植物中病毒诱导基因沉默的研究进展

研究表明TGS往往与目的基因启动子的甲基化密切相关,RNA沉默则由目的基因的mRNA特异,挫降解引起。植物体中诱导RNA沉默的外部因素有转基因和病毒。与传统的转基因技术相比,病毒诱导的基因沉默（Virus-induced gene silencing VIGS）是一种瞬时表达体系,能在较短的时间里取得良好的效果,目前被广泛地用来研究植物基因的功能。就VIGS的研究进展做一个比较全面的综述。阐述了DNA和RNA病毒诱导植物基因沉默的机理,同时讨论了利用病毒诱导的基因沉默（VIGS）鉴定植物基因功能的优缺点和将来的发展趋势。     

金属螯合亲和层析纯化和复性重组人铜锌超氧化物歧化酶

将重组人铜锌超氧化物歧化酶（rhCu,ZnSOD）包含体（经纯化后纯度达80％以上）以稀释法或透析法初步复性后,分别再经金属螯合亲和层析（MCAC）纯化。结果透析复性样品和稀释复性样品经MCAC纯化后的rhSOD比活是各自上柱前样品比活的2.2倍和5.3倍,蛋白回收率分别为64％和25％,同时两者活性回收率皆大于130％。表明目标蛋白rhSOD在经过MCAC纯化的同时又获得进一步复性。SDS-PAGE显示rhSOD为19kD的单一条带,纯度大于95％,比活达到5000 u/mg左右,同时NBT生物活性染色鉴定显示出很强的超氧化物歧化酶活性。表明MCAC对于复性不完全的rhCu,ZnSOD而言是一种纯化和使其进一步复性的简便省时且有效的方法。该方法为以包含体形式表达的基因重组蛋白的纯化和复性提供了新思路。     

金属螫合亲和层析纯化和复性重组人铜锌超氧化物歧化酶

将重组人铜锌超氧化物歧化酶（rhCu,Zn-SOD）包含体（经纯化后纯度达80％以上）以稀释法或透析法初步复性后,分别再经金属螯合亲和层析（MCAC）纯化。结果透析复性样品和稀释复性样品经MCAC纯化后的rhSOD比活是各自上柱前样品比活的2．2倍和5．3倍,蛋白回收率分别为64％和25％,同时两者活性回收率皆大于130％。表明目标蛋白rhSOD在经过MCAC纯化的同时又获得进一步复性。SDS-PAGE显示rhSOD为19kD的单一条带,纯度大于95％,比活达到5000u／mg左右,同时NBT生物活性染色鉴定显示出很强的超氧化物歧化酶活性。表明MCAC对于复性不完全的rhCu,Zn-SOD而言是一种纯化和使其进一步复性的简便省时且有效的方法。该方法为以包含体形式表达的基因重组蛋白的纯化和复性提供了新思路。     

几种耐热DNA聚合酶的比较

耐热DNA聚合酶广泛应用在PCR技术。本文将常用的几种耐热DNA聚合酶分为三大类,对它们的性质、差异、用途做一个简单的介绍。     

SIM1基因第8外显子的SNP对猪背膘厚的影响

采用PCR-SSCP方法检测了约克夏、杜洛克、皮特兰、长白猪、嘉兴黑猪和金华猪6个品种共169头猪的SIM1基因外显子8的SNP及其基因型频率。结果共发现CC、CT、TT 3种基因型, 其基因型频率在国内外猪品种之间具有较大差异。其中, 国内猪种嘉兴黑猪和金华猪只存在TT基因型, 而国外猪种约克夏、杜洛克、皮特兰、长白猪则都存在3种基因型。用最小二乘法分析SNP对长白猪、约克夏猪和杜洛克猪的背膘厚的效应的结果表明, 纯合基因型个体的背膘厚大于杂合基因型个体。SIM1基因型对国外猪种背膘厚有显著效应(P< 0.05), 并且不同部位效应不同。     

苍术体外抑菌活性的初步研究

对苍术的体外抑菌活性进行初步的研究。通过用体积分数为50％乙醇浸泡、有机溶剂萃取、薄层层析对苍术抑菌活性物质进行初步分析,用纸片法检测其抑菌活性,用琼脂稀释法测最低抑菌浓度（MIC）。结果表明：苍术提取液对金黄色葡萄球菌的抑菌作用较明显,对白色念珠菌和大肠杆菌的抑菌作用次之,其最低抑茵质量浓度分别为0．7g／mL,1．0g/mL和1．2g/mL;以正丁醇作为萃取液抑菌效果最佳,薄层层析实验结果表明,Rf值为0．76的展开点具有抑菌活性。     

JNK1基因沉默对3T3-L1脂肪细胞高分子量脂联素表达的影响

利用短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)构建慢病毒载体,利用慢病毒感染3T3-L1细胞,沉默3T3-L1脂肪细胞的JNK1基因,观察其受抑制后二硫键A氧化还原酶样蛋白(disulfide-bond A oxidoreductase-like protein,Dsb A-L)和高分子量(high molecular weight,HMW)脂联素表达的影响。建立携带sh RNA-JNK1的慢病毒载体,用q PCR和Western blotting从基因和蛋白水平筛选出最佳干扰效果的sh RNA-JNK1慢病毒。利用筛选出的sh RNA-JNK1慢病毒沉默3T3-L1脂肪细胞JNK1基因,通过Western blotting检测Dsb A-L、HMW脂联素的表达,并探讨了JNK1基因沉默是否干扰了AMPK通路的活化。在3T3-L1细胞中筛选出对JNK1沉默效果最佳的sh RNA-JNK1组,抑制率达到60%以上(p0.001)。用sh RNA-JNK1慢病毒感染3T3-L1脂肪细胞,用Western blotting检测,结果 AMPK、P-AMPK、Dsb A-L和HMW表达明显增加(p0.001);在3T3-L1脂肪细胞中sh RNA-JNK1慢病毒逆转了AMPK抑制剂Compound C对AMPK、P-AMPK、Dsb A-L和HMW脂联素表达的抑制。3T3-L1脂肪细胞中,沉默JNK1基因后可促进Dsb A-L和HMW脂联素的表达,且JNK1有可能通过AMPK通路实现对脂联素多聚化的调控。     

野大豆内生假单胞菌YDX26的鉴定及促生抗逆特性

[背景] 野大豆具有栽培大豆所不具有的一些优良特性,这与其特有内生菌有关,已成为当下研究热点。[目的] 对野大豆内生细菌进行分离鉴定,并从中筛选出具有促生和抗逆潜能菌株。[方法] 以组织分离法和涂布划线法进行细菌分离培养;根据形态特征、生理生化特性及基于16S rRNA基因序列系统发育分析对菌株进行菌种鉴定;通过选择性培养基或比色法等对菌株进行促生特性分析,采用水培试验分析菌株对水稻幼苗生长的影响;利用盐胁迫及聚乙二醇（Polyethylene Glycol,PEG）-6000模拟干旱胁迫探究菌株抗逆性。[结果] 分离得到一株编号为YDX26的细菌,基于菌株形态、理化特性和16S rRNA基因序列系统发育分析,将菌株YDX26初步鉴定为假单胞菌（Pseudomona s sp.）。该菌株溶磷量为46.12 mg/L,吲哚-3-乙酸（Indole-3-Acetic Acid,IAA）活性为19.97 μg/mL, 1-氨基环丙烷-1-羧酸（1-Amino-Cyclopropane-1-Carboxylic Acid,ACC）脱氨酶活性为3.95μmol/（mg·h）。菌株YDX26对水稻幼苗株高、根长、地上部干重与地下部干重均有明显促进作用,分别提高了17.34%、12.19%、5.32%和10.70%。相较于对照菌株DX22,在盐胁迫和干旱胁迫下,菌株YDX26表现出较好的耐盐和抗旱能力。[结论] 野大豆内生细菌菌株YDX26具有较好的促生、耐盐和抗旱能力,可以作为农业生产上新的菌种资源。     

stNI同功酶限制 修饰系统基因的表达检测和定位分析

鉴定了Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１和ＪＭ１１０的部分遗传标记,作为受体菌分别用于ＢｓｔＮＩ同功酶限制－修饰系统中限制性内切酶（Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ,简称Ｒ）基因和甲基化酶（Ｍｅｔｈｙｌａｓｅ,简称Ｍ）基因表达的检测。用外切酶ＩＩ单向删切含ＲＭ基因的ＤＮＡ片段,获得２３个缺失突变亚克隆。通过检测各亚克隆表达的Ｒ酶和Ｍ酶活性,将Ｒ和Ｍ基因分别定位在距克隆位点ＰｓｔＩ的０２→１４ｋｂ和１５→３．３ｋｂ范围内。分析表明：该系统属于Ｉ类限制修饰系统,两个基因受控于不同的启动子;该系统与Ｅ．Ｃｏｌｉ染色体编码的胞嘧啶ＤＮＡ甲基转移酶（Ｄｃｍ）的识别序列相同,后者的甲基化作用也能阻止Ｒ酶的切割。Ｒ＋Ｍ－的重组质粒对Ｄｃｍ＋和Ｄｃｍ－的宿主都是致死性的,这说明在进化过程中,与Ｒ基因紧密连锁的Ｍ基因对系统的存在至关重要     

中国东部爵床科一个新记录种

报道了浙江省发现的爵床科（Acanthaceae）马蓝属（Strobilanthes Blume）新记录植物——奇瓣马蓝（Strobilanthes cognata Benoist）。至此，浙江省记录到的马蓝属植物增加至8种。奇瓣马蓝分布于中国中西部（湖北、湖南、贵州），在浙江省为新记录，且是该物种在中国最东端以及海拔最低的分布记录。该发现为进一步丰富和补充浙江省野生植物资源物种多样性提供了宝贵资料。凭证标本保存于江苏省·中国科学院植物研究所标本馆（NAS）。