcmD的功能,以及TrdL能否催化奴卡霉素C-10酮基的形成,尚无相关的实验证据。【目的】通过体外酶催化实验研究NcmL和TrdL对奴卡霉素II和奴卡霉素F的C-10位羟基的催化作用。【方法】通过克隆ncmL和trdL至pET-28a(+)中,然后于大肠杆菌中进行诱导表达。诱导后的蛋白经纯化后,考察了纯化的NcmL和TrdL对奴卡霉素II和奴卡霉素F的催化作用,利用高效液相色谱与高分辨质谱联用技术鉴定了酶反应产物。【结果】NcmL不能催化奴卡霉素II和奴卡霉素F的C-10位羟基的脱氢反应,TrdL能催化奴卡霉素II和奴卡霉素F的C-10位羟基脱氢,分别得到奴卡霉素I和奴卡霉素G。【结论】体外生化研究表明,NcmL不参与奴卡霉素C-10酮基的生物合成反应,TrdL具有较广的底物谱,能催化多种奴卡霉素的C-10位羟基转化为酮基。     

丁香内生死亡谷芽孢杆菌DX78的分离鉴定及其抑菌成分

【背景】植物内生菌往往产生与植物相同、相似或新颖的次生代谢产物,丁香具有广谱优异的抗菌活性,可从中分离到强抑菌作用的内生细菌。【目的】筛选抑制姜瘟病菌的丁香内生细菌并分离其活性成分。【方法】牛津杯法筛选拮抗内生细菌;根据16S rRNA基因序列鉴定菌株;有机溶剂萃取、硅胶柱层析和薄层制备色谱分离活性成分;测定1HNMR、13CNMR和DEPT(135°)并对分离的活性成分进行结构鉴定;滤纸片法和菌丝生长速率法测定活性成分抑菌活性。【结果】共分离到112株丁香内生细菌,从叶中分离最多,占37.4%。其中17株对姜瘟病菌有抑制,DX78菌株抑制作用最好,经鉴定为死亡谷芽孢杆菌,并从其发酵液中追踪分离到邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate, DBP)。DBP对姜瘟病菌、猕猴桃溃疡病菌的MIC分别为0.3 mg/disc、0.25 mg/disc;其还可抑制多种植物病原真菌,特别对苹果炭疽叶枯病菌、番茄灰霉病菌和苹果腐烂病菌的抑制EC50仅分别为3.751、18.568和22.019μg/mL。以苹果炭疽叶枯病菌为靶标菌,戊唑醇抑制毒力约为DBP抑制毒力的4.5倍,DBP抑制毒...     

基于CRISPR/CasX介导的水稻基因组编辑技术的建立

Cas蛋白作为核酸酶发挥其切割活性需要识别特定的PAM序列,如SpCas9识别NGG PAM位点,LbCas12a识别TTTV PAM。已挖掘到新的能够识别TTCN PAM序列的蛋白—CasX蛋白,扩展了基因组编辑技术的编辑范围。本研究利用CasX的两个衍生型蛋白PlmCasX和DpbCasX,建立基于CRISPR/CasX介导的水稻基因编辑系统。通过PEG介导的水稻原生质体瞬时表达分析其编辑活性发现,PlmCasX和DpbCasX两个蛋白能够对水稻内源基因OsCPK16实现有效编辑。后通过水稻稳定遗传转化进一步验证,在TTCA PAM识别位点,DpbCasX蛋白对水稻内源基因OsCPK21的编辑效率为17.5%,PlmCasX蛋白对水稻内源基因OsCPK21的编辑效率为66.07%;在TTCG PAM识别位点,PlmCasX蛋白对OsCPK4的编辑效率为23.21%,而DpbCasX蛋白不能实现有效的基因编辑。并且基于MIDAS方法对PlmCasX蛋白的优化并不能提高其编辑活性。本研究证明了CRISPR/CasX系统在水稻中具有编辑活性,且其能识别TTCR PAM这一特性,扩大了基因...     

液相芯片技术在检测致病相关基因中应用进展

液相芯片是一种重要的高通量分子检测技术,能够快速对一个样本进行多重检测和分析。该文综述了近年来液相芯片检测人类和模式动物的致病基因的应用,发现该技术能够对遗传性疾病、心血管疾病等致病相关基因及其在组织中的表达进行了定量检测,为临床诊疗和致病机制的研究提供了有力的支撑;还能够筛查实验动物的相关致病基因,以期为深入研究疾病与致病基因之间的关系,以及疾病动物模型的构建提供参考。     

猫疱疹病毒1型的分离鉴定及生物学特性分析

为了丰富对猫疱疹病毒1型（Feline herpesvirus-1,FHV-1）基因组变异情况的研究,并为疫苗研发提供候选毒株,本研究对250份猫眼鼻拭子和肺组织样品进行PCR检测,对FHV-1阳性样品进行氨基酸变异和系统发育分析,并进行毒株的分离鉴定及动物回归试验。结果显示,250份临床样品中FHV-1型阳性率为20.8%(52/250)。测序得到10个毒株的8个囊膜蛋白基因序列,氨基酸序列分析显示9个毒株的gI基因发生非同义突变（M165T）,QN-1毒株gD基因发生非同义突变（A342T）。系统发育分析表明毒株间变异小、进化距离短。病原分离鉴定获得1株FHV-1毒株（命名为FHV/BJ-1）,病毒滴度为106.65 TCID50/0.1 mL。动物回归试验结果显示,接毒组家猫在8 d内全部死亡,剖检及HE染色发现肺部病变严重,有淤血及炎性细胞浸润,气管缺少上皮细胞,且鼻组织、气管和肺组织的病毒载量最高。上述结果表明,FHV-1流行毒株基因保守性好,各毒株之间主要囊膜蛋白变异程度低。分离株FHV/BJ-1毒株为强毒株,是疫苗评价的理想毒株,为疫苗候选株的筛选和疫苗的研发奠定了基础。     

混合发酵提高2株海洋微生物菌株抑菌活性的研究

2株抑菌范围不同的海洋微生物菌株,在单独培养条件优化基础上进行混合发酵,并对混合发酵条件进行了优化测试,混合发酵结果有效的提高了菌株产生代谢产物的抑菌活性,最小抑菌浓度由单独发酵的156μL/mL、125μL/mL,单独发酵后混合的250μL/mL、218μL/mL降至32μL/mL、28μL/mL,即代谢产物抑菌活性比单独发酵提高200%,比单独发酵后混合提高300%,2株菌株混合发酵的协同效应大于单独发酵混合后的累加效应,对靶标真菌的致畸作用明显。     

平邑甜茶变异后代的辐射RAPD鉴定

利用RAPD技术分析了经γ射线辐射并选育的5个平邑甜茶种系：A1、B1、C1、C101、C2及C1的芽变C102的遗传变异情况,筛选了从S341到S372 32个引物,找到了各个种系的突变后的特殊谱带,有缺失带也有特异带,说明辐射可以在植物分子水平上产生变异,而且在C1基础上二次辐射的种系C101和辐射后产生的芽变C102,具有更广泛的变异,同时也部份产生回复突变。     

食品微生物检验实验教学模式的实践与探讨

全面阐述食品微生物检验教学中基础性实验、综合性实验、设计性实验及教学实习等各层次教学方法,并且重点讨论了设计性实验教学中所遇到的问题.通过介绍设计性实验教学的各种经验,对设计性实验教学中遇到的难题提出了解决方法和思路.     

盐碱池塘水生大型植物的研究

于１９９８年４月至１９９８年９月对高青盐碱池塘的水生大型植物种类组成,生产力及形影响因子进行了野外调查和试验研究,结果表明高青盐碱池塘共有水生植物１２种。常见的优势种有沉水植物：菹草、角果藻、金鱼藻、;挺水植物、芦苇、荆三棱、莲和香蒲漂浮植物;浮萍,以及大型藻类布氏轮藻。种类少而优势种突出是盐碱池塘大型植物的显特点,有水草池塘与无或水少草池塘相比,透明度大、ＰＨ值高、浮游植物生物量和叶绿素a含量低、营养盐含量也低。在表光照度７２００lx、水温２８－３０℃的条件下,菹草、角果藻和轮藻的毛产量分别为１．７０、１．５６和１．５０mgO2.L^-1.h^-1.g^-1。除光照、水温、ＰＨ等因素外,含盐量和碱度对大型植物的初级生产力具有重要影响,菹草和角果藻的生产力最高时的含直均为３g.L^-1,前适宜的碱度为６．６９mmol.L^-1,而后则为３．８２mmol.L^-1。菹草、角果藻、金鱼藻和浮萍对ＮＨ４－Ｎ的吸收速率相近,而对ＰＯ４－Ｐ的吸收速率则角果藻＞菹草＞浮萍＞金鱼藻。后对盐水水体大型植物特点、菹草生产力及其影响因素,如何防止养鱼池大型植物危害及大型植物与浮游植物的关系进行了讨论。     

青岛崂山的重寄生菌白粉寄生孢及其寄主多样性

2005－2007年从青岛崂山的16科30属35种植物上采集了143份白粉菌样品,经形态鉴定分属于7属22种。其中40份样品中检测到白粉寄生孢Ampelomyces quisqualis,其寄主植物属于8科14属15种,其寄主真菌属于7属10种白粉菌。统计分析发现,多孢穆氏节丝壳上白粉寄生孢的发生率和重寄生强度均为最高;群落组成分析发现,棕丝单囊壳为白粉寄生孢寄主真菌中的优势种,其重要值为89.22%;菊科为白粉寄生孢寄主植物中的优势科,其重要值为97.85%。