全文获取类型
收费全文 | 564篇 |
免费 | 51篇 |
国内免费 | 211篇 |
出版年
2023年 | 18篇 |
2022年 | 12篇 |
2021年 | 15篇 |
2020年 | 13篇 |
2019年 | 12篇 |
2018年 | 19篇 |
2017年 | 15篇 |
2016年 | 19篇 |
2015年 | 24篇 |
2014年 | 34篇 |
2013年 | 28篇 |
2012年 | 38篇 |
2011年 | 27篇 |
2010年 | 16篇 |
2009年 | 24篇 |
2008年 | 24篇 |
2007年 | 23篇 |
2006年 | 30篇 |
2005年 | 32篇 |
2004年 | 22篇 |
2003年 | 21篇 |
2002年 | 18篇 |
2001年 | 21篇 |
2000年 | 28篇 |
1999年 | 36篇 |
1998年 | 25篇 |
1997年 | 26篇 |
1996年 | 23篇 |
1995年 | 26篇 |
1994年 | 21篇 |
1993年 | 15篇 |
1992年 | 24篇 |
1991年 | 13篇 |
1990年 | 14篇 |
1989年 | 8篇 |
1988年 | 10篇 |
1987年 | 5篇 |
1986年 | 4篇 |
1985年 | 8篇 |
1984年 | 2篇 |
1983年 | 7篇 |
1982年 | 2篇 |
1981年 | 2篇 |
1980年 | 2篇 |
1979年 | 3篇 |
1964年 | 2篇 |
1963年 | 3篇 |
1959年 | 3篇 |
1957年 | 2篇 |
1956年 | 2篇 |
排序方式: 共有826条查询结果,搜索用时 31 毫秒
61.
猪圆环病毒2型ORF2基因在昆虫细胞中的表达及其特性 总被引:7,自引:0,他引:7
利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统将圆环病毒2型的ORF2全基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacTM1中,获得重组转移载体pFast-OFR2,再将其转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白菌落筛选得到含ORF2基因的重组穿梭载体Bac-ORF2,以脂质体介导的方法将重组穿梭载体转染sf9细胞,获得重组病毒,命名为Ac-ORF2。间接免疫荧光分析表明,PCV2阳性血清能使Ac-ORF2感染的sf9昆虫细胞呈强的荧光着色; SDS-PAGE与Western-blotting分析可见大小约为28kD的特异性带,表明Ac.ORF2在sf9细胞中成功表达了PCV2-ORF2蛋白。将该表达蛋白纯化并经磷钨酸负染后,通过电镜观察可见形态与PCV2病毒粒子相似的病毒样颗粒(VLPs),其中某些颗粒由于中心浓染而似空衣壳,其直径也为17nm左右。 相似文献
62.
多聚ADP-核糖聚合酶抑制剂对高浓度锌损伤 PC12细胞的保护作用 总被引:2,自引:0,他引:2
探讨多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)对400μmo1/L氯化锌损伤PC12细胞的保护作用及其对锌造成的细胞死亡类型的影响.应用MTT法,免疫细胞化学和Western印迹分别测定PC12细胞的存活率和PARP活性;用Hoechst 33342/PI荧光双染色、膜联蛋白V结合实验及DNA断裂分析等方法检测细胞死亡类型.结果表明在400μmol/L氯化锌的作用下,细胞存活率降至(22.7±4.6)%,PARP活性增强,坏死、凋亡和正常细胞百分比分别为(58.4±6.3)%、(18.0±5.6)%及(23.6±4.2)%;3-AB使细胞存活率提高至(76.9±4.7)%,PARP活性减弱,坏死细胞百分数降至(19.2±5.2)%,而正常和凋亡细胞百分数增加到(43.3±1.9)%和(37.5±6.5)%.实验证明,PARP参与了高浓度锌诱导的PC12细胞损伤,抑制PARP活性可提高细胞的存活率,而这种保护作用在于减少细胞的坏死而非凋亡. 相似文献
63.
伪狂犬病毒gI基因的克隆表达及其对病毒增殖的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
从伪狂犬病毒(PRV)国内地方分离Ea株基因组DNA片段中克隆了完整的gI基因,序列分析结果表明,gI基因编码区全长1101bp,可编码366个氨基酸残基,二级结构预测具有典型I型膜蛋白特征。与GenBank中收录的国外Rice株的同源比较发现,Ea株gI在核苷酸和氨基酸水平上均存在多处突变,尤其是潜在胞浆区中连续两个碱基的缺失导致移码突变,致使gI基因的读码框架后移,从而导致Ea株gI较rice株长16个氨基酸残基。将gI基因克隆到真核表达载体pcDNA31+中的人巨细胞病毒早期启动子下游,构建的真核表达质粒转染PK15细胞,间接免疫荧光检测证实gI获得正确表达。进一步测定天然缺失gI的PRV弱毒Bartha株在表达gI细胞系和空白载体转染的对照细胞系中的蚀斑形成单位(pfu)和组织细胞培养半数感染量(TCID50),结果显示:Bartha株在表达gI细胞系中的pfu和TCID\-\{50\}分别为对照细胞系的164%和200%。说明gI具有促进病毒增殖的功能。 相似文献
64.
65.
66.
叶和春 《Acta Botanica Sinica》2002,(9)
为纪念 植物学报 创刊 50周年,商同主办单位中国植物学会与中国科学院植物研究所的意见,编辑部特邀了国内一些知名学者,通过对我国植物学各分支学科发展历程的回顾与展望,撰写成专文,编辑成纪念文集,以飨读者。并以此专集敬赠给多年来关心和支持 植物学报 的国内外专家学 相似文献
67.
构建SPARc基因过表达载体,转染人骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)-u/胞系SKM-1细胞,探讨SPARc基因过表达对!&MDS细胞系SKM一1细胞凋亡的影响。XpcD—NA.SPARC为引物,PCR扩增SPARc基因;将靶基因克隆入慢病毒载体pGC—GV,构建含有删Rc基因的重组慢病毒载体pGC—GV-SPARC,测序检测正确性;将构建载体pGC-GV-5黝尺C砗专染人MDs细胞系SKM-1,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR检测sKM-1细胞中SPARCmRNA表达,Westernblot检测SPARC蛋白表达,MTS法测定小剂量阿糖胞苷(30ng/mL)对实验组增殖抑制的影响,AnnexinV检测.洲尺c基因转染后对人SKM-1细胞凋亡的影响。结果显示,构建含有SPARc基因的重组慢病毒载体pGC-GV-SPARC转染效率为(64.25±1.42)%;转染后,SPARCmRNA及蛋白表达在靶细胞中较对照组增多。小剂量阿糖胞苷对转染组的增殖抑制率明显高于其他组。SPARC基因转染后人SKM-1细胞凋亡率较未转染组明显增高,加入阿糖胞苷后人SKM-1细胞凋亡率较对照组明显增高。由此说明,作者成功构建了携带.&SPARc基因的慢病毒载体,转染.NSKM-1细胞系后稳定表达SPARC基因,SPARC过表达可抑制细胞增殖,且联合小剂量阿糖胞苷(30ng/mL)更有效地抑制SKM-1细胞的增殖,并诱导其凋亡。 相似文献
68.
69.
目的:评估国产血清半乳甘露聚糖(Galactomannan,GM)检测试剂对侵袭性肺曲霉菌病的诊断价值。方法根据血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌病的诊断标准与治疗原则(第四次修订版)[1]收集临床确诊侵袭性肺曲霉菌病(inva-sive pulmonary aspergillosis,IPA)、临床诊断IPA、拟诊IPA、排除IPA四组病例。采用天津贻诺琦公司酶联免疫吸附法(ELISA)试剂检测纳入的86例患者血清标本的GM浓度,分析其敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)。结果86例病例中,临床诊断27例、拟诊12例、排除47例。在3种不同的阳性判断标准下,敏感性:9444%、9630%、6296%;特异性:5625%、4576%、6441%;PPV:4474%、4483%、4474%;NPV:9643%、9643%、7917%。统计学分析证实标准1(即血清GM值〉095μg/L为阳性,〈075μg/L为阴性,075~095μg/L为灰区,未将灰区加入计算)在3种判断标准中最优,故选择其为最终判断标准。结论该血清GM检测试剂盒诊断性能较好,可以用于侵袭性肺曲霉菌病的辅助诊断。 相似文献
70.